【摘要】：背景與目的:肺癌是全球最常見和最致命的惡性腫瘤之一。其中非小細胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)占肺癌所有類型的80%~85%。盡管肺癌的治療水平和治療效果在不斷提升,但由于大多數肺癌患者在確診時腫瘤細胞就已經發(fā)生較強的侵襲以及血行和淋巴轉移,甚至步入終末期,且缺乏有效的治療措施,患者中位生存期不足1年,5年生存率不足5%。非小細胞肺癌轉移是一個復雜的、多因素調控的動態(tài)過程,其分子機制尚不明確。因此,開展腫瘤轉移機制研究,對于開發(fā)阻止非小細胞肺癌發(fā)展和轉移的治療新方法具有重要的意義。長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一類轉錄本長度超過200nt,具有調控基因表達作用的非編碼RNA。lncRNA可以參與在多個水平調控基因的表達,影響細胞的生長和發(fā)育,并且與疾病,尤其是腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后有著密切的聯(lián)系。在前期的實驗中,本課題組采用lncRNA基因芯片技術篩選出多個差異性表達的lncRNA,lncRNA-KAT7是其中表達差異較大的lncRNA之一。本研究旨在檢測NSCLC患者lncRNA-KAT7基因在肺癌組織及癌旁正常肺組織標本中的表達情況,并分析其與NSCLC患者臨床病理特征的相關性,進而了解lncRNA-KAT7在非小細胞肺癌中可能發(fā)揮的生物學功能,尋找其作用機制。方法:標本來源:懫用目的抽樣的方法收集2017年2月-2017年6月,常德市第一人民醫(yī)院和郴州市第一人民醫(yī)院胸外科住院患者外科手術切除的NSCLC原發(fā)病灶的癌組織及相匹配的癌旁正常肺組織標本(癌旁的正常組織距離腫瘤組織邊緣5cm以上),成功收集到22例鱗癌組織標本和16例腺癌組織標本。實驗方法:1.采用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測38例NSCLC原發(fā)病灶的癌組織及癌旁正常肺組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達情況,并結合NSCLC患者的臨床病理特征進行相關性分析。2.選取肺癌細胞A549正常細胞培養(yǎng),待培養(yǎng)瓶中細胞生長融合至80%-90%左右,用0.25%胰酶消化并傳代,收取對數生長期的細胞進行實驗。3.成功構建lncRNA-KAT7的過表達載體pcDNA-lncRNA-KAT7,并用Lip2000脂質體瞬時轉染的方法將pcDNA-lncRNA-KAT7轉染到肺癌細胞株A549中,采用實時熒光定量PCR方法檢測轉染后細胞的lncRNA-KAT7相對表達水平。4.采用Transwell實驗檢測lncRNA-KAT7對A549細胞遷移和侵襲能力的影響。結果:1.NSCLC組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達水平顯著低于配對的癌旁正常肺組織(P0.05),lncRNA-KAT7在NSCLC組織中的平均表達倍數是癌旁正常肺組織的0.55±0.88倍。以lncRNA-KAT7在NSCLC組織中的表達量與配對的癌旁正常組織中的表達量的比值1為分界標準,38例NSCLC患者中32例(84%)的癌組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達水平明顯低于配對的癌旁正常肺組織;2.NSCLC組織中l(wèi)ncRNA-KAT7表達水平與患者年齡和淋巴結轉移呈負相關,與NSCLC組織學類型有顯著相關性(P0.05),而與患者性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度無明顯相關性(P0.05)。3.過表達lncRNA-KAT7的A549細胞株中的lncRNA-KAT7表達水平明顯高于轉染空載體的細胞株,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Transwell小室遷移和侵襲實驗結果表明:與轉染空載體的細胞株比較,A549細胞轉染pcDNA-lncRNA-KAT7后遷移和侵襲能力明顯下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1.lncRNA-KAT7在NSCLC組織中表達顯著下調。NSCLC組織中l(wèi)ncRNA-KAT7的表達水平與患者年齡和淋巴結轉移呈負相關,與NSCLC組織學類型有顯著相關性(P0.05),而與患者性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度無明顯相關性(P0.05)。2.lncRNA-KAT7能夠抑制NSCLC細胞的遷移和侵襲能力。
【圖文】：

空載體vector

lncRNA-KAT7序列特征
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

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