【摘要】：目的:分析SMYD2在肺癌細(xì)胞系和肺癌腫瘤組織中的表達(dá)情況與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。并進(jìn)一步探索SMYD2與p53、PTEN轉(zhuǎn)錄后修飾的關(guān)系,p53K370mel和PTENSer380pi與肺癌患者的生存預(yù)后的的關(guān)系。方法:收集101例肺癌患者的術(shù)后腫瘤組織和41例正常肺組織蠟塊標(biāo)本,做成組織芯片。應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測肺癌組織中SMYD2的表達(dá),與臨床病理各因素和生存預(yù)后的分析。應(yīng)用Western Blotting和免疫組織化學(xué)的方法檢測p53和PTEN的表達(dá)情況,在石蠟切片中確定SMYD2、p53、p53K370mel、PTEN、PTENSer380pi在腫瘤組織內(nèi)表達(dá)的最佳濃度。用多標(biāo)記染色的方法分別在兩張組織芯片中檢測SMYD2、p53、p53K370mel和SMYD2、PTEN、PTENSer380pi的表達(dá),分析SMYD2與p53、p53K370mel、PTEN、PTENSer380pi的表達(dá)是否存在相關(guān)性,又分析了p53K370mel和PTENSer380pi與肺癌患者OS和DFS的相關(guān)性。結(jié)果:1、肺癌細(xì)胞和肺癌組織中SMYD2、p53和PTEN表達(dá)情況及其與臨床病理各因素的相互關(guān)系:與正常肺上皮細(xì)胞相比,SMYD2呈現(xiàn)高表達(dá),而p53和PTEN呈現(xiàn)低表達(dá)。SMYD2主要在肺癌的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)。SMYD2在腫瘤組織比癌旁組織中的表達(dá)明顯升高(P=0.003),而p53和PTEN在癌旁組織中的表達(dá)相比于肺癌組織高且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001和P=0.010)。腫瘤細(xì)胞中SMYD2表達(dá)與臨床各病理因素之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)SMYD2的表達(dá)與患者的年齡、性別、吸煙狀況、腫塊位置、病理類型、TNM分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性(P0.05)。2、在多標(biāo)記染色的組織芯片上分析SMYD2和p53、PTEN以及它們的轉(zhuǎn)錄后修飾的相互關(guān)系:對(duì)一張組織芯片上肺癌組織中的SMYD2、p53、p53K370me1的表達(dá)做相關(guān)性分析。結(jié)果所示,肺癌組織中SMYD2與p53呈顯著的負(fù)相關(guān)(rs=-0.259,P=0.029),腫瘤組織中P53和p53K370me1表現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)聯(lián)系(rs=-0.508,P=0.000,P0.01),而肺癌組織中SMYD2與p53K370me1呈顯著的正相關(guān)(rs=0.531,P=0.000,P0.01)。對(duì)另一張組織芯片上肺癌組織中的SMYD2、PTEN、PTENSer380pi的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果所示,肺癌組織中SMYD2與PTEN呈顯著的負(fù)相關(guān)(rs=-0.306,P=0.007),腫瘤組織中PTEN和PTENSer380pi表現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)聯(lián)系(rs=-0.056,P=0.032),而肺癌組織中SMYD2與PTENSer380pi呈顯著的正相關(guān)(rs=0.343,P=0.002)。3、肺癌患者組織中SMYD2、p53k370me1和PTENSer380pi的表達(dá)水平在患者DFS和OS中的生存預(yù)后分析:與低表達(dá)組相比,SMYD2、p53K370me1和PTENSer380pi的高表達(dá)組的預(yù)后較差且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.SMYD2在肺癌中高表達(dá)并且與不良預(yù)后相關(guān)2.肺癌組織中SMYD2與p53呈顯著的負(fù)相關(guān);SMYD2與p53K370pi呈顯著的正相關(guān);p53和p53K370pi表現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)3.肺癌組織中SMYD2與PTEN呈顯著的負(fù)相關(guān);SMYD2與PTENSer380pi呈正相關(guān);PTEN和PTENSer380pi表現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)。
【圖文】：

圖 1 BCA 法測定蛋白質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線.2.3 電泳以及免疫印跡在蛋白質(zhì)樣品中加入相應(yīng)體積的上樣緩沖液（蛋白質(zhì)樣品：上樣緩沖液=3:1），于95度的金屬浴中煮沸10分鐘后立即放于冰上5分鐘。每種蛋白上樣20ug，據(jù)測出的蛋白濃度計(jì)算出上樣的體積，等量等體積上樣，體積不足需要用*上樣緩沖液補(bǔ)足，蛋白 Marker 上樣 5ul 開始電泳。蛋白在濃縮膠中以 80 V壓電泳，，待蛋白 Marker 開始分離后改為 120 V，待蛋白跑到底部時(shí)停止電。轉(zhuǎn)膜：剪下比濾紙面積大的 PVDF 膜，浸泡在甲醇中約 5 分鐘，另將濾紙、綿墊浸入轉(zhuǎn)膜液中，按照黑色板子、海綿墊、三層濾紙、膠、PVDF 膜、三濾紙、海綿墊、白板子這樣的順序做成“三明治”，（不要有氣泡）根據(jù)的蛋白分子量的大小確定恒流的大小以及轉(zhuǎn)膜時(shí)間，一般以 300mV 轉(zhuǎn)膜~1.5 小時(shí)。用 5%的牛奶配成封閉液，將 PVDF 膜正面的做好標(biāo)記置于封閉液中室溫封

圖 2 SMYD2 在肺癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況癌組織 SMYD2 的表達(dá)與患者臨床病理特征相關(guān)性SMYD2 的表達(dá)高表達(dá) 低表達(dá) 75 37 3855 29(78.4%) 26(68.4%) 20 8(21.6%) 12(31.6%)52 28(75.7%) 24(63.2%) 23 9(24.3%) 14(36.8%)53 28(75.7%) 25(65.8%) 22 9(24.3%) 13(34.2%)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2621908