【摘要】：ADAMTS18是解整合素金屬蛋白酶家族(ADAMTSs)成員之一,它在器官發(fā)育、生殖、血管新生及凝血,炎癥、腫瘤等生理病理過程中,都起著非常重要的調(diào)控作用。Adamts18基因的突變和失活與腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移尤為密切。本課題主要研究Adamts18對黑色素轉(zhuǎn)移的影響及發(fā)病機理,為后期黑色素瘤的治療提供新的理論依據(jù)。本論文主要分為四個部分:一通過雜交方式獲得C57BL/6純系Adamts18基因缺陷小鼠將Adamts18基因敲除的C57BL/6/129SV背景的雜合子(HT)小鼠與C57BL/6純系野生(WT)小鼠回交10代,獲得C57BL/6純系Adamts18 HT小鼠。通過雜交獲得實驗所需要的野生(WT)小鼠和Adamts18基因缺陷(KO)小鼠。二Adamts18缺失在實驗性黑色素瘤轉(zhuǎn)移中的作用研究本實驗中的黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移模型模擬的是腫瘤轉(zhuǎn)移的最后一個步驟(是腫瘤細胞通過血液循環(huán)到肺部,在肺部生長成腫瘤的過程)。我們通過尾靜脈注射B16黑色素細胞(每只小鼠注射2×10~5 cells)的方式來探究Adamts18對黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果表明:B16黑色素瘤細胞可遷移到肺、脾、腸系膜、心臟和肝臟等多個內(nèi)臟器官。其中,Adamts18 KO小鼠肺轉(zhuǎn)移更嚴重,與WT對照組相比有顯著性差異(P0.05)。Adamts18 KO小鼠肺表面的結(jié)節(jié)數(shù)目和單位體積肺組織中結(jié)節(jié)數(shù)目明顯高于WT對照組。三ADAMTS18缺失在小鼠肺細胞外基質(zhì)(ECM)重塑中的作用研究細胞外基質(zhì)(ECM)微環(huán)境在腫瘤生長及擴增過程中起重要作用。ADAMTS18作為一種金屬蛋白酶,在ECM重塑中起重要作用。我們檢測發(fā)現(xiàn),Adamts18 KO小鼠肺組織層粘連蛋白(LN)表達明顯高于WT對照組,而IV型膠原蛋白沒有明顯改變。由于LN是PI3K-Akt-mTOR-SK6信號通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,在腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴增過程中起著重要的作用,因此我們進一步利用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)對PI3K和SK6的表達水平進行了測定。結(jié)果表明:與WT對照組相比,磷酸化的PI3K和SK6在Adamts18 KO小鼠肺組織中均顯著性激活。四層粘連蛋白(LN)在B16黑色素瘤細胞黏附、延展和趨化的作用研究通過Transwell趨化實驗,我們發(fā)現(xiàn)遷移到下室的細胞數(shù)隨著LN的濃度升高而增加。同時LN對B16黑色素瘤細胞延展和黏附作用的實驗中,隨著LN濃度的升高,其延展和黏附能力也不斷增強。因此,ADAMTS 18缺失可促進黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移和生長,與肺組織中層粘連蛋白的重塑密切相關(guān)。
【圖文】：

華東師范大學碩士學位論文3.9 Transwell 黑色素瘤細胞趨化實驗3.9.1 Transwell 小室的基本結(jié)構(gòu)Transwell 是一項實驗技術(shù)，這項技術(shù)的主要材料 Transwell 小室，它是一個可以放置在 24 孔板中的杯狀結(jié)構(gòu)的裝置，杯底是一張有通透性的膜，杯壁是和其他部分一樣的塑料結(jié)構(gòu)。這層膜上有大小是 0.1-12.0μm 的微孔，根據(jù)不同的需要可以使用不同的材料，一般是聚碳酸酯膜。如圖 4 和圖 5 所示。

華東師范大學碩士學位論文3.9 Transwell 黑色素瘤細胞趨化實驗3.9.1 Transwell 小室的基本結(jié)構(gòu)Transwell 是一項實驗技術(shù)，這項技術(shù)的主要材料 Transwell 小室，它是一個可以放置在 24 孔板中的杯狀結(jié)構(gòu)的裝置，杯底是一張有通透性的膜，，杯壁是和其他部分一樣的塑料結(jié)構(gòu)。這層膜上有大小是 0.1-12.0μm 的微孔，根據(jù)不同的需要可以使用不同的材料，一般是聚碳酸酯膜。如圖 4 和圖 5 所示。
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 田紅;肖桂芝;田苗;劉永貴;賀星;陳常青;;黑色素瘤治療藥物的研究進展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2015年07期

2 薛會麗;林德馨;鄭大利;;67 ku層黏連蛋白受體與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[J];醫(yī)學分子生物學雜志;2008年01期

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 唐健;新型金屬蛋白酶ADAMTS-18在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用及機制研究[D];華東師范大學;2014年

本文編號：2642969