【摘要】：第一部分宿主缺失CCL2或CCR2基因對前列腺癌骨轉移的影響宿主骨微環(huán)境和前列腺癌細胞之間的相互作用增加骨髓微環(huán)境細胞和前列腺癌細胞表達和分泌一些重要細胞因子、趨化因子及粘附分子,促進前列腺癌骨轉移。CCL2不僅由前列腺癌細胞分泌,而且骨微環(huán)境中的細胞也可大量產(chǎn)生。之前的研究主要探討腫瘤來源的CCL2對腫瘤生長、轉移的影響和機制,而對于宿主來源的CCL2或者CCR2在前列腺癌骨轉移中的研究較少,且分子機制不清楚。本課題首先構建了特異性前列腺癌骨轉移動物模型,為研究宿主來源的CCL2在其中的作用和分子機制打下了堅實的基礎。我們利用CCL2和CCR2敲除小鼠,通過左心室注射前列腺癌特異性骨轉移細胞,實時監(jiān)測腫瘤細胞轉移情況,研究CCL2/CCR2對前列腺癌骨轉移的影響。結果顯示宿主缺失CCL2基因能顯著減緩前列腺癌細胞骨轉移的發(fā)生,減慢腫瘤細胞在骨內增殖速度,顯著延長小鼠的存活時間以及減小股骨的溶骨性損傷;而宿主缺失CCR2卻顯示增加前列腺癌骨轉移,縮短小鼠存活時間。第二部分宿主缺失CCL2減少前列腺癌骨轉移的機制探討腫瘤細胞在骨髓中定植需要經(jīng)過多個步驟,包括血管的生成,局部侵襲和轉移,脫離原發(fā)灶進入血管,然后從血管溢出,在骨髓中適應,存活和定植。腫瘤細胞來源的CCL2能夠結合CCR2促進腫瘤增殖和血管生成,以及招募間質細胞利于腫瘤轉移。本課題主要研究宿主來源的CCL2在前列腺癌骨轉移中的作用,試圖從不同方面闡述其對前列腺癌骨轉移影響的機制�；谇捌跇嫿ǖ那傲邢侔┕寝D移模型,我們首先將WT鼠或CCL2 KO鼠中分離出的骨轉移細胞,以及親本細胞進行RNA-Seq;其次,比較來源于CCL2 KO鼠和WT鼠的骨轉移細胞表達差異,找到與宿主CCL2相關的基因改變以及通路改變,試圖找到一條信號通路闡明CCL2 KO抑制前列腺癌骨轉移的分子機制;再次,通過流式細胞儀檢測骨微環(huán)境中MDSC的數(shù)量變化;最后,在體內和體外,觀察宿主來源的CCL2引起的骨吸收和骨形成的變化機制。結果顯示:(1)我們鑒定了前列腺癌骨轉移細胞的生物行為學特性;(2)通過分析CCL2 KO鼠和WT鼠的骨轉移細胞表達差異,經(jīng)過聚類分析和KEGG通路富集,我們鑒定了細胞周期蛋白CCND2與CCL2的關系,定量逆轉錄聚合酶連鎖反應(Quantitative real-time-PCR,qRT-PCR)也證實了CCL2 KO鼠分離的骨轉移細胞CCND2基因明顯比WT鼠的表達低,CCL2 KO鼠分離的骨轉移細胞相較與親本細胞增殖能力也降低;(3)宿主缺失CCL2基因減少了前列腺癌骨轉移微環(huán)境中MDSC的產(chǎn)生,也減少了前列腺癌的溶骨性損傷,包括減少股骨TRAP陽性細胞數(shù)和PCNA陽性細胞數(shù),增加骨密度等;(4)體外證實了腫瘤細胞條件培養(yǎng)基處理敲除CCL2基因的破骨細胞分化能力減弱,qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)破骨細胞的分化標志物NFATc1的表達也顯著降低。第三部分前列腺癌潛在轉移標志物的篩選前列腺癌在美國是男性發(fā)病率最高的惡性腫瘤。大多數(shù)前列腺癌確診時已是腫瘤晚期或已發(fā)生轉移。骨骼是前列腺癌最常見的轉移部位,骨轉移是導致高死亡率的最主要原因。本部分我們通過兩種方法篩選前列腺癌轉移相關的生物標志物。首先,將親本細胞和骨轉移細胞進行RNA-Seq,通過差異基因篩選富集分析,找到可能引起特異性前列腺癌骨轉移的生物標志物。其次,使用Oncomine,cBioPortal和TCGA公共數(shù)據(jù)庫篩選前列腺癌與癌旁組織的差異基因,并調查差異基因與臨床病理參數(shù)之間潛在的相關性并用于估計疾病的進程和預后。我們發(fā)現(xiàn)C10orf116拷貝數(shù)缺失有助于我們評估PCa侵襲轉移能力和判斷預后。結論1.宿主缺失CCL2能減緩前列腺癌細胞在骨內的生長,而宿主缺失CCR2卻顯示增加前列腺癌骨轉移,縮短小鼠存活時間。2.宿主缺失CCL2基因可通過抑制MDSC細胞招募到腫瘤微環(huán)境,從而促進免疫應答來抑制腫瘤細胞在骨內的生長和定植。3.宿主缺失CCL2基因引起破骨細胞分化障礙,從而抑制前列腺癌的溶骨性損傷。4.通過分析RNA-Seq數(shù)據(jù),我們篩選出一些可能與前列腺癌骨轉移相關的生物標志物并進行了初步鑒定,后續(xù)的功能實驗尚在進行中。5.通過挖掘公共數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)C10orf116拷貝數(shù)缺失可作為一個預測指標,有助于評估前列腺癌侵襲轉移能力和判斷預后。
【圖文】：

的 CCL2 調控前列腺癌骨轉移的作用機制及潛在轉移標志物的篩選 2018 屆博士學察特異性骨轉移的情況，也不能深入研究腫瘤細胞與免疫系作用，誘導周期較長，每周需要注射不同的CCL2 中和抗體成本高。CCR2 與前列腺癌骨轉移的研究報道不多，而宿主R2 對前列腺癌骨轉移的研究報道更少。本課題采用具有免7BL/6J小鼠，，采用左心室注射RM1 細胞，模擬了臨床上前胞從血液循環(huán)轉移到骨的過程，通過從骨髓分離腫瘤細胞再式獲得靶向骨特異性的前列腺癌細胞（RM1-BM）。為后續(xù)腺癌特異性骨轉移的分子機制奠定了基礎。

的 CCL2 調控前列腺癌骨轉移的作用機制及潛在轉移標志物的篩選 2018 屆博士溶液和 75％酒精對其胸腹部仔細消毒，重復兩次； 找好體表標志，左心室位于胸骨和劍突連線中點稍偏四肋間隙內（如圖 1-2 所示），隨后用胰島素針注射入 2細胞懸液（1×105個細胞，RM1-BM2），回抽血液呈鮮 將小鼠移至復溫燈下照射幫助小鼠恢復體溫，直至其 重復以上操作。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25

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本文編號：2621379