【摘要】：α-catenin(α-連環(huán)蛋白)是連環(huán)蛋白家族中的一員,由基因CTNNA1編碼產(chǎn)生。CTNNA1在多種腫瘤組織中表達(dá)降低或者缺失,并伴隨著腫瘤惡性程度的增高。最新研究報(bào)道,α-連環(huán)蛋白在皮膚癌中表達(dá)較低。在小鼠模型中,敲除皮膚組織中的α-連環(huán)蛋白直接激活NF-κB信號通路以及其靶基因。同樣在基底樣乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),E-cadherin和α-連環(huán)蛋白同時(shí)缺失導(dǎo)致NF-κB通路高度激活,從而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。SUMO修飾作為蛋白的一種翻譯后修飾,往往改變蛋白的理化性質(zhì),從而影響目的蛋白相關(guān)的信號通路。通過數(shù)據(jù)庫分析以及α-連環(huán)蛋白的序列分析,我們發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)潛在的SUMO修飾位點(diǎn)。因此,本研究從α-連環(huán)蛋白的SUMO修飾入手,探討了α-連環(huán)蛋白抑制乳腺癌發(fā)展的調(diào)控機(jī)理。主要工作如下:1.我們以細(xì)胞系HEK293T為實(shí)驗(yàn)材料,通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)α-連環(huán)蛋白存在SUMO修飾,并且其修飾能被SUMO修飾的E2酶增強(qiáng),同時(shí)被去SUMO修飾酶SENP1減弱。通過內(nèi)源的蛋白互作實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)α-連環(huán)蛋白與Ubc9存在相互作用。因此,我們確定α-連環(huán)蛋白能夠發(fā)生SUMO修飾。通過點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn),我們確定α-連環(huán)蛋白的SUMO修飾位點(diǎn)為第870位賴氨酸。2.通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),野生型的α-連環(huán)蛋白與SUMO修飾缺失突變體的亞細(xì)胞定位沒有顯著差異。但是,我們發(fā)現(xiàn)SUMO修飾的α-連環(huán)蛋白只分布于細(xì)胞質(zhì)。通過蛋白穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)α-連環(huán)蛋白野生型和突變體的蛋白穩(wěn)定性沒有顯著差異。3.通過報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn),α-連環(huán)蛋白SUMO修飾缺失突變體對NF-κB通路的抑制作用與野生型相比幾乎缺失。通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),野生型的α-連環(huán)蛋白與IκBα存在相互作用,而SUMO修飾突變體與IκBα相互作用減弱。4.通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),野生型的α-連環(huán)蛋白顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖能力和運(yùn)動(dòng)能力,而SUMO修飾缺失的α-連環(huán)蛋白抑制作用顯著減低。此外,在小鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中,SUMO修飾突變的α-連環(huán)蛋白對腫瘤的抑制能力與野生型相比顯著降低。綜上所述,本論文發(fā)現(xiàn)α-連環(huán)蛋白調(diào)控NF-κB通路的具體分子機(jī)理,即SUMO修調(diào)控α-連環(huán)蛋白與IκBα的相互作用并調(diào)控乳腺癌的進(jìn)程。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

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本文編號：2627687