【摘要】：【研究目的】Notch信號(hào)通路是一個(gè)非常保守的信號(hào)通路,在多種生命過(guò)程種發(fā)揮著重要的作用。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,Notch信號(hào)通路由四種受體(Notch1-4)和5種配體(DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2)組成。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)DLL4參與調(diào)控腫瘤血管生成,阻斷DLL4信號(hào)通路雖然可以抑制腫瘤生長(zhǎng),但有可能導(dǎo)致血管瘤。所以,我們擬研究Delta配體家族的另一個(gè)成員DLL1對(duì)腫瘤血管的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。【研究方法】我們用逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建過(guò)表達(dá)DLL1的乳腺癌細(xì)胞系(EO771)、肺癌細(xì)胞系(LAP0297)和轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒載體的對(duì)照細(xì)胞系。在C57BL/6小鼠構(gòu)建原位乳腺癌模型和FVB小鼠構(gòu)建肺癌模型,記錄腫瘤生長(zhǎng)曲線。在腫瘤長(zhǎng)到一定大小時(shí),取出腫瘤組織,應(yīng)用免疫組化分析腫瘤血管的形態(tài)與功能,利用流式分析儀檢測(cè)腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞的組成、表型和活性,通過(guò)q PCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)情況。此外,通過(guò)體內(nèi)去除特定T淋巴細(xì)胞來(lái)研究DLL1影響腫瘤血管形成的機(jī)制。【研究結(jié)果】我們利用慢病毒轉(zhuǎn)染的方法成功構(gòu)建了過(guò)表達(dá)DLL1的乳腺癌細(xì)胞系(EO771)、肺癌細(xì)胞系(LAP0297)和轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒載體的對(duì)照細(xì)胞系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空載對(duì)照相比,在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)DLL1能夠抑制腫瘤生長(zhǎng),甚至導(dǎo)致部分腫瘤變小消失。高表達(dá)DLL1能夠增加CD8~+T淋巴細(xì)胞的腫瘤浸潤(rùn)并提高其分泌IFNγ的功能。此外,高表達(dá)DLL1還能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型極化。而且,高表達(dá)DLL1降低了血管的密度,增加了周細(xì)胞的覆蓋率和提高了血管的功能,說(shuō)明高表達(dá)DLL1可以誘導(dǎo)腫瘤血管正�；�。體內(nèi)單獨(dú)去除CD8~+T淋巴細(xì)胞能逆轉(zhuǎn)DLL1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用和對(duì)腫瘤血管功能的促進(jìn)作用,但不影響腫瘤血管的密度。同時(shí)去除CD8~+T和CD4~+T淋巴細(xì)胞可以逆轉(zhuǎn)DLL1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用及其對(duì)腫瘤血管密度與功能的影響。【結(jié)論與意義】在腫瘤微環(huán)境中增加DLL1的表達(dá)可以促進(jìn)CD8~+T細(xì)胞的腫瘤浸潤(rùn)與分泌IFNγ,誘導(dǎo)腫瘤血管正�；鸵种颇[瘤生長(zhǎng)。CD8~+T細(xì)胞介導(dǎo)了高表達(dá)DLL1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用,而DLL1對(duì)腫瘤血管的調(diào)控作用是通過(guò)CD8~+T和CD4~+T細(xì)胞來(lái)共同實(shí)現(xiàn)的。這些研究結(jié)果提示DLL1有望成為腫瘤免疫治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。
【圖文】：

DLL1基因的PCR產(chǎn)物及質(zhì)粒酶切鑒定瓊脂糖凝膠電泳圖

qRT-PCR及westernblot檢測(cè)EO771腫瘤細(xì)胞DLL1的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.2

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本文編號(hào)：2656731