【摘要】：褪黑素是一種主要由松果體合成,參與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、代謝、晝夜節(jié)律等生理活動的神經(jīng)內(nèi)分泌激素。褪黑素在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要的免疫調(diào)控作用,但其對胃癌的腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制尚未明確。研究目的本研究旨在建立去松果體、胃荷瘤小鼠模型,通過流式細(xì)胞術(shù)、Real time RTPCR、Western Blot、免疫組織化學(xué)技術(shù)等技術(shù)手段,探討褪黑素干預(yù)后,對胃荷瘤小鼠的免疫調(diào)控作用與機(jī)制。研究方法1.運(yùn)用HE染色法、免疫組化技術(shù)檢測胃荷瘤小鼠胃組織的病理變化。2.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測褪黑素干預(yù)下胃荷瘤小鼠脾細(xì)胞中CD4、CD8a、CD38、CD69、perforin、Granzyme B、CD26、CD278、I-A/I-E表達(dá)變化。3.運(yùn)用CBA法檢測褪黑素干預(yù)下胃荷瘤小鼠血漿中IFN-γ、TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A含量變化。4.運(yùn)用Real time PCR檢測褪黑素干預(yù)下胃荷瘤小鼠胸腺、脾臟組織T細(xì)胞活化及MAPK信號通路相關(guān)分子Elk-1、JNK、LAT、NF-κB、p38 m RNA水平的變化。5.運(yùn)用Western Blot檢測褪黑素干預(yù)下胃荷瘤小鼠胸腺、脾、胃組織Elk-1、p-JNK、LAT、NF-κB、p38、ERK1/2蛋白的表達(dá)。6.運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測褪黑素干預(yù)下胃荷瘤小鼠脾臟組織p-JNK、LAT、NF-κB、p38、ERK1/2表達(dá)的變化。研究結(jié)果1.石蠟切片HE染色結(jié)果及免疫組化結(jié)果顯示:去松果體、胃荷瘤小鼠模型構(gòu)建成功。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:10、20mg/kg劑量組小鼠脾細(xì)胞中CD4、CD26、CD69、CD278、I-A/I-E表達(dá)量均明顯下調(diào),10mg/kg劑量組小鼠脾細(xì)胞中CD38表達(dá)量下調(diào),CD8a、Granzyme B表達(dá)量上調(diào),20mg/kg劑量組小鼠脾細(xì)胞中CD38表達(dá)量上調(diào),Granzyme B、perforin表達(dá)量下調(diào),40mg/kg劑量組小鼠脾細(xì)胞中CD4、CD8a、CD26、CD38、Granzyme B、I-A/I-E、perforin表達(dá)量上調(diào),CD69表達(dá)量下調(diào)。3.CBA結(jié)果顯示:10mg/kg劑量組小鼠血漿中IFN-γ、TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10含量下調(diào),40mg/kg劑量組小鼠血漿中TNF、IL-6、IL-10含量上調(diào)。4.Real time PCR結(jié)果顯示:在胸腺組織中,10mg/kg劑量組NF-κB mRNA表達(dá)量下調(diào),20mg/kg劑量組Elk-1、JNK、NF-κB、p38m RNA表達(dá)量均上調(diào)。在脾臟組織中,10mg/kg劑量組Elk-1、LAT、p38 m RNA表達(dá)量上調(diào)。5.Western Blot結(jié)果顯示:在胸腺組織中,10mg/kg劑量組p-JNK蛋白表達(dá)量上調(diào),LAT、NF-κB、p38蛋白表達(dá)量下調(diào),20mg/kg劑量組Elk-1、NF-κB蛋白的表達(dá)量上調(diào),40mg/kg劑量組Elk-1、LAT、NF-κB、p38蛋白的表達(dá)量下調(diào)。在脾臟組織中,10mg/kg劑量組Elk-1、p38蛋白表達(dá)量下調(diào),p-JNK、NF-κB蛋白表達(dá)量上調(diào),20mg/kg劑量組p-JNK、LAT蛋白表達(dá)量上調(diào),40mg/kg劑量組Elk-1蛋白表達(dá)量下調(diào),LAT、NF-κB、p38蛋白表達(dá)量上調(diào)。在胃組織中,10mg/kg劑量組p-JNK蛋白表達(dá)量上調(diào),20mg/kg劑量組p-JNK蛋白表達(dá)量下調(diào),40mg/kg劑量組Elk-1蛋白表達(dá)量上調(diào),p-JNK、LAT蛋白表達(dá)量下調(diào)。6.脾臟組織免疫組化結(jié)果顯示:10mg/kg劑量組p38表達(dá)量下調(diào)、ERK1/2表達(dá)上調(diào),20mg/kg劑量組p-JNK、LAT、ERK1/2表達(dá)上調(diào),40mg/kg劑量組LAT表達(dá)下調(diào)。結(jié)論NF-κB、MAPK信號通路介導(dǎo)褪黑素對胃荷瘤小鼠T細(xì)胞的活化過程。
【圖文】：

A B圖 1 摘除的松果體組織石蠟切片 HE 染色，箭頭示松果體細(xì)胞A 放大倍數(shù)×200 B 放大倍數(shù)×400Fig1 mouse HE staining of pineal gland. Arrows indicate the pinealocyte.The magnigication of figure A is ×200,figure B is ×4002.OB 醫(yī)用生物膠粘貼法建立胃荷瘤小鼠原位移植瘤模型本研究建立胃荷瘤小鼠原位移植瘤模型，，旨在探討不同濃度的褪黑素對其響變化。結(jié)果如圖 2 所示，胃荷瘤小鼠胃組織切片 HE 染色中，胃組織細(xì)胞形符合腫瘤細(xì)胞形態(tài)，證實(shí)胃荷瘤小鼠原位移植瘤模型建立成功。

28圖 3 MLT 干預(yù)兩周胃荷瘤小鼠脾細(xì)胞中 CD4、CD8a、CD38、CD6perforin、Granzyme B、CD26、CD278、I-A/I-E 表達(dá)變化（“*”表示P<0.05）ig3 The experession of CD4、CD8a、CD38、CD69、perforin、GranzCD26、CD278、I-A/I-E in the spleen cells of tumor-bearing mouse aintervention of melatonin(*P<0.05)CBA 法檢測褪黑素干預(yù)胃荷瘤小鼠后血漿中 Th1、Th27 細(xì)胞因子含量本研究采用 CBA 試劑盒檢測了胃荷瘤小鼠血漿中 Th1、Th2、Th17 細(xì)量的變化，結(jié)果如圖 4 所示，MLT 干預(yù) 2 周后，與對照組相比，10
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2677814