【摘要】：目的:探討鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin CRT)在膽囊癌組織中表達(dá)及其對(duì)GBC-SD細(xì)胞株生物學(xué)行為的作用。方法:利用免疫組織化學(xué)及RT-qPCR測(cè)定膽囊癌組織、癌旁組織和慢性膽囊炎組織中CRT蛋白和mRNA的表達(dá)。利用小干擾RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默GBC-SD細(xì)胞株CRT表達(dá),通過Western blotting方法檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效果,Cell counting kit-8(CCK-8)及平板克隆實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞的增殖能力;應(yīng)用流式儀測(cè)定GBC-SD細(xì)胞株的凋亡情況及細(xì)胞周期的改變;運(yùn)用劃痕及Transwell小室測(cè)定GBC-SD細(xì)胞株的遷移情況;Western blotting方法檢測(cè)p-Akt及MMP-9蛋白表達(dá)。結(jié)果:與腫瘤旁及慢性膽囊炎標(biāo)本比較,CRT mRNA在膽囊癌標(biāo)本中高表達(dá)(t=5.571,P0.05)。siCRT-1、siCRT-2實(shí)驗(yàn)組24h及48h相對(duì)存活率分別為(71.5±6.3)%,(79.5±2.7)%;(62.6±8.8)%,(55.6±2.6)%�？瞻捉M,陰性對(duì)照組,siCRT-1,siCRT-2的凋亡率分別為(3.0±1.8)%,(4.7±1.3)%,(13.6±1.0)%,(20.0±4.0)%。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示:空白組,陰性對(duì)照組,siCRT-1,siCRT-2的劃痕修復(fù)率分別為(0.67±0.02),(0.58±0.02),(0.22±0.01),(0.37±0.04)。Transwell結(jié)果顯示,空白組,陰性對(duì)照組,siCRT-1,siCRT-2的細(xì)胞穿膜個(gè)數(shù)分別為(301.8±10.7),(296.6±14.5),(178.0±10.1),(165.2±12.0)。與空白組及陰性對(duì)照組比較,siCRT-1,siCRT-2實(shí)驗(yàn)組24h,48h相對(duì)存活率明顯降低,凋亡上升,遷移能力下降(F=29.310,118.618,69.651,144.515,190.145,P0.05)。沉默CRT相關(guān)基因后,與空白組及陰性對(duì)照組相比,p-Akt及MMP-9蛋白表達(dá)程度均下降。結(jié)論:CRT在膽囊癌中高表達(dá),CRT表達(dá)下調(diào)介導(dǎo)的膽囊癌生物學(xué)行為的改變可能與p-Akt/MMP-9通路相關(guān)。
【圖文】：

9 1 CRT 蛋白及 mRNA 在膽囊癌、癌旁及慢性膽囊炎組織中的表達(dá)情況（免疫組化 x100）； 和 1B：CRT 在膽囊癌癌旁組織中陽性表達(dá)；1C 和 1D：CRT 在慢性膽囊炎組織中低表達(dá) 和 1F：CRT 在膽囊癌組織中強(qiáng)陽性表達(dá)；1G：CRT 在膽囊癌中 mRNA 表達(dá)

3.結(jié)果3.1. 沉默 CRT 抑制膽囊癌細(xì)胞增殖及克隆形成：特異性沉默 CRT 表達(dá)后，利用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CRT對(duì)膽囊癌細(xì)胞增殖影響，，結(jié)果顯示：siCRT-1及siCRT-作用 GBC-SD 細(xì)胞 24、48h 后，相對(duì)存活率分別（71.5±6.3）%，（79.5±2.7）%（62.6±8.8）%，（55.6±2.6）%，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，siCRT-及 siCRT-2 實(shí)驗(yàn)組相對(duì)生長(zhǎng)率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=29.310 ，118.618，P<0.05）；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示，與空白組與陰性對(duì)照組比較，siCRT-1 及siCRT-2 組降低 GBC-SD 細(xì)胞克隆能力，提示沉默 CRT 的表達(dá)抑制膽囊癌細(xì)胞的增殖及克隆能力（圖 2）。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2619783