天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 醫(yī)學(xué)論文 > 腫瘤論文 >

生物活性肽P11對人甲狀腺癌的抑制作用及其分子機制

發(fā)布時間:2020-05-07 17:23
【摘要】:背景甲狀腺癌(thyroid cancer,TC)是最常見的一種內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤。雖然甲狀腺癌在任何年齡都可發(fā)生,但是發(fā)病人群以中青年女性居多。甲狀腺癌雖然占總的惡性腫瘤的比例較低,但是近些年來其發(fā)病率逐漸上升。從一些研究報告中可以得出,甲狀腺癌在美國女性常見的惡性腫瘤的排名已經(jīng)上升至第五位。隨著我國經(jīng)濟社會的發(fā)展,甲狀腺癌已經(jīng)逐漸上升為惡性腫瘤疾病中的第七位,社會各界對甲狀腺癌的關(guān)注逐漸提高。因此,積極進行預(yù)防和治療甲狀腺癌具有重要意義和科學(xué)價值。生物活性肽因其理化性質(zhì)及其較高的生物活性又被稱為功能肽。含有10個以上但不超過50個氨基酸殘基的被總稱為多肽。研究發(fā)現(xiàn)生物活性肽對機體的生命活動非常重要,生物活性肽的應(yīng)用非常廣泛,目前主要用于保健品以及調(diào)整免疫功能等方面。目前通過噬菌體展示文庫技術(shù)已經(jīng)鑒定出許多抗腫瘤的多肽,其中包括兩條肽,即CYYGQSKYC(P6)和LSPPRYP(P9)。P6肽可以通過阻斷血管生長因子C與其受體血管內(nèi)皮生長因子受體3結(jié)合,從而能夠抑制腫瘤細胞遷移與侵襲。P9肽能夠阻斷堿性纖維母細胞生長因子與纖維母細胞生長因子受體結(jié)合,從而抑制黑色素瘤生長。本課題將P6肽與P9肽通過柔性連接子Gly-Gly-Gly(GGG)連接起來,形成一條新型多肽CYYGQSKYCGGGLSPPRYP,即P11肽。本課題采用生物活性肽P11進行體外實驗:細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡以及信號通路檢測和體內(nèi)實驗:建立裸鼠移植瘤模型、檢測血管新生等來研究生物活性肽P11對人甲狀腺癌細胞生長的作用機制。目的研究生物活性P11肽對人甲狀腺癌細胞生長作用及其分子機制。方法1、體外實驗1.1 MTS實驗進行MTS實驗,對人甲狀腺癌細胞系TT、ARO和TPC-1細胞給予200μmol/L P6肽、P9肽、P6+P9肽和P11肽(以PBS為Control組)處理24 h后,在酶標(biāo)儀上準(zhǔn)確測量各組的OD值,檢測各組甲狀腺癌細胞的活力。1.2 EDU實驗進行EDU實驗,對人甲狀腺癌細胞系TT、ARO和TPC-1細胞給予200μmol/L P6肽、P9肽、P6+P9肽和P11肽(以PBS為Control組)處理24 h后,通過與Apollo567熒光染料發(fā)生特異性反應(yīng),在倒置熒光顯微鏡下避光拍攝腫瘤細胞,用來檢測各組腫瘤細胞增殖情況。細胞增殖率=(EdU陽性細胞)/(總細胞數(shù))×100%。1.3細胞遷移及侵襲實驗進行細胞劃痕、遷移以及侵襲實驗,對人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1細胞給予200μmol/L P6肽、P9肽、P6+P9肽和P11肽(以PBS為Control組)處理24 h,分別在0 h、12 h以及24 h對細胞進行拍照,通過分析細胞劃痕的愈合情況以及穿透的細胞數(shù)來檢測各組人甲狀腺癌細胞的遷移以及侵襲能力。1.4 Western Blot檢測對人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1細胞給予200μmol/L P6肽、P9肽、P6+P9肽和P11肽(以PBS為Control組)處理24 h,提取甲狀腺癌細胞蛋白,檢測各組甲狀腺癌細胞中凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3、8、9和Cleaved PARP以及PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、m-TOR和p-mTOR的表達水平,以β-actin為參照。2、體內(nèi)實驗2.1建立裸鼠移植瘤模型建立腫瘤模型:將人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1細胞按照5×10~6個細胞量在每只裸鼠右側(cè)腋下進行無菌注射,24 h后觀察成瘤情況,接種腫瘤成功率達100%。2.2腫瘤抑制率測定實驗分組以及給藥情況:接種后24 h,分別將接種人甲狀腺癌TT、ARO和TPC-1細胞的裸鼠按體重隨機分5組,每組6只:陰性對照組(生理鹽水)、P6肽組(320μg/kg/d)、P9肽組(320μg/kg/d)、P6肽+P9肽組(320μg/kg/d)、P11肽組(320μg/kg/d)。各組均采用瘤旁注射,按照0.1 mL/10 g的給藥體積進行,連續(xù)進行4周,實驗期間裸鼠自由飲食和飲水。每日測量裸鼠移植瘤的長(a)短(b),按照公式:V(volume)=ab~2/2計算腫瘤體積并繪制腫瘤生長曲線,裸鼠處死后,取出腫瘤并稱重,按照公式:IR(inhibitory rate)=[(A-B)/A]×100%,A為對照組裸鼠體重,B為給藥組裸鼠體重。2.3 HE染色腫瘤組織取出后,經(jīng)10%甲醛固定,做常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片。切片厚度5μm,HE染色,顯微鏡下觀察病理組織學(xué)改變并拍照。2.4免疫組織化學(xué)染色將石蠟包埋腫瘤組織用CD31和Ki67抗體染色,然后孵育二抗,顯微鏡下觀察腫瘤組織中CD31與Ki67的表達水平。結(jié)果1、MTS和EDU實驗結(jié)果表明:與正常組、P6肽組、P9肽組、P6+P9肽組相比,生物活性肽P11顯著降低了人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1增殖和存活率(P0.05)。2、細胞劃痕、遷移以及侵襲實驗結(jié)果表明:與正常組、P6肽組、P9肽組、P6+P9肽組相比,生物活性肽P11明顯抑制人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1遷移以及侵襲的能力(P0.05)。3、采用Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白結(jié)果表明:與正常組、P6肽組、P9肽組、P6+P9肽組相比,生物活性肽P11明顯提高人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表達水平(P0.05)。4、采用Western Blot檢測PI3K/AKT/mTOR信號通路相關(guān)蛋白結(jié)果表明:與正常組、P6肽組、P9肽組、P6+P9肽組相比,生物活性肽P11明顯降低人甲狀腺癌細胞TT、ARO和TPC-1中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表達水平(P0.05)。5、裸鼠移植瘤結(jié)果表明:與正常組、P6肽組、P9肽組、P6+P9肽組相比,生物活性肽P11明顯抑制人甲狀腺癌TT、ARO和TPC-1移植瘤生長(P0.05)。6、免疫組織化學(xué)結(jié)果表明:與正常組、P6肽組、P9肽組、P6+P9肽組相比,生物活性肽P11明顯降低裸鼠移植瘤組織中CD31和Ki67的表達水平(P0.05)。結(jié)論1、生物活性肽P11能夠抑制人甲狀腺癌細胞的增殖、遷移以及侵襲能力。2、生物活性肽P11通過阻斷PI3K-AKT-mTOR信號通路從而促進人甲狀腺癌細胞的凋亡。3、生物活性肽P11通過抑制腫瘤血管新生從而抑制人甲狀腺癌生長。
【圖文】:

甲狀腺癌,生物活性肽,癌細胞,多肽


圖 3.1 P11 肽對甲狀腺癌細胞活性以及增殖能力的作用對人甲狀腺癌細胞 TT、TPC-1 和 ARO 經(jīng)過 200 μmol/L 不同多肽藥物(P6、P9、P6+P9 和 P11肽)孵育 24 h 后,采用 MTS 和 EDU 實驗檢測各組多肽對人甲狀腺癌細胞增殖的影響。(A) MTS 結(jié)果統(tǒng)計分析(n=3);(B) EDU 染色圖片(圖片放大倍數(shù)為 100×);(C) 對細胞增殖能力進行統(tǒng)計(n=6)。實驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SEM)表示,*P < 0.05,**P < 0.01 vs 對照組;△P < 0.05,△△P <0.01 vs P6 肽;▲P < 0.05,▲▲P < 0.01 vs P9 肽,#P < 0.05,##P < 0.01 vs P6+P9 肽。3.2 生物活性肽 P11 抑制人甲狀腺癌細胞遷移和侵襲劃痕實驗以及Transwell被用來檢測多肽對人甲狀腺癌細胞遷移和侵襲能力的影響。與正常組(control)相比,人甲狀腺癌細胞經(jīng)過 P6 肽、P9 肽、P6+P9 肽和 P11 肽孵育24 h 后,能夠抑制甲狀腺癌細胞的遷移(P < 0.05),與 P6 肽、P9 肽、P6+P9 肽相比,P11 肽明顯抑制了人甲狀腺癌細胞的遷移和侵襲(P < 0.05)。生物活性肽 P11 對人甲狀腺癌細胞 TT、TPC-1 和 ARO 遷移與侵襲作用見圖 3.2。

細胞遷移,甲狀腺癌,生物活性肽


圖 3.2 P11 肽對人甲狀腺癌細胞遷移與侵襲的作用對人甲狀腺癌細胞 TT、TPC-1 和 ARO 經(jīng)過 200 μmol/L 不同多肽藥物(P6、P9、P6+P9 和 P11肽)孵育 24 h 后,采用劃痕實驗(A-B)、遷移以及侵襲實驗(C-F)檢測生物活性肽對人甲狀腺癌細胞遷移以及侵襲的影響(圖片放大倍數(shù)為 100×)。實驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SEM)表示(n=6);*P < 0.05,**P < 0.01 vs 對照組;△P < 0.05,,△△P < 0.01 vs P6 肽;▲P < 0.05,▲▲P < 0.01 vsP9 肽,#P < 0.05,##P < 0.01 vs P6+P9 肽。3.3 生物活性肽 P11 促進人甲狀腺癌細胞凋亡相關(guān)蛋白表達細胞凋亡是誘導(dǎo)腫瘤細胞死亡的一種重要途徑,在凋亡的過程中,cleaved caspase-3、8、9、cleaved PARP是評定腫瘤細胞凋亡的重要因素。上述相關(guān)指標(biāo)升高可以激活線粒體介導(dǎo)的凋亡通路,進而誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。從結(jié)果可以看出,在人甲狀腺癌細胞TT、TPC-1和ARO細胞中,與正常組相比,P9、P6+P9、P11肽組cleaved caspase-3、cleaved
【學(xué)位授予單位】:河南大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號】:R736.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 石生林;劉彥群;潘敏慧;魯成;;柞蠶核型多角體病毒p11基因克隆及序列分析[J];華北農(nóng)學(xué)報;2009年02期

2 伊成龍;張樂福;徐雪蓮;;P11鋼在濕蒸汽中流動加速腐蝕性能的模擬與實驗研究[J];原子能科學(xué)技術(shù);2013年02期

3 周軍衛(wèi),李曉文,黃希順;良性家族性嬰兒驚厥疾病基因與染色體6p21.2-p11的連鎖分析[J];江蘇醫(yī)藥;2005年05期

4 黃方一;鐘毅;劉巖;;產(chǎn)植酸酶菌株青霉P11發(fā)酵條件的研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年06期

5 張莉莉;郭繼強;張文;劉威;張志永;欒好江;王輝;;干擾素-α阻斷地塞米松對神經(jīng)細胞p11表達的上調(diào)作用[J];中國免疫學(xué)雜志;2013年12期

6 孫合亮;王星明;居玲莎;楊嬌嬌;張廣芬;楊建軍;;海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子p11信號通路參與氯胺酮抗抑郁作用[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2015年02期

7 王曙光,韓本立,段恒春;外源性層粘素P11片段對膽管癌細胞浸潤能力的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1999年09期

8 姜海棠;岳瑩瑩;袁勇貴;;p11蛋白與抑郁癥[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年06期

9 楊秦政;王海東;李曉延;王挺;張偉棟;;P11耐熱鋼窄間隙焊接接頭組織分布特征與性能分析[J];原子能科學(xué)技術(shù);2016年06期

10 邵君逵;;解決1511M型織機墻板套筒P11松動的方法[J];棉紡織技術(shù);1980年05期

相關(guān)會議論文 前8條

1 郭繼強;馮來鵬;關(guān)丫丫;丁華夏;楊婷婷;王輝;;溶酶體和泛素-蛋白酶體途徑參與干擾素-α下調(diào)p11和5-羥色胺受體1b/[A];第十一屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2016年

2 侯妍妍;王少陽;冉金樂;龍亮坤;;P11邊板外板后尾燈部位沖壓工藝探討[A];第十二屆河南省汽車工程科技學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2015年

3 段光杰;楊海捷;劉友生;朱江;許成燕;;噬菌體展示肽庫篩選內(nèi)毒素結(jié)合肽P11的體外活性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

4 孫合亮;張廣芬;楊建軍;;p11在抑郁癥中的作用及相關(guān)機制研究進展[A];中國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會[CSIA]年會暨第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會麻醉專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2015年

5 馮來鵬;郭繼強;王輝;;p11在銀屑病發(fā)病機制中的作用[A];第十二屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2017年

6 孫合亮;張廣芬;王菁;周志強;楊建軍;;p11在氯胺酮抗抑郁中的作用及相關(guān)機制[A];中國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會[CSIA]年會暨第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會麻醉專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2015年

7 關(guān)丫丫;;S100A10(又稱為P11)在鼠傷寒感染小鼠過程中的作用及機制[A];第十一屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2016年

8 郭繼強;程遠芳;丁華夏;王輝;;p11對神經(jīng)細胞SH-sy5y自噬的影響[A];第十屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會匯編[C];2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李曉莉;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子裂解通路和突觸可塑性在大鼠抑郁發(fā)病和抗抑郁治療中的作用研究[D];東南大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 田文柯;生物活性肽P11對人甲狀腺癌的抑制作用及其分子機制[D];河南大學(xué);2018年

2 楊婷婷;p11對神經(jīng)細胞自噬的影響及其作用機制[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2016年

3 姚廣印;P11及其與水蛭素C肽融合基因的高效表達和功能的研究[D];河北大學(xué);2007年

4 丁華夏;α-干擾素對神經(jīng)細胞中p11、5-HTR1b和5-HTR4表達的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2016年

5 李艷濤;卒中后抑郁患者外周血單個核細胞p11基因表達的變化[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

6 陳亮;T7噬菌體衣殼蛋白P11的表達純化及單克隆抗體的制備[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

7 程遠芳;p11對SH-SY5Y細胞自噬的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

8 王偉;采用IFN-α治療的乙肝患者PBMC p11mRNA與抑郁癥的關(guān)系[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2016年



本文編號:2653293

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/zlx/2653293.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶90e19***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
日韩亚洲激情在线观看| 我要看日本黄色小视频| 亚洲丁香婷婷久久一区| 欧美一区二区不卡专区| 久热青青草视频在线观看| 精品久久久一区二区三| 亚洲国产精品久久精品成人| 亚洲国产四季欧美一区| 夫妻性生活一级黄色录像| 天堂热东京热男人天堂| 中文字幕一区二区熟女| 国产超碰在线观看免费| 超碰在线免费公开中国黄片| 日本东京热加勒比一区二区| 日本91在线观看视频| 亚洲高清中文字幕一区二三区| 福利视频一区二区三区| 国产av精品高清一区二区三区| 五月的丁香婷婷综合网| 日韩一级一片内射视频4k | 精品久久av一二三区| 成年午夜在线免费视频| 日韩欧美在线看一卡一卡| 亚洲一区二区精品国产av| 中文字幕乱子论一区二区三区 | 大伊香蕉一区二区三区| 亚洲天堂久久精品成人| 亚洲成人黄色一级大片| 国产综合一区二区三区av| 欧美精品亚洲精品日韩专区| 欧美国产日产在线观看| 在线观看免费无遮挡大尺度视频| 国产精品亚洲欧美一区麻豆| 欧美做爰猛烈叫床大尺度| 亚洲国产另类久久精品| 精品女同在线一区二区| 老司机这里只有精品视频| 91国内视频一区二区三区| 国产一区国产二区在线视频| 午夜精品在线视频一区| 日韩高清中文字幕亚洲|