【摘要】：背景與目的:肺癌是全球最常見和最致命的惡性腫瘤之一。其中非小細(xì)胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)占肺癌所有類型的80%~85%。盡管肺癌的治療水平和治療效果在不斷提升,但由于大多數(shù)肺癌患者在確診時(shí)腫瘤細(xì)胞就已經(jīng)發(fā)生較強(qiáng)的侵襲以及血行和淋巴轉(zhuǎn)移,甚至步入終末期,且缺乏有效的治療措施,患者中位生存期不足1年,5年生存率不足5%。非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的、多因素調(diào)控的動(dòng)態(tài)過程,其分子機(jī)制尚不明確。因此,開展腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究,對(duì)于開發(fā)阻止非小細(xì)胞肺癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移的治療新方法具有重要的意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過200nt,具有調(diào)控基因表達(dá)作用的非編碼RNA。lncRNA可以參與在多個(gè)水平調(diào)控基因的表達(dá),影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育,并且與疾病,尤其是腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有著密切的聯(lián)系。在前期的實(shí)驗(yàn)中,本課題組采用lncRNA基因芯片技術(shù)篩選出多個(gè)差異性表達(dá)的lncRNA,lncRNA-KAT7是其中表達(dá)差異較大的lncRNA之一。本研究旨在檢測(cè)NSCLC患者lncRNA-KAT7基因在肺癌組織及癌旁正常肺組織標(biāo)本中的表達(dá)情況,并分析其與NSCLC患者臨床病理特征的相關(guān)性,進(jìn)而了解lncRNA-KAT7在非小細(xì)胞肺癌中可能發(fā)揮的生物學(xué)功能,尋找其作用機(jī)制。方法:標(biāo)本來源:懫用目的抽樣的方法收集2017年2月-2017年6月,常德市第一人民醫(yī)院和郴州市第一人民醫(yī)院胸外科住院患者外科手術(shù)切除的NSCLC原發(fā)病灶的癌組織及相匹配的癌旁正常肺組織標(biāo)本(癌旁的正常組織距離腫瘤組織邊緣5cm以上),成功收集到22例鱗癌組織標(biāo)本和16例腺癌組織標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)方法:1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測(cè)38例NSCLC原發(fā)病灶的癌組織及癌旁正常肺組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達(dá)情況,并結(jié)合NSCLC患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析。2.選取肺癌細(xì)胞A549正常細(xì)胞培養(yǎng),待培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%-90%左右,用0.25%胰酶消化并傳代,收取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.成功構(gòu)建lncRNA-KAT7的過表達(dá)載體pcDNA-lncRNA-KAT7,并用Lip2000脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法將pcDNA-lncRNA-KAT7轉(zhuǎn)染到肺癌細(xì)胞株A549中,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的lncRNA-KAT7相對(duì)表達(dá)水平。4.采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)lncRNA-KAT7對(duì)A549細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果:1.NSCLC組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達(dá)水平顯著低于配對(duì)的癌旁正常肺組織(P0.05),lncRNA-KAT7在NSCLC組織中的平均表達(dá)倍數(shù)是癌旁正常肺組織的0.55±0.88倍。以lncRNA-KAT7在NSCLC組織中的表達(dá)量與配對(duì)的癌旁正常組織中的表達(dá)量的比值1為分界標(biāo)準(zhǔn),38例NSCLC患者中32例(84%)的癌組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達(dá)水平明顯低于配對(duì)的癌旁正常肺組織;2.NSCLC組織中l(wèi)ncRNA-KAT7表達(dá)水平與患者年齡和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),與NSCLC組織學(xué)類型有顯著相關(guān)性(P0.05),而與患者性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度無明顯相關(guān)性(P0.05)。3.過表達(dá)lncRNA-KAT7的A549細(xì)胞株中的lncRNA-KAT7表達(dá)水平明顯高于轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞株,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞株比較,A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA-lncRNA-KAT7后遷移和侵襲能力明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.lncRNA-KAT7在NSCLC組織中表達(dá)顯著下調(diào)。NSCLC組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達(dá)水平與患者年齡和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),與NSCLC組織學(xué)類型有顯著相關(guān)性(P0.05),而與患者性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度無明顯相關(guān)性(P0.05)。2.lncRNA-KAT7能夠抑制NSCLC細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
【圖文】：

空載體vector

lncRNA-KAT7序列特征
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2685910