【摘要】：目的:探討鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin CRT)在膽囊癌組織中表達及其對GBC-SD細胞株生物學行為的作用。方法:利用免疫組織化學及RT-qPCR測定膽囊癌組織、癌旁組織和慢性膽囊炎組織中CRT蛋白和mRNA的表達。利用小干擾RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默GBC-SD細胞株CRT表達,通過Western blotting方法檢驗轉(zhuǎn)染效果,Cell counting kit-8(CCK-8)及平板克隆實驗測定細胞的增殖能力;應(yīng)用流式儀測定GBC-SD細胞株的凋亡情況及細胞周期的改變;運用劃痕及Transwell小室測定GBC-SD細胞株的遷移情況;Western blotting方法檢測p-Akt及MMP-9蛋白表達。結(jié)果:與腫瘤旁及慢性膽囊炎標本比較,CRT mRNA在膽囊癌標本中高表達(t=5.571,P0.05)。siCRT-1、siCRT-2實驗組24h及48h相對存活率分別為(71.5±6.3)%,(79.5±2.7)%;(62.6±8.8)%,(55.6±2.6)%�？瞻捉M,陰性對照組,siCRT-1,siCRT-2的凋亡率分別為(3.0±1.8)%,(4.7±1.3)%,(13.6±1.0)%,(20.0±4.0)%。劃痕實驗顯示:空白組,陰性對照組,siCRT-1,siCRT-2的劃痕修復率分別為(0.67±0.02),(0.58±0.02),(0.22±0.01),(0.37±0.04)。Transwell結(jié)果顯示,空白組,陰性對照組,siCRT-1,siCRT-2的細胞穿膜個數(shù)分別為(301.8±10.7),(296.6±14.5),(178.0±10.1),(165.2±12.0)。與空白組及陰性對照組比較,siCRT-1,siCRT-2實驗組24h,48h相對存活率明顯降低,凋亡上升,遷移能力下降(F=29.310,118.618,69.651,144.515,190.145,P0.05)。沉默CRT相關(guān)基因后,與空白組及陰性對照組相比,p-Akt及MMP-9蛋白表達程度均下降。結(jié)論:CRT在膽囊癌中高表達,CRT表達下調(diào)介導的膽囊癌生物學行為的改變可能與p-Akt/MMP-9通路相關(guān)。
【圖文】：

9 1 CRT 蛋白及 mRNA 在膽囊癌、癌旁及慢性膽囊炎組織中的表達情況（免疫組化 x100）； 和 1B：CRT 在膽囊癌癌旁組織中陽性表達；1C 和 1D：CRT 在慢性膽囊炎組織中低表達 和 1F：CRT 在膽囊癌組織中強陽性表達；1G：CRT 在膽囊癌中 mRNA 表達

3.結(jié)果3.1. 沉默 CRT 抑制膽囊癌細胞增殖及克隆形成：特異性沉默 CRT 表達后，利用CCK-8實驗檢測CRT對膽囊癌細胞增殖影響，，結(jié)果顯示：siCRT-1及siCRT-作用 GBC-SD 細胞 24、48h 后，相對存活率分別（71.5±6.3）%，（79.5±2.7）%（62.6±8.8）%，（55.6±2.6）%，與空白對照組及陰性對照組比較，siCRT-及 siCRT-2 實驗組相對生長率下降，差異有統(tǒng)計學意義（F=29.310 ，118.618，P<0.05）；平板克隆形成實驗顯示，與空白組與陰性對照組比較，siCRT-1 及siCRT-2 組降低 GBC-SD 細胞克隆能力，提示沉默 CRT 的表達抑制膽囊癌細胞的增殖及克隆能力（圖 2）。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.8

【參考文獻】

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