【摘要】：目的:星形細(xì)胞腫瘤具有浸潤性生長及易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)。盡管神經(jīng)外科手術(shù)以及術(shù)后放療、化療技術(shù)有了顯著的進(jìn)步,但星形細(xì)胞腫瘤患者的中位生存時(shí)間未得到明顯延長。近年來,基因靶向治療在治療腫瘤等疾病中發(fā)揮了重要作用。與此同時(shí),靶向星形細(xì)胞腫瘤的基因治療也在臨床中顯示良好的應(yīng)用前景。DEK是一類原癌基因,在急性髓細(xì)胞白血病中首次被發(fā)現(xiàn)。EDK還在其他多種惡性腫瘤中高表達(dá),如肝細(xì)胞癌、喉鱗癌及惡性黑色素瘤等。高表達(dá)的DEK促進(jìn)腫瘤的惡性生物學(xué)行為,并介導(dǎo)惡性黑色素瘤的抗藥性。目前尚無文獻(xiàn)報(bào)道DEK在不同病理級(jí)別的星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)水平。同時(shí),未見文獻(xiàn)報(bào)道DEK是否可以調(diào)控星形細(xì)胞腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為及可能的調(diào)控機(jī)制。本研究目的在于從分子水平檢測星形細(xì)胞腫瘤中DEK基因的mRNA和蛋白的表達(dá)水平,分析其表達(dá)水平與星形細(xì)胞腫瘤WHO病理級(jí)別的關(guān)系,探討其在星形細(xì)胞腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為中的調(diào)控作用,從而為星形細(xì)胞腫瘤的基因靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1、應(yīng)用RT-PCR法檢測DEK mRNA在星形細(xì)胞腫瘤組織中的表達(dá)水平。2、應(yīng)用Western blot法檢測DEK蛋白在不同病理級(jí)別的星形細(xì)胞腫瘤臨床樣本中的表達(dá)水平。3、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測DEK蛋白在星形細(xì)胞腫瘤組織中的分布和表達(dá)。4、RT-PCR法檢測經(jīng)小干擾RNA(Small interefering RNA,siRNA)基因沉默后,DEK mRNA在U251細(xì)胞中表達(dá)水平的變化。5、Western blot法檢測經(jīng)siRNA基因沉默后,DEK蛋白在U251細(xì)胞中表達(dá)水平的變化。6、檢測DEK基因沉默后對(duì)于U251細(xì)胞生長能力的影響。7、檢測DEK基因沉默后對(duì)于U251細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的作用。8、應(yīng)用Western blot法檢測DEK基因沉默后,U251細(xì)胞中P53、P21、Bcl-2和C-myc蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。9、檢測DEK基因沉默對(duì)于U251細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活性的影響。結(jié)果1、DEK mRNA和蛋白在正常腦組織中表達(dá)水平極低,而在星形細(xì)胞腫瘤組織中表達(dá)水平增高,其表達(dá)水平與星形細(xì)胞腫瘤WHO病理級(jí)別正相關(guān),高級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤(III、IV級(jí))中DEK的表達(dá)水平顯著高于低級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤(I、II級(jí))。2、DEK在星形細(xì)胞腫瘤臨床樣本中的陽性率顯著高于其在正常腦組織臨床樣本中的陽性率,DEK蛋白主要分布于星形細(xì)胞腫瘤的細(xì)胞核中,隨著腫瘤病理級(jí)別的增高,DEK表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng),低級(jí)別組與高級(jí)別組間有顯著差異。3、siRNA-DEK轉(zhuǎn)染的U251細(xì)胞中DEK mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著低于未轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組,陰性對(duì)照組與未轉(zhuǎn)染組DEK mRNA和蛋白表達(dá)水平無顯著性差異。4、siRNA-DEK轉(zhuǎn)染24h后,U251細(xì)胞的生長速率開始顯著下降,72h達(dá)到最低,未轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組間細(xì)胞生長速率無顯著性差異。5、siRNA-DEK轉(zhuǎn)染后,U251細(xì)胞的凋亡率顯著高于未轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組,U251細(xì)胞增殖指數(shù)顯著低于未轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組。6、siRNA-DEK轉(zhuǎn)染后,U251細(xì)胞內(nèi)P53和P21蛋白表達(dá)顯著上調(diào),Bcl-2、C-myc蛋白表達(dá)下調(diào),而在未轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組表達(dá)無明顯改變。7、與未轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組相比,siRNA-DEK轉(zhuǎn)染組U251細(xì)胞中Caspase-3活性顯著升高。討論針對(duì)星形細(xì)胞腫瘤的靶向治療主要包括以下幾個(gè)方面:干擾腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡;應(yīng)用前藥轉(zhuǎn)換酶的靶向治療;應(yīng)用免疫方法增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫識(shí)別能力。其中,選擇適宜的基因靶點(diǎn)是其中最為關(guān)鍵的一步。研究發(fā)現(xiàn)DEK原癌基因在多種腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài),但尚未見有關(guān)DEK在星形細(xì)胞腫瘤組織中表達(dá)水平的文獻(xiàn)報(bào)道。在本研究中,首先檢測DEK蛋白在星形細(xì)胞腫瘤臨床樣本中的分布與表達(dá),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與正常腦組織相比,DEK蛋白在星形細(xì)胞腫瘤臨床樣本中顯著高表達(dá),并與腫瘤WHO病理級(jí)別正相關(guān)。DEK主要分布于星形細(xì)胞腫瘤的細(xì)胞核中。為了進(jìn)一步證實(shí)以上關(guān)于DEK在星形細(xì)胞腫瘤組織中表達(dá)水平的研究結(jié)果,我們采用siRNA-DEK轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞,檢測DEK基因沉默對(duì)其生物學(xué)特性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在siRNA-DEK轉(zhuǎn)染組,DEK mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低,細(xì)胞的生長速率顯著下降,細(xì)胞增殖指數(shù)顯著降低,細(xì)胞的凋亡率則顯著增高。說明DEK基因表達(dá)下調(diào)能夠抑制星形細(xì)胞瘤細(xì)胞系體外增殖能力,使細(xì)胞生長受抑,生長速度減緩,提示DEK與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,可以作為腫瘤基因治療的候選靶點(diǎn)。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn),siRNA-DEK干擾DEK表達(dá)后,凋亡抑制基因Bcl-2受抑,p53及其下游調(diào)控基因p21表達(dá)均上調(diào),活化Caspase-3誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,表明p53依賴性細(xì)胞凋亡途徑在DEK原癌基因調(diào)控星形細(xì)胞腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。DEK基因沉默后,C-myc蛋白表達(dá)也明顯下調(diào),表明DEK可能通過反式激活作用來激活c-myc癌基因參與細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生。結(jié)論1、DEK mRNA和蛋白在星形細(xì)胞腫瘤中表達(dá)上調(diào),其陽性率及表達(dá)水平均與星形細(xì)胞腫瘤WHO病理級(jí)別正相關(guān);2、利用基因沉默技術(shù)設(shè)計(jì)合成的靶向siRNA-DEK,能有效地在U251星形細(xì)胞瘤細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)基因沉默效應(yīng);3、siRNA-DEK下調(diào)DEK基因表達(dá)后,U251細(xì)胞生長減慢,細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞增殖受抑;4、siRNA-DEK下調(diào)DEK基因表達(dá)后,凋亡抑制基因Bcl-2受抑,p53及其下游調(diào)控基因p21表達(dá)均上調(diào),Caspase-3活性增加;5、DEK基因下調(diào)引起的p53和p21轉(zhuǎn)錄激活可負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,使U251細(xì)胞周期阻抑;6、siRNA-DEK下調(diào)DEK基因表達(dá)后,C-myc蛋白表達(dá)也明顯下調(diào),表明DEK可能通過反式激活作用來激活c-myc癌基因參與細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生。
【圖文】：

RT-PCR 法檢測 DEK mRNA 的表達(dá)變化。（M：分子量標(biāo)志；1~5 高級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織；6~10 低級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織；11~13 正常腦組織）3.2 Western blot 檢測 DEK 蛋白的表達(dá)水平在正常腦組織中未檢測到 DEK蛋白表達(dá)，全部星形細(xì)胞腫瘤組織中均有 DEK蛋白表達(dá)，其表達(dá)強(qiáng)度隨星形細(xì)胞腫瘤級(jí)別增加而增加，，低級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織 DEK 蛋白的相對(duì)含量(DEK IDV/β-actin IDV)為 0.55±0.11，高級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤為 0.85 ±0.07，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)（見表 1.2，圖 1.2）。表 1.2，DEK 蛋白在正常腦組織和星形細(xì)胞腫瘤組織中的表達(dá)總例數(shù)（n）陽性例數(shù)（n）DEK 相對(duì)含量DEK IDV/β-actin IDV

Western blot 法檢測 DEK 蛋白的表達(dá)。（1~5 高級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織；6~10 低級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織；11~13 正常腦組織）3.3 免疫組織化學(xué)染色法檢測 DEK 蛋白在各組組織中的分布和表達(dá)DEK 蛋白主要定位于星形細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)， 32 例星形細(xì)胞腫瘤組織中 31 例DEK 蛋白陽性，陽性表達(dá)率為 96.88%，5 例正常腦組織中 2 例為弱陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為 40.00%；DEK 蛋白陽性細(xì)胞百分率分別為：正常腦組織 35.96±5.70%，低級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織 51.59±9.66%，高級(jí)別星形細(xì)胞腫瘤組織 88.31±5.58%，組間表達(dá)差異均具有顯著性意義 (P<0.05)（具體結(jié)果見表 1.3~1.4，圖 1.3~1.6）。表 1.3，免疫組化檢測 DEK 蛋白在正常腦組織和星形細(xì)胞腫瘤組織中的表達(dá)組織例數(shù)表達(dá)強(qiáng)度（n） 陽性率陽性細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃永前;王忠泉;張品南;;星形細(xì)胞腫瘤中PTEN蛋白表達(dá)與微血管密度的意義[J];浙江創(chuàng)傷外科;2010年04期

2 馮天達(dá);劉巋然;王成林;于宏偉;;星形細(xì)胞腫瘤組織COX-2的表達(dá)及其與病理分級(jí)關(guān)系的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2007年10期

3 陳永平,鄭暉,顏亞暉,楊曉靜,陳晨;星形細(xì)胞腫瘤中PTEN蛋白表達(dá)及與微血管密度的相關(guān)性[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2001年05期

4 王東林,施公勝,鄂群,黃華;星形細(xì)胞腫瘤中端粒酶與PTEN的表達(dá)及相關(guān)性[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2001年06期

5 李勁松,徐興釗,丁吉元,張霞,曲在萍;星形細(xì)胞腫瘤凝集素組化研究[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;1997年03期

6 張清平;魏大年;陳建良;牟永告;張湘衡;陳忠平;;星形細(xì)胞腫瘤的預(yù)后因素分析[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年01期

7 劉永軍;安麗文;趙憲林;關(guān)一夫;;星形細(xì)胞腫瘤血管內(nèi)皮生長因子和蛋白酶激活受體-1的表達(dá)[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年03期

8 丁漣沭,劉道坤,鄧傳宗,顧志塏,陳建,高宜錄,沈劍虹;幕上星形細(xì)胞腫瘤Ki-67抗原表達(dá)及其預(yù)后作用[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2004年05期

9 耿道穎,陳星榮,沈天真;星形細(xì)胞腫瘤的影像學(xué)診斷[J];中國醫(yī)學(xué)計(jì)算機(jī)成像雜志;2000年04期

10 洪柳;孟宇宏;寧浩勇;吳惠;周陽;高逸群;張冰;段敏剛;;顆粒細(xì)胞星形細(xì)胞腫瘤2例臨床病理觀察[J];診斷病理學(xué)雜志;2017年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前7條

1 樓林;金曉;陳書達(dá);張衛(wèi)華;朱君明;;彌散張量序列技術(shù)在星形細(xì)胞腫瘤手術(shù)治療中應(yīng)用探討[A];2007浙江省神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

2 姜興岳;耿道穎;倪建明;沈天真;陳星榮;;磁共振彌散張量成像對(duì)星形細(xì)胞腫瘤分級(jí)診斷應(yīng)用價(jià)值的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

3 肖華亮;卞修武;蔣雪峰;徐倫山;周椿;林俐;許民輝;;人星形細(xì)胞腫瘤Notch1胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)日程及論文匯編[C];2010年

4 葉紅星;曹飛;黃欣;潘德生;嚴(yán)敏;陳滿濤;鄭秀玨;詹仁雅;;miR-202-3p在人星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)及預(yù)后分析[A];浙江省神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)-神經(jīng)外科分會(huì)成立大會(huì)&2015錢江神經(jīng)外科高峰論壇暨高血壓腦出血診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2015年

5 鄭偉明;劉濤;吳哲褒;李劍敏;蘇志鵬;萬麗;;星形細(xì)胞腫瘤中CD14的表達(dá)[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第二屆全國代表大會(huì)論文匯編[C];2007年

6 楊翠華;王成;陳熹;江俊軍;張辰宇;張春妮;;腦惡性星形細(xì)胞瘤患者血清特異miRNA表達(dá)譜的篩選和診斷價(jià)值評(píng)價(jià)[A];第七屆全國醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)暨醫(yī)學(xué)生化分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2011年

7 楊坤禹;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的放射診療[A];第22屆湖北省腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 馮天達(dá);DEK原癌基因在星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)及其對(duì)U251細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

2 于同剛;MRSI在腦星形細(xì)胞腫瘤及其放療中的應(yīng)用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

3 王毅;腦膠質(zhì)瘤MSCT血供影像—病理的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

4 韓彤;磁敏感成像和灌注成像評(píng)估星形細(xì)胞腫瘤病理級(jí)別及血管生成的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

5 白旭;應(yīng)用磁共振功能成像評(píng)估星形細(xì)胞腫瘤病理級(jí)別的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

6 黃新;自噬相關(guān)基因Beclin 1表達(dá)對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 陳保東;RNA干擾Racl基因?qū)λ枘讣?xì)胞瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 殷力維;PTEN、VEGF和Ki-67蛋白在腦星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2008年

2 王進(jìn)華;MR彌散加權(quán)成像在星形細(xì)胞腫瘤診斷的價(jià)值[D];江西醫(yī)學(xué)院;2003年

3 劉濱;HGF、C-met、VEGF的表達(dá)與星形細(xì)胞腫瘤惡性程度及其血管生成之間相互關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2011年

4 陸丙丁;原發(fā)性和復(fù)發(fā)性人腦星形細(xì)胞瘤uPA、PAI-1的表達(dá)[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

5 別鵬飛;VEGF、D2-40及STAT6在星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)及意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

6 李俊芝;少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和星形細(xì)胞瘤染色體1p/19q雜合性缺失及其臨床意義的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

7 聶文潔;MMP-2、TIMP-1、TIMP-2在星形細(xì)胞腫瘤中的表達(dá)[D];青島大學(xué);2005年

8 饒婭敏;腦星形細(xì)胞腫瘤中PTEN基因缺失和PTEN，HIF-1α，VEGF蛋白表達(dá)的意義[D];蘇州大學(xué);2006年

9 王佳寧;顱內(nèi)腫瘤影像與病理對(duì)照研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

10 聶泰明;磁共振擴(kuò)散張量成像在顱內(nèi)腫瘤鑒別診斷中的應(yīng)用[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2014年

本文編號(hào)：2648293