【摘要】：【研究背景】甲狀腺腫瘤目前發(fā)病率呈上升和年輕化趨勢(shì),由于發(fā)病機(jī)制不明,使甲狀腺癌早期診斷成為臨床亟待解決的難題。篩選新的腫瘤發(fā)生相關(guān)基因的分子標(biāo)記物,開(kāi)發(fā)具有腫瘤靶向性的高分子造影劑,對(duì)甲狀腺腫瘤早期診斷意義重大。SHP-2是目前研究證實(shí)的一種致癌基因,屬于蛋白酪氨酸磷酸酶家族。SHP-2可以在多種細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑中發(fā)揮作用,促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。近年來(lái)不斷有研究報(bào)道,在多種實(shí)體腫瘤中SHP-2表達(dá)水平也是明顯增高的,并促進(jìn)了腫瘤的惡性生物學(xué)行為;本研究擬合成靶向納米造影劑,以期建立活體評(píng)估甲狀腺癌的影像評(píng)價(jià)體系,爭(zhēng)取實(shí)現(xiàn)甲狀腺腫瘤的早期準(zhǔn)確診斷。主要研究?jī)?nèi)容如下:第一部分SHP2在甲狀腺癌中表達(dá)及其對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響【研究目的】通過(guò)檢測(cè)SHP2在甲狀腺癌組織及細(xì)胞株中的表達(dá)水平,探討SHP2過(guò)表達(dá)在甲狀腺癌中的臨床意義及對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。【研究方法】本研究采用western和免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了SHP2在甲狀腺癌組織、癌旁組組及甲狀腺正常組織中的表達(dá)情況;檢測(cè)SHP-2表達(dá)抑制后對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、克隆形成能力和抗凋亡的影響。【研究結(jié)果】檢測(cè)了甲狀腺癌組織、癌旁組組及甲狀腺正常組織中SHP2的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)相對(duì)于其它兩組,SHP2在甲狀腺癌組織中表達(dá)明顯升高,且SHP2的表達(dá)水平與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P0.05)。另外,相對(duì)于正常甲狀腺細(xì)胞,SHP2在甲狀腺癌細(xì)胞株中也是呈高水平表達(dá)。SHP2的表達(dá)阻滯后,細(xì)胞的克隆形成明顯減少,凋亡細(xì)胞明顯增多,說(shuō)明SHP2高表達(dá)增加了細(xì)胞的增殖和抗凋亡能力;SHP2表達(dá)受到干擾后,裸鼠體內(nèi)成瘤能力明顯受到抑制�！窘Y(jié)論】SHP2過(guò)表達(dá)于甲狀腺癌細(xì)胞株和甲狀腺癌組織中,促進(jìn)了甲狀腺癌細(xì)胞增殖和抗凋亡能力,促進(jìn)了裸鼠體內(nèi)成瘤能力。第二部分SHP2靶向超聲納米造影劑的制備及表征【研究目的】構(gòu)建靶向甲狀腺癌SHP2的超聲分子探針,選用高分子材料聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)為外殼,液態(tài)氟碳PFP為內(nèi)核,檢測(cè)其物理學(xué)等特征。【研究方法】用雙乳化溶劑揮發(fā)法制備端羧基乳酸/羥基乙酸共聚物(PLGA-COOH)納米粒,以液態(tài)氟碳PFP為內(nèi)核,在納米粒表面連接SHP2抗體構(gòu)建靶向甲狀腺癌SHP2的US分子探針,即SHP2-PLGA納米粒,同時(shí)構(gòu)建非靶向PLGA納米粒。利用熒光顯微鏡、Malvern激光粒徑測(cè)量?jī)x,對(duì)其形態(tài)、結(jié)構(gòu)、粒徑、電位、吸收光譜和穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè);并將制備的乳液置于溫度調(diào)節(jié)板中,設(shè)置溫度至60度,用光學(xué)顯微鏡于高倍視野下觀察制備的乳液在溫度升高后發(fā)生的變化。【研究結(jié)果】成功構(gòu)建了靶向甲狀腺癌SHP2的US分子探針,其形態(tài)規(guī)則、呈球形,粒徑(765.0±12.5)nm,大小、分布均勻,分散性好,無(wú)明顯聚集,表面凹凸呈多孔結(jié)構(gòu)。經(jīng)溫度調(diào)節(jié),在溫度升高至40度開(kāi)始出現(xiàn)直徑約1um-5um的微氣泡�！窘Y(jié)論】成功制備出SHP2靶向超聲納米造影劑,該造影劑形態(tài)規(guī)則、大小均勻,穩(wěn)定性高,較低溫度就能促進(jìn)其液-氣相變。因此,此造影劑可實(shí)現(xiàn)US靶向顯像及溫度相變功能,可能會(huì)具有增強(qiáng)超聲顯像潛能。第三部分SHP2靶向超聲納米造影劑的生物相容性研究【研究目的】研究評(píng)價(jià)SHP2靶向造影劑生物相容性,為其進(jìn)一步臨床研究和轉(zhuǎn)化提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)�！狙芯糠椒ā坎捎肕TS等方法檢測(cè)靶向造影劑體外細(xì)胞毒性;采用LD50評(píng)價(jià)其在小鼠腹腔注射后短期體內(nèi)毒性�！狙芯拷Y(jié)果】MTS實(shí)驗(yàn)表明SHP2靶向超聲納米造影劑對(duì)甲狀腺細(xì)胞沒(méi)有明顯的毒副作用;Countess觀察造影劑對(duì)細(xì)胞存活率及死亡率沒(méi)有影響;LD50檢測(cè)靶向造影劑具有較廣的安全范圍;Western-Blot檢測(cè)甲狀腺癌細(xì)胞Caspase-3、BAX、Bcl-2表達(dá),表明納米造影劑具有很好的生物安全性�！窘Y(jié)論】SHP2靶向超聲造影劑具有很好的生物安全性,可進(jìn)一步用于腫瘤的診斷。第四部分SHP2靶向超聲納米造影劑在甲狀腺癌早期診斷中的應(yīng)用【研究目的】(1)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn):測(cè)試造影劑的靶向結(jié)合效率,超聲體外顯影強(qiáng)度。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):通過(guò)超聲活體成像檢測(cè)靶向造影劑在裸鼠體內(nèi)的尋靶能力,探討甲狀腺癌的超聲早期靶向顯像的可行性�！狙芯糠椒ā繉⒃囼�(yàn)分為兩組分別進(jìn)行,靶向組:NPs-SHP2,非靶向組:NPs-Control,觀察兩組造影劑的體外細(xì)胞靶向性;將靶向造影劑經(jīng)尾靜脈注射到模型動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)低強(qiáng)度聚焦超聲(low intensity focused ultrasound,LIFU)儀輻照后,用US觀察裸鼠體內(nèi)成像能力。多組均數(shù)間用方差分析進(jìn)行比較,組內(nèi)兩均數(shù)間用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。【研究結(jié)果】體外尋靶實(shí)驗(yàn)顯示,靶向組造影劑組細(xì)胞周?chē)懈嗟募{米球聚集。裸鼠體內(nèi)靶向成像發(fā)現(xiàn),經(jīng)LIFU照射20min后,相對(duì)于非靶向組,靶向組超聲信號(hào)明顯增強(qiáng)�！窘Y(jié)論】本研究為SHP2靶向超聲造影劑應(yīng)用于甲狀腺癌早期準(zhǔn)確診斷提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R736.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何玲娟;程洪強(qiáng);柯越海;王臨潤(rùn);;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在肺癌中作用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2016年01期

2 胡中倩;張熾敏;;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2基因及其與實(shí)體瘤關(guān)系[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志;2013年02期

3 程玉生;徐峰;沈華浩;;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2與呼吸系統(tǒng)疾病[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2011年05期

4 王磊;秦錫虎;王旭芬;朱峰;;Shp2蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];吉林醫(yī)學(xué);2011年36期

5 羅虎;周向東;;SHP2及其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];生命的化學(xué);2010年06期

6 許云;章云;郭曉紅;柯越海;;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制劑的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2016年08期

7 陳欽;鄭瑛;張斌;曹旭晨;;SHP2與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤臨床;2014年15期

8 鄧騰;楊莉娟;羅國(guó)勇;李晟;杜寶文;王飛;;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制劑體外篩選模型的建立及應(yīng)用[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào);2015年04期

9 蔡曉黎;耿果霞;劉亞偉;李青旺;;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因mRNA在小鼠睪丸發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年11期

10 黃巖;王潔;朱江波;常文軍;陸一鳴;;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在結(jié)直腸“炎-癌”中的作用[J];生命的化學(xué);2016年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 徐峰;趙麗芳;;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2調(diào)控肺部炎癥和細(xì)菌清除[A];2016（第三十八屆）浙江省呼吸系病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

2 趙麗芳;夏靖燕;周慧;錢(qián)景;徐峰;;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2調(diào)控肺部炎癥和細(xì)菌清除機(jī)制研究[A];全國(guó)寄生蟲(chóng)病高峰論壇暨2016年浙江省熱帶病與寄生蟲(chóng)病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

3 趙麗芳;夏靖燕;周慧;錢(qián)景;徐峰;;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2調(diào)控肺部炎癥和細(xì)菌清除機(jī)制研究[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第十次學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2016年

4 胡佳;李聰;楊朝勇;;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2核酸適體的篩選及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第27屆學(xué)術(shù)年會(huì)第03分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2010年

5 朱昱;;放射狀膠質(zhì)細(xì)胞Shp2條件性敲除對(duì)新生小鼠大腦皮質(zhì)、小腦及感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能發(fā)育影響研究[A];長(zhǎng)三角地區(qū)神經(jīng)科學(xué)論壇2017摘要集[C];2017年

6 汪思應(yīng);李菲菲;鄭紅;余科科;倪芳;儲(chǔ)著朗;瞿成奎;;激活突變SHP2酪氨酸磷酸酶可能促進(jìn)小鼠白血病發(fā)生及增強(qiáng)白血病細(xì)胞遷移能力[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)受體和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)專業(yè)委員會(huì)暨消化專業(yè)委員會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

7 夏麗霞;邱章偉;華雯;田寶平;陳志華;李雯;沈華浩;;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在哮喘小鼠骨髓嗜酸性粒細(xì)胞祖細(xì)胞分化中的作用機(jī)制研究[A];華東地區(qū)第13屆中青年呼吸論壇論文集[C];2012年

8 夏麗霞;邱章偉;華雯;田寶平;陳志華;李雯;沈華浩;;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在哮喘小鼠骨髓嗜酸性粒細(xì)胞祖細(xì)胞分化中的作用機(jī)制研究[A];2012年浙江省內(nèi)科學(xué)年會(huì)論文集[C];2012年

9 夏麗霞;華雯;田寶平;金嫣;陳志華;李雯;沈華浩;;髓系敲除Shp2在哮喘小鼠骨髓嗜酸性粒細(xì)胞分化和凋亡中的作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

10 覃雪軍;邱章偉;王蘋(píng)莉;張根生;李娜;沈華浩;;條件性敲除氣道上皮細(xì)胞SHP2對(duì)小鼠氣道重構(gòu)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)哮喘學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)哮喘聯(lián)盟第三次大會(huì)論文匯編[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 胡中倩;SHP2酪氨酸磷酸酶在甲狀腺癌中表達(dá)意義及SHP2靶向超聲造影劑在甲狀腺癌早期診斷中的應(yīng)用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

2 張斌;Shp2活性在突觸可塑性中的調(diào)控和功能研究[D];浙江大學(xué);2016年

3 夏麗霞;酪氨酸磷酸酶SHP2在過(guò)敏性氣道炎癥的嗜酸性粒細(xì)胞分化中的作用機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2014年

4 唐春蘭;SHP2在順鉑誘導(dǎo)的肺癌多藥耐藥中的作用及其分子機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 韓濤;Shp2調(diào)控肝癌進(jìn)展的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)及臨床意義研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 張瑜;酪氨酸磷酸酶Shp2下調(diào)IL-10介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞抗炎反應(yīng)促進(jìn)腸道炎癥的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2018年

7 蔣成英;GA6與SHP2蛋白在肝細(xì)胞癌中的臨床意義及其作用機(jī)制的研究[D];南開(kāi)大學(xué);2012年

8 楊雪梅;SHP2在小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 陶波;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2調(diào)控巨噬細(xì)胞活化與肺泡微環(huán)境穩(wěn)態(tài)研究[D];浙江大學(xué);2014年

10 謝紅軍;Shp2在口腔鱗癌中的表達(dá)及對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];山東大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄭佳薇;SHP2在胰腺導(dǎo)管腺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2017年

2 王磊;Shp2蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];蘇州大學(xué);2010年

3 許云;酪氨酸磷酸酶Shp2在小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘中的作用研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 趙麗芳;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2調(diào)控肺部炎癥和細(xì)菌清除的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 劉亞楠;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在香煙誘導(dǎo)肺纖維化中的調(diào)節(jié)作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

6 李俊;酪氨酸磷酸酶Shp2對(duì)雌激素調(diào)控乳腺癌發(fā)生的影響[D];廈門(mén)大學(xué);2009年

7 李芬芬;蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在香煙誘導(dǎo)的肺癌炎癥反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用[D];浙江大學(xué);2012年

8 張珊珊;酪氨酸磷酸酶SHP2（PTPN11）在乳腺癌中的生物學(xué)功能及結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)[D];浙江大學(xué);2011年

9 陳佳;SHP2抑制劑PHPS1對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 蔡曉黎;Shp2在小鼠出生后睪丸發(fā)育不同階段的表達(dá)及與血液中睪酮水平相關(guān)性淺析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：2636029