【摘要】：目的:肝癌是一種惡性程度較高的消化系統(tǒng)腫瘤,其治療方式以手術(shù)為核心,但因其發(fā)病隱匿,只有少數(shù)患者就診時(shí)可以獲得手術(shù)機(jī)會(huì)�；煘橥砥诟伟┲委煼绞街�,但大部分患者無(wú)法承受化療藥物全身毒副作用,故限制了其臨床應(yīng)用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)超聲造影劑可作為載體實(shí)現(xiàn)藥物靶向遞送,從而減少藥物毒副作用。因此,本文研究制備RGD靶向載阿霉素納米泡減少化療副作用,增敏晚期肝癌的化療效果。方法:(1)采用薄膜水合法制備空白磷脂納米泡(DP)、RGD磷脂納米泡(RDP)及RGD載DOX磷脂納米泡(RDPD),通過(guò)透射電子顯微鏡及光學(xué)顯微鏡觀察其形態(tài),粒徑檢測(cè)儀檢測(cè)其粒徑大小、粒徑分布情況及表面電位情況,利用酶標(biāo)儀測(cè)量RDPD載藥量及包封率,評(píng)價(jià)其載藥能力。(2)檢測(cè)DP納米泡、RDP納米泡及RDPD納米泡體外顯影效果。應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)原理檢測(cè)以上納米泡體外穩(wěn)定性,并繪制體外穩(wěn)定性曲線(xiàn)。(3)利用超聲診斷儀檢測(cè)其體內(nèi)穩(wěn)定性及測(cè)定TIC曲線(xiàn),評(píng)估三種造影劑達(dá)峰強(qiáng)度、達(dá)峰時(shí)間及曲線(xiàn)下面積(AUC),并比較三種納米泡以上指標(biāo)差異。(4)利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),檢測(cè)DP、RDP、RDPD納米泡體內(nèi)急性毒性及細(xì)胞毒性,評(píng)價(jià)以上三種納米泡生物安全性。(5)建立裸鼠肝癌皮下瘤模型,利用超聲診斷儀評(píng)價(jià)DP、RDP及RDPD納米泡腫瘤靶向性。采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)正常裸鼠肝臟及皮下瘤αvβ3整合素陽(yáng)性表達(dá)情況。(6)將成功建模荷瘤鼠分為5組,分別給予同等劑量生理鹽水、空白納米泡、RGD納米泡、RGD攜DOX納米泡、DOX溶液,比較各組間給藥前后腫瘤大小、超聲彈性成像及組織病理差異。結(jié)果:(1)采用薄膜水合法成功制備空白磷脂納米泡(DP)、RGD磷脂納米泡(RDP)及RGD攜DOX磷脂納米泡(RDPD),其粒徑分別為292 nm、303 nm、322 nm,其電位分別為-3.69 mv、-2.69 mv、-2.68 mv。RDPD載藥量為3.02%,包封率為71%,載藥能力良好。(2)DP、RDP、RDPD納米泡均可實(shí)現(xiàn)體外顯影,且顯影效果良好。初始納米泡濃度三組間無(wú)明顯差異(P0.05)。(3)評(píng)估DP、RDP、RDPD三種造影劑達(dá)峰強(qiáng)度、達(dá)峰時(shí)間及AUC曲線(xiàn)下面積均無(wú)明顯差異(P=0.176、0.100、0.7330.05)。體內(nèi)穩(wěn)定性DP與RDP、RDPD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046、0.0380.05)。(4)DP與RDP不具有細(xì)胞毒性,而DOX溶液與RDPD具有細(xì)胞毒性。DOX溶液組與RDPD組細(xì)胞毒性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。DP與RDP無(wú)明顯體內(nèi)毒性,DOX溶液與RDPD均有體內(nèi)毒性。RDPD組體內(nèi)毒性與DOX差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.04930.05)。病理表現(xiàn)可見(jiàn)DOX組具有心臟毒性,其余各組病理表現(xiàn)均正常。(5)RDP及RDPD組空化前后db值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007、0.0040.05),RDP、RDPD組空化前后db值差值與DP組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032、0.0080.05)。免疫組化結(jié)果表明腫瘤組織αvβ3表達(dá)陽(yáng)性,而肝臟組織表達(dá)極低。(6)RDPD組與DOX組腫瘤體積變化較空白組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),RDPD組較DOX組腫瘤體積變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0080.05)。RDPD組與DOX組瘤體硬度較空白組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001、0.0020.05),RDPD組較DOX組瘤體硬度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0110.05)。各組瘤體病理結(jié)果顯示:RDPD組腫瘤壞死最為明顯,DOX組可見(jiàn)部分壞死,RDP組可見(jiàn)極少壞死,DP組與空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯壞死區(qū)域。結(jié)論:1、采用薄膜水合法可制備空白磷脂納米泡、RGD靶向納米泡及RGD攜載DOX納米泡,其粒徑分布均勻,體內(nèi)外穩(wěn)定性、成像效果均較好,載藥量與包封率尚佳�？瞻准{米泡及RGD納米泡不具有體內(nèi)毒性及細(xì)胞毒性,但RGD載DOX納米泡具有細(xì)胞毒性。相比于DOX溶液,RDPD體內(nèi)毒性較低,可實(shí)現(xiàn)化療藥物體內(nèi)減毒。2、肝癌新生血管avβ3受體表達(dá)程度較高,而正常肝臟組織avβ3受體表達(dá)極低。攜RGD肽納米泡載體具有肝癌靶向性,可靶向肝癌新生血管,結(jié)合UTMD技術(shù),可實(shí)現(xiàn)化療藥物靶向釋放,從而提高腫瘤局部血藥濃度。起到增敏晚期肝癌化療效果的作用。但本實(shí)驗(yàn)未對(duì)其機(jī)制進(jìn)行研究,故后期仍需進(jìn)一步探索。
【圖文】：

圖 2-1 免疫組化流程圖2.13 裸鼠肝癌皮下瘤載藥納米泡與全身化療治療效果對(duì)比如上述方式建立裸鼠肝癌皮下瘤模型，待瘤體大小到達(dá)預(yù)期大小后，將建模成功的荷瘤裸鼠 35 只隨機(jī)分為 5 組，分別為空白對(duì)照組、DP 組、RDP 組、RDPD 組及 DOX 溶液組，每組給予干預(yù)如下：所有裸鼠均在相對(duì)無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行操作，稱(chēng)重后利用 4 %水合氯醛腹腔注射麻醉。酒精棉球擦拭尾部，待尾靜脈充分?jǐn)U張后置管。利用超聲診斷儀測(cè)量皮下瘤徑線(xiàn)；彈性成像測(cè)量瘤體硬度，，并留圖。1）空白對(duì)照組：經(jīng)尾靜脈給予 0.05 ml 無(wú)菌生理鹽水，每三天干預(yù)一次，共干預(yù) 4 次。2）DP 組：以 60 mg/kg 凍干粉劑量配制 DP 混懸液，經(jīng)尾靜脈給予 0.05 ml。通過(guò)超聲診斷儀觀察瘤體造影情況后，調(diào)至 flash 模式開(kāi)啟空化功能（MI=1.0)。

津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 肝癌RGD靶向載Dox聲學(xué)造影劑空化增敏化療的實(shí)驗(yàn)研究 結(jié) 果.1 空白 DP、RDP 及 RDPD 納米泡的制備及表征.1.1 鏡下形態(tài)、粒徑分布及電位采用薄膜水合法成功制備出空白納米泡（DP）、RGD 靶向納米泡（RDP） RGD 載 DOX 靶向納米泡（RDPD）,其凍干粉分別為白色、白色及粉色粉末，地均勻，無(wú)較大顆粒狀物質(zhì)如圖 3-1。凍干粉可保存較長(zhǎng)時(shí)間，其水溶性佳，用 10 %甘油 PBS 液溶解，振蕩即可得相應(yīng)納米泡溶液如圖 3-2。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 胡春艷;陳卓;務(wù)圣潔;樊帆;秦玉;王海;朱敦皖;張琳華;;載阿霉素聚合物納米粒的制備、表征與體內(nèi)外性能研究[J];國(guó)際生物醫(yī)學(xué)工程雜志;2016年04期

2 房良華;姜藻;錢(qián)夢(mèng)

本文編號(hào)：2689461