發(fā)布時間：2020-04-21 20:16

【摘要】：目的:肝癌是目前最常見的惡性腫瘤之一,嚴重影響著人類的健康。目前肝癌治療大多是采取手術切除、放療、化療等綜合治療。但由于目前化療藥物的耐藥性、副作用及預后差等一系列原因,新型抗腫瘤藥物的研發(fā)十分必要。自從順鉑被合成后,作為抗腫瘤藥物應用于臨床,金屬配合物便開始備受關注。2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物是一種新型的、具有生物活性的金屬配合物,但其抗腫瘤效果及其作用機制尚不清楚,本文主要研究該新型金屬配合物對肝癌細胞增殖、凋亡及周期的影響及其分子機制。方法:1、采用MTT篩選出對2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用較為敏感的肝癌細胞株;2、利用MTT、平板克隆形成實驗檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后對肝癌細胞HepG2增殖的抑制作用;3、采用流式細胞技術檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后肝癌細胞的凋亡和周期阻滯的情況;4、Hoechst染色和JC-1染色觀察2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后肝癌細胞凋亡的形態(tài)學改變;5、活性氧染色檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后的肝癌細胞內活性氧的水平及是否存在活性氧依賴關系;6、采用Western Blotting技術檢測藥物作用后,肝癌細胞的凋亡相關因子和周期阻滯相關因子的表達。結果:1、MTT法篩選出對2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物敏感的肝癌細胞株HepG2細胞。2、2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物對HepG2細胞增殖的抑制作用具有時間依賴和濃度依賴關系。3、40μM的2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用于肝癌細胞48h后,流式檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物能明顯誘導HepG2凋亡,與對照組差異顯著(P0.05),Hoechst染色可見2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物誘導HepG2細胞核固縮,JC-1染色可見細胞凋亡后,線粒體外膜電勢降低,除此之外,活性氧檢測發(fā)現(xiàn)細胞內活性氧水平明顯升高,但2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物誘導HepG2的凋亡不依賴活性氧的產生。4、Western Blotting實驗表明,線粒體信號通路和死亡受體信號通路參與了2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物誘導HepG2細胞的凋亡,并且Bcl-2家族也參與了2-苯甲酰基吡啶銠(II)配合物誘導HepG2細胞凋亡的過程;另外,2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物可能通過上調細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21,下調細胞周期蛋白CyclinD1/CyclinA1/CyclinE1和細胞周期蛋白依賴性激酶CDK2/CDK6的表達,引起細胞周期阻滯在G1期。結論:2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物是一種潛在的新型抗肝癌藥物,能夠引起HepG2細胞周期阻滯在G1期;并且通過線粒體信號通路和死亡受體信號通路誘導肝癌細胞HepG2凋亡。
【圖文】：

作用于HepG2細胞48h后，actived-caspase-3和cleaved-PARP表達增加，，而pro-caspase-3和Survivin(目前發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子)表達降低。如圖5B/C所示，Rh(L)2Cl2不但增加了線粒體通路中Apaf-1, caspase-9和細胞質中cytochrome-c的表達，而且增加了死亡受體通路中caspase-8、Fas的表達。這表明線粒體通路信號和死亡受體通路信號都參與Rh(L)2Cl2誘導HepG2的凋亡。已有研究表明，Bcl-2家族在線粒體信號通路中發(fā)揮了重要作用，因此我們探討的Bcl-2家族中凋亡抑制因子Bcl-2和促凋亡因子Bax的表達。結果如圖5D所示，Bcl-2的表達明顯降低，而Bax的表達明顯增加。這些數(shù)據(jù)證實，Bcl-2家族參與了Rh(L)2Cl2誘導HepG2
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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1 詹啟敏;陳杰;;細胞周期與腫瘤轉化醫(yī)學[J];中國腫瘤臨床;2014年01期

2 馮覺平;于世英;王亞萍;袁響林;李敏;方靜;;奧沙利鉑對肝癌細胞HepG2生物學行為的影響[J];腫瘤;2010年09期

本文編號：2635693