發(fā)布時間：2020-05-12 18:36

【摘要】：背景:腎癌為較常見的惡性腫瘤之一,其中,腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)占70-80%。手術(shù)治療是目前最有效的治療方案,但術(shù)后復(fù)發(fā)的患者約占20-40%,腎癌患者的平均生存期約為26個月。因此,尋找有效的腎癌治療靶標(biāo)分子,及時對其作用機(jī)制研究,意義重大。miRNA是一類高度保守的內(nèi)源性非編碼小RNA,長度約為21nt,普遍存在于真核生物中。成熟miRNA通常與靶基因的3’-UTR區(qū)堿基通過不完全互補(bǔ)配對,使mRNA降解或抑制mRNA翻譯,調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA參與調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等行為,備受關(guān)注。miR-330表達(dá)失常與多種腫瘤相關(guān),并在不同腫瘤類型的細(xì)胞和組織中表達(dá),呈現(xiàn)一定特異性。目前尚無關(guān)于miR-330-3p在ccRCC中作用及機(jī)制的研究。目的:1.miR-330-3p在ccRCC患者臨床樣本組織中的表達(dá)水平及其臨床相關(guān)性。2.miR-330-3p差異表達(dá)對786-O和ACHN細(xì)胞惡性表型影響。3.對miR-330-3p調(diào)控ccRCC細(xì)胞惡性行為分子機(jī)制進(jìn)行初步研究。方法:1.qRT-PCR法檢測miR-330-3p在42例ccRCC患者臨床組織中表達(dá)水平,運用unpaired Student’s t-test或One-way ANOVA方法,分析miR-330-3p表達(dá)水平變化與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。2.采用Lipofetamin~(TM) 2000轉(zhuǎn)染法,在786-O、ACHN中轉(zhuǎn)染miR-330-3p mimic/Inhibitor,及其陰性對照miR-330-3p mimic NC/miR-330-3p Inhibitor NC,qRT-PCR法檢測miR-300-3p表達(dá)水平。3.采用Lipofetamin~(TM) 2000轉(zhuǎn)染法,在786-O、ACHN中轉(zhuǎn)染miR-330-3p mimic,及陰性對照miR-330-3p mimic NC,MTT法考證mi R-330-3p高表達(dá)對786-O、ACHN增殖影響,運用Transwell小室法和劃痕實驗考證miR-330-3p高表達(dá)對786-O、ACHN遷移、侵襲和運動能力影響。4.采用Lipofetamin~(TM) 2000轉(zhuǎn)染法,在786-O、ACHN中轉(zhuǎn)染miR-330-3p Inhibitor,及陰性對照miR-330-3p Inhibitor NC,MTT法考證miR-330-3p低表達(dá)對786-O、ACHN增殖影響,運用Transwell小室法和劃痕實驗考證miR-330-3p低表達(dá)對786-O、ACHN遷移、侵襲和運動能力影響。4.Western blot法檢測MMP2、P53、p-Akt、p-Mek在ccRCC患者腫瘤組織和癌旁正常組織中表達(dá)水平;western blot法檢測MMP2、P53、p-Akt、p-Mek在miR-330-3p低/高表達(dá)786-O中水平變化。結(jié)果:1.與癌旁正常組織相比,miR-330-3p在29例ccRCC患者臨床腫瘤組織中水平升高(69.05%),在13例患者腫瘤組織中水平降低(30.95%),其整體水平上升138.24%(P=0.0229)。miR-330-3p高表達(dá)與ccRCC Fuhrman分級正相關(guān),與Fuhrman 1-2患者相比,miR-330-3p在Fuhrman 3-4級ccRCC患者樣本中表達(dá)水平升高147.2%(P=0.0477),與患者年齡、性別、側(cè)別和TNM分期無關(guān)。2.與mimic NC組相比,miR-330-3p表達(dá)水平升高,786-O和ACHN的增殖、遷移、侵襲和運動能力增強(qiáng)。3.與Inhibitor NC組相比,miR-330-3p表達(dá)水平降低抑制786-O和ACHN的增殖、遷移、侵襲和運動能力。4.miR-330-3p高表達(dá)抑制786-O中P53蛋白水平,增強(qiáng)MMP2、p-Akt、p-Mek蛋白表達(dá)水平;786-O中下調(diào)miR-330-3p,P53蛋白水平上調(diào),MMP2、p-Akt、p-Mek蛋白水平下調(diào);與癌旁正常組織相比,P53蛋白在ccRCC患者腫瘤組織中水平降低,MMP2、p-Akt、p-Mek蛋白水平明顯升高。結(jié)論:1.miR-330-3p水平升高潛在促進(jìn)ccRCC發(fā)生發(fā)展并與患者Fuhrman分級正相關(guān),與其他臨床參數(shù)無關(guān)。2.miR-330-3p表達(dá)水平變化與786-O、ACHN的增殖、遷移、侵襲和運動能力正相關(guān)。3.mi R-330-3p影響P53,MMP2,p-Akt,p-Mek表達(dá)水平,影響ccRCC細(xì)胞的惡性表型,影響ccRCC的發(fā)生發(fā)展。
【圖文】：

采用 SPSS13.0 軟件分析數(shù)據(jù)。實驗數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x s ）表示。二者之間比較采用 unpaired Student’s t-test 檢驗，三者之間采用 One-wayANOVA 分析，P<0.05 表示具有統(tǒng)計學(xué)意義。ns 代表 P>0.05，*，**，***，****分別代表 P<0.05，0.01，0.001 和 0.0001。結(jié)果1.miR-330-3p 在 ccRCC 患者臨床腫瘤組織中水平總體升高qRT-PCR 檢測 42 例 ccRCC 臨床腫瘤組織及配對癌旁正常組織中 miR-330-3p的表達(dá)水平。如圖 1-1A 所示，，與癌旁正常組織相比，miR-330-3p 在 29 例（69.1%）患者腫瘤組織中水平升高，在 13（30.9%）例患者腫瘤組織中水平降低（P=0.0122）。miR-330-3p 水平在 ccRCC 患者臨床腫瘤組織中整體升高 138.2%(P=0.0229)(圖1-1B)

圖 1-2.miR-330-3p 表達(dá)水平與臨床參數(shù)間相關(guān)性表 5. 臨床樣本具體信息及 miR-330-3p 與臨床參數(shù)之間的 P 值統(tǒng)計病理參數(shù) 樣本數(shù) P 值性別男 24 0.148女 18年齡
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.11

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本文編號：2660658