【摘要】：越來越多的研究表明,慢性炎癥可以導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。其中,微小RNA(microRNA,miRNA)在兩者相關(guān)信號通路的調(diào)控中發(fā)揮了不可忽視的作用。miRNA是一種非編碼短鏈RNA,其能夠通過與靶mRNA的3'-UTR結(jié)合,抑制靶mRNA的翻譯或降解靶mRNA,從而調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、遷移、生長、凋亡等行為。而PI3K/AKT信號通路在哺乳動物體內(nèi)是非常重要的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑,與細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、運(yùn)動、代謝以及疾病的發(fā)生、發(fā)展等過程密切相關(guān)。因此,探討miRNA與PI3K/AKT信號通路的關(guān)系及兩者在炎癥與腫瘤發(fā)展過程中的作用,將會對炎癥和腫瘤機(jī)制的闡明產(chǎn)生很大的價(jià)值。為探討miR-338-3p抑制痤瘡(炎癥模型)與肺癌(腫瘤模型)發(fā)生發(fā)展的機(jī)理,并研究其與PI3K/AKT信號通路之間的關(guān)系。本課題的主要研究內(nèi)容和結(jié)論如下:1.通過TNF-α誘導(dǎo)痤瘡構(gòu)建體外炎癥模型,驗(yàn)證在該炎癥模型中TNF-αα與促進(jìn)皮脂腺細(xì)胞中的脂滴形成的關(guān)系。將miR-338-3p轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后,利用流式細(xì)胞術(shù)和TLC分析實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-338-3p可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的脂滴形成。利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)則觀察到PI3K/AKT信號通路中AKT不同位點(diǎn)(Ser473,Thr308)的磷酸化水平幅度下降,表明miR-338-3p可以抑制皮脂腺細(xì)胞中PI3K/AKT的信號傳導(dǎo)。當(dāng)加入PI3K、AKT的特異性抑制劑阻斷其活性后發(fā)現(xiàn),TNF-α所誘導(dǎo)的脂肪生成量顯著降低,恢復(fù)PI3K/AKT的活性后能逆轉(zhuǎn)miR-338-3p處理的TNF-α所誘導(dǎo)的脂肪生成量,這表明PI3K/AKT信號通路參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控過程,且PI3K/AKT活性的下調(diào)會降低脂肪的生成,抑制了炎癥反應(yīng)。將miR-338-3p的潛在靶標(biāo)PREX2a的siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后,可明顯降低細(xì)胞內(nèi)的p-AKT(Ser473)和p-AKT(Thr308)表達(dá)水平,而PREX2a 的過表達(dá)又可逆轉(zhuǎn) miR-338-3p 所抑制的 p-AKT(Ser473)和 p-AKT(Thr308)表達(dá)水平和脂肪生成,表明PREX2a參與了 PI3K/AKT信號通路的調(diào)節(jié)。此外,miR-338-3p對從Tg-huTNFα小鼠發(fā)展的皮脂腺脂肪生成顯示出明顯的抑制作用。以上結(jié)果表明,miR-338-3p可以通過下調(diào)PREX2a的表達(dá),阻斷AKT信號傳導(dǎo),抑制TNF-αα誘導(dǎo)的脂肪的形成,從而抑制炎癥反應(yīng)。2.探討miR-338-3p通過AKT/β-catenin信號傳導(dǎo)在肺癌細(xì)胞(A549)侵襲中的作用及其機(jī)制。首先,將miR-338-3p轉(zhuǎn)染進(jìn)入肺癌細(xì)胞以后,經(jīng)MTT與流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn),miR-338-3p可以降低A549細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Transwell實(shí)驗(yàn)則證實(shí)了miR-338-3p能夠明顯減弱A549細(xì)胞的侵襲。基因芯片檢測結(jié)果顯示,miR-338-3p上調(diào)A549細(xì)胞中216個(gè)基因,下調(diào)147個(gè)基因,并且不同表達(dá)的基因富集于多種信號途徑,包括AKT信號和β-catenin信號。免疫熒光染色和蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,miR-338-3p 可以下調(diào) AKT 信號中的 p-AKT(Ser473)和 p-AKT(Thr308)以及 β-catenin 信號中的p-β-catenin(Ser552)表達(dá)水平,從而抑制AKT/β-catenin信號通路中的信號傳導(dǎo)。此外,miR-338-3p對從KrasG12D小鼠發(fā)展的原發(fā)性腫瘤顯示出明顯的抑制作用。以上結(jié)果表明,miR-338-3p主要是通過下調(diào)AKT/β-catenin信號傳導(dǎo)從而抑制肺癌細(xì)胞侵襲。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R758.733;R734.2
【圖文】：

逡逑圖２－１皮脂腺細(xì)胞中的脂質(zhì)逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｌｉｐｉｄｓ邋ｉｎ邋ｓｅｂａｃｅｏｕｓ邋ｇｌａｎｄ邋ｃｅｌｌｓ逡逑邐Ｃｏｎｔｒｏｌ邐ＴＮＦ－ａ邐ＴＮＦ－ａ邋＋邋ＭｉｃｒｏＲＮＡ－３３８逡逑ＭｗＰＰｐＢｔ逡逑■邋■逡逑圖２－２皮脂腺細(xì)胞經(jīng)ＴＮＦ－ａ和ｍｉＲ－３３８－３ｐ處理后的脂肪生成量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｆａｔ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｅｂａｃｅｏｕｓ邋ｇｌａｎｄ邋ｃｅｌｌｓ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＴＮＦ－ａ邋ａｎｄ邋ｍｉＲ－３３８－３ｐ逡逑采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同處理的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組，流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，用ＴＮＦ－ａ處逡逑理的皮脂腺細(xì)胞組的脂肪生成含量高，并且脂肪含量遠(yuǎn)高于其它實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組，進(jìn)一步逡逑表明成功建立ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)的痤瘡炎癥體外模型，而ＴＮＦ－ｏｔ＋ｍｉＲＮＡ組與無ＴＮＦ－ａ組處逡逑理的皮脂腺細(xì)胞的脂肪生成量相似，即ｍｉＲ－３３８－３ｐ能減少脂肪生成量至與無ＴＮＦ－ａ處逡逑理對照細(xì)胞組脂肪生成量成相似的水平（圖２－３）。因此可見，ｍｉＲ－３３８－３ｐ可以減弱人逡逑皮脂腺細(xì)胞中ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)的脂肪生成。逡逑Ｎｏ－ｓｔａｉｎｉｎｇ逡逑，００－１邐．邐．邐？邋Ｓ逡逑ｅ0邐Ａ邐ｋ逡逑翁逡逑ｏ邋＾０２邐１０３邐１０４邐１０５逡逑圖２－３皮脂腺細(xì)胞經(jīng)ＴＮＦ－ｃｔ和ｍｉＲ－３３８－３ｐ處理后的脂肪生成量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ａｄｉｐｏｓｅ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｅｂａｃｅｏｕｓ邋ｇｌａｎｄ邋ｃｅｌｌｓ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＴＮＦ－ａ邋ａｎｄ邋ｍｉＲ－３３８－３ｐ逡逑基于以上結(jié)果

ＭｗＰＰｐＢｔ逡逑■邋■逡逑圖２－２皮脂腺細(xì)胞經(jīng)ＴＮＦ－ａ和ｍｉＲ－３３８－３ｐ處理后的脂肪生成量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｆａｔ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｅｂａｃｅｏｕｓ邋ｇｌａｎｄ邋ｃｅｌｌｓ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＴＮＦ－ａ邋ａｎｄ邋ｍｉＲ－３３８－３ｐ逡逑采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同處理的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組，流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，用ＴＮＦ－ａ處逡逑理的皮脂腺細(xì)胞組的脂肪生成含量高，并且脂肪含量遠(yuǎn)高于其它實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組，進(jìn)一步逡逑表明成功建立ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)的痤瘡炎癥體外模型，而ＴＮＦ－ｏｔ＋ｍｉＲＮＡ組與無ＴＮＦ－ａ組處逡逑理的皮脂腺細(xì)胞的脂肪生成量相似，即ｍｉＲ－３３８－３ｐ能減少脂肪生成量至與無ＴＮＦ－ａ處逡逑理對照細(xì)胞組脂肪生成量成相似的水平（圖２－３）。因此可見，ｍｉＲ－３３８－３ｐ可以減弱人逡逑皮脂腺細(xì)胞中ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)的脂肪生成。逡逑Ｎｏ－ｓｔａｉｎｉｎｇ逡逑，００－１邐．邐．邐？邋Ｓ逡逑ｅ0邐Ａ邐ｋ逡逑翁逡逑ｏ邋＾０２邐１０３邐１０４邐１０５逡逑圖２－３皮脂腺細(xì)胞經(jīng)ＴＮＦ－ｃｔ和ｍｉＲ－３３８－３ｐ處理后的脂肪生成量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ａｄｉｐｏｓｅ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｅｂａｃｅｏｕｓ邋ｇｌａｎｄ邋ｃｅｌｌｓ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＴＮＦ－ａ邋ａｎｄ邋ｍｉＲ－３３８－３ｐ逡逑基于以上結(jié)果，我們又進(jìn)一步利用薄層色譜法（ＴＬＣ）分析皮脂腺細(xì)胞中皮脂生成逡逑成分的變化。從圖２－４中可以看出

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2713635