【摘要】：ADAMTS18是解整合素金屬蛋白酶家族(ADAMTSs)成員之一,它在器官發(fā)育、生殖、血管新生及凝血,炎癥、腫瘤等生理病理過程中,都起著非常重要的調(diào)控作用。Adamts18基因的突變和失活與腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移尤為密切。本課題主要研究Adamts18對(duì)黑色素轉(zhuǎn)移的影響及發(fā)病機(jī)理,為后期黑色素瘤的治療提供新的理論依據(jù)。本論文主要分為四個(gè)部分:一通過雜交方式獲得C57BL/6純系A(chǔ)damts18基因缺陷小鼠將Adamts18基因敲除的C57BL/6/129SV背景的雜合子(HT)小鼠與C57BL/6純系野生(WT)小鼠回交10代,獲得C57BL/6純系A(chǔ)damts18 HT小鼠。通過雜交獲得實(shí)驗(yàn)所需要的野生(WT)小鼠和Adamts18基因缺陷(KO)小鼠。二Adamts18缺失在實(shí)驗(yàn)性黑色素瘤轉(zhuǎn)移中的作用研究本實(shí)驗(yàn)中的黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移模型模擬的是腫瘤轉(zhuǎn)移的最后一個(gè)步驟(是腫瘤細(xì)胞通過血液循環(huán)到肺部,在肺部生長(zhǎng)成腫瘤的過程)。我們通過尾靜脈注射B16黑色素細(xì)胞(每只小鼠注射2×10~5 cells)的方式來探究Adamts18對(duì)黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果表明:B16黑色素瘤細(xì)胞可遷移到肺、脾、腸系膜、心臟和肝臟等多個(gè)內(nèi)臟器官。其中,Adamts18 KO小鼠肺轉(zhuǎn)移更嚴(yán)重,與WT對(duì)照組相比有顯著性差異(P0.05)。Adamts18 KO小鼠肺表面的結(jié)節(jié)數(shù)目和單位體積肺組織中結(jié)節(jié)數(shù)目明顯高于WT對(duì)照組。三ADAMTS18缺失在小鼠肺細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)重塑中的作用研究細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)微環(huán)境在腫瘤生長(zhǎng)及擴(kuò)增過程中起重要作用。ADAMTS18作為一種金屬蛋白酶,在ECM重塑中起重要作用。我們檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Adamts18 KO小鼠肺組織層粘連蛋白(LN)表達(dá)明顯高于WT對(duì)照組,而IV型膠原蛋白沒有明顯改變。由于LN是PI3K-Akt-mTOR-SK6信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,在腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)增過程中起著重要的作用,因此我們進(jìn)一步利用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)對(duì)PI3K和SK6的表達(dá)水平進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明:與WT對(duì)照組相比,磷酸化的PI3K和SK6在Adamts18 KO小鼠肺組織中均顯著性激活。四層粘連蛋白(LN)在B16黑色素瘤細(xì)胞黏附、延展和趨化的作用研究通過Transwell趨化實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)遷移到下室的細(xì)胞數(shù)隨著LN的濃度升高而增加。同時(shí)LN對(duì)B16黑色素瘤細(xì)胞延展和黏附作用的實(shí)驗(yàn)中,隨著LN濃度的升高,其延展和黏附能力也不斷增強(qiáng)。因此,ADAMTS 18缺失可促進(jìn)黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng),與肺組織中層粘連蛋白的重塑密切相關(guān)。
【圖文】：

華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文3.9 Transwell 黑色素瘤細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)3.9.1 Transwell 小室的基本結(jié)構(gòu)Transwell 是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)的主要材料 Transwell 小室，它是一個(gè)可以放置在 24 孔板中的杯狀結(jié)構(gòu)的裝置，杯底是一張有通透性的膜，杯壁是和其他部分一樣的塑料結(jié)構(gòu)。這層膜上有大小是 0.1-12.0μm 的微孔，根據(jù)不同的需要可以使用不同的材料，一般是聚碳酸酯膜。如圖 4 和圖 5 所示。

華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文3.9 Transwell 黑色素瘤細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)3.9.1 Transwell 小室的基本結(jié)構(gòu)Transwell 是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)的主要材料 Transwell 小室，它是一個(gè)可以放置在 24 孔板中的杯狀結(jié)構(gòu)的裝置，杯底是一張有通透性的膜，，杯壁是和其他部分一樣的塑料結(jié)構(gòu)。這層膜上有大小是 0.1-12.0μm 的微孔，根據(jù)不同的需要可以使用不同的材料，一般是聚碳酸酯膜。如圖 4 和圖 5 所示。
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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2 薛會(huì)麗;林德馨;鄭大利;;67 ku層黏連蛋白受體與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2008年01期

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1 唐健;新型金屬蛋白酶ADAMTS-18在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究[D];華東師范大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2642969