【摘要】：原發(fā)性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)在世界范圍內(nèi)尤其在我國是最常見的死亡率最高的惡性腫瘤之一。HCC發(fā)生的最主要的原因是乙型肝炎病毒(HBV)感染。乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)是HBV編碼的病毒蛋白,在HBV相關(guān)肝癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用。轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)是一種廣泛參與包括肝癌在內(nèi)的多種生物學(xué)進(jìn)程的細(xì)胞因子。去整合素金屬蛋白酶17(ADAM17)是一種多結(jié)構(gòu)域的膜蛋白,它在多種惡性腫瘤組織中異常表達(dá),與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。近年來,越來越多的研究發(fā)現(xiàn),HBx蛋白與TGF-β在HCC的進(jìn)程中可以相互影響,共同促進(jìn)疾病進(jìn)展,但具體分子機(jī)制并不十分清楚。本文旨在探索HBx激活TGF-β信號通路下游ADAM蛋白進(jìn)而影響HCC發(fā)生的機(jī)制。首先,我們通過免疫組化檢測了肝癌臨床樣本及癌旁組織中HBx與TGF-β通路下游靶基因ADAM17的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)二者均在肝癌組織中高表達(dá),且表達(dá)具有正相關(guān)性。接下來在肝癌細(xì)胞株中梯度轉(zhuǎn)染HBx表達(dá)質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)ADAM17的表達(dá)隨HBx轉(zhuǎn)染量增加而升高。在此基礎(chǔ)上,我們采用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)HBx能夠顯著激活A(yù)DAM17的啟動子。上述結(jié)果表明,肝癌細(xì)胞中ADAM17的過表達(dá)可能與HBV病毒自身編碼的HBx蛋白的表達(dá)有關(guān)。接下來為了驗(yàn)證HBx影響ADAM17表達(dá)的分子機(jī)制,首先我們采用TGF-β1與SIS-3聯(lián)用處理肝癌細(xì)胞,Westernblot檢測ADAM家族蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)ADAM17的表達(dá)明顯受TGF-β1/Smad3通路的影響。進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)HBx與TGF-β1能夠共激活TGF-β1信號通路與ADAM17的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫共沉淀檢測結(jié)果顯示,HBx可以與TGF-β1通路中Smad家族蛋白相結(jié)合。接下來我們構(gòu)建AP-1沉默的肝癌細(xì)胞株,檢測發(fā)現(xiàn)抑制肝癌細(xì)胞中AP-1表達(dá)能夠促進(jìn)ADAM17的表達(dá),報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)HBx和TGF-β1能夠逆轉(zhuǎn)AP-1對TGF-β信號通路的抑制情況。本部分結(jié)果表明,肝癌細(xì)胞中ADAM17的表達(dá)可能受HBx介導(dǎo)的TGF-β1信號通路的激活。最后,我們建立了ADAM17沉默的肝癌穩(wěn)定細(xì)胞株,檢測發(fā)現(xiàn)沉默肝癌細(xì)胞中ADAM17的表達(dá)能夠顯著抑制細(xì)胞的增殖與遷移能力。小動物活體成像與病理染色結(jié)果顯示,抑制ADAM17的表達(dá)能夠明顯降低肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。結(jié)果說明,ADAM17的表達(dá)與肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)HBx通過激活TGF-β信號通路調(diào)控ADAM17的表達(dá),進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。揭示了HBx在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用,首次發(fā)現(xiàn)ADAM17在肝癌細(xì)胞中表達(dá)的可能調(diào)控機(jī)制,為人類對惡性腫瘤致癌機(jī)制的認(rèn)識,乃至新型靶向藥物的開發(fā),均具重要的參考價(jià)值
【圖文】：

TGF-β信號通路圖

圖 2.2ADAM17 在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)情況Fig.2.2 Protein levels of ADAM17 in HCC tumors and paracancerous tissues.(a) IHC staining of HBx in HCC tumors and paracancerous tissues. (b) ADAM17 protein levels are elevat-ed in HCC tumors. The protein expression was scored by Immunoreactivescore (IRS). (c) Statistical anal-
【學(xué)位授予單位】：華僑大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ming Geng;Xuan Xin;Li-Quan Bi;Lu-Ting Zhou;Xiao-Hong Liu;;Molecular mechanism of hepatitis B virus X protein function in hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年38期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陸海生;JNK信號通路介導(dǎo)HBx對RXRα的磷酸化并促進(jìn)HCC進(jìn)程的分子機(jī)制[D];廈門大學(xué);2014年

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本文編號：2709059