【摘要】：目的:結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是全球最常見的惡性腫瘤之一,它的發(fā)病率和死亡率在男性和女性患者中均位列第三位。盡管隨著手術(shù)技術(shù)的提高和放化療方案的完善,結(jié)直腸癌患者的預(yù)后得到了較大改善,但仍有近50%的患者出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移。因此,找到一種敏感的分子標(biāo)志物來預(yù)測結(jié)直腸癌患者的預(yù)后是當(dāng)今的研究熱點(diǎn)。Zeste基因增強(qiáng)子同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)是多梳蛋白家族(PcG)中的一員,通過組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶中高度保守的SET區(qū)域可催化組蛋白H3第27位(H3K27m3)賴氨酸進(jìn)行甲基化修飾,從而抑制多種抑癌基因的表達(dá),發(fā)揮其調(diào)控作用。本研究擬采用免疫組化方法檢測EZH2和H3K27m3在55例結(jié)直腸癌組織及其配對的正常組織中的表達(dá)情況,并結(jié)合結(jié)直腸癌的臨床病理特征分析EZH2和H3K27m3在結(jié)直腸癌中的表達(dá)模式及兩者的表達(dá)相關(guān)性,并分析EZH2和H3K27m3對結(jié)直腸癌患者預(yù)后的預(yù)測作用。隨后,通過體外構(gòu)建敲低EZH2的結(jié)腸癌細(xì)胞株進(jìn)一步驗(yàn)證EZH2對結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲能力的調(diào)控作用。方法:1.收集2012年1月至2012年12月滄州市中心醫(yī)院腫瘤外科收治的55例結(jié)直腸癌患者的成對癌及癌旁組織。利用免疫組化方法檢測EZH2及H3K27m3蛋白在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況,比較兩者在癌組織及癌旁組織的表達(dá)水平,并測定二者表達(dá)的相關(guān)性。2.收集55例患者的臨床病理信息,結(jié)合EZH2及H3K27m3在癌組織中的表達(dá)情況分析兩者表達(dá)模式與結(jié)直腸癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系。3.結(jié)合EZH2、H3K27m3在癌組織中的表達(dá)情況及結(jié)直腸癌患者的隨訪結(jié)果,分析兩者與患者總生存率及無病生存期的關(guān)系及對預(yù)后的預(yù)測作用。4.應(yīng)用實(shí)時(shí)定量熒光PCR及Western Blot方法檢測RKO、HCT-116、LoVo及DLD-1四種結(jié)腸癌細(xì)胞系中EZH2的表達(dá)情況,并選擇表達(dá)較高的細(xì)胞系轉(zhuǎn)染siRNA構(gòu)建敲低EZH2表達(dá)的細(xì)胞系,并應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR及Western Blot方法驗(yàn)證敲低效果。5.應(yīng)用對照組細(xì)胞系及敲低EZH2的結(jié)腸癌細(xì)胞系進(jìn)行Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn),探索EZH2對結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲能力的調(diào)控作用。6.所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。免疫組化結(jié)果采用卡方檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)進(jìn)行分析;Kaplan-Meier法用于繪制患者的生存曲線,單因素及多因素生存分析應(yīng)用COX回歸模型進(jìn)行。所有數(shù)據(jù)用mean±SD表示,兩獨(dú)立樣本的比較應(yīng)用成組t檢驗(yàn)來進(jìn)行分析,多組間均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差來進(jìn)行分析,多樣本均數(shù)間多重比較應(yīng)用Tukey檢驗(yàn)。每組實(shí)驗(yàn)至少獨(dú)立重復(fù)3次,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,置信區(qū)間在95%置信水平表示。結(jié)果:1.在本研究中的55例結(jié)直腸癌標(biāo)本中,EZH2的高表達(dá)率為58.2%,H3K27me3的高表達(dá)率為45.5%。配對正常組織中,EZH2的高表達(dá)率僅為14.5%,H3K27me3的高表達(dá)率僅為18.2%。將EZH2和H3K27me3的IRS評分做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),兩者在癌組織與配對正常組織表達(dá)水平有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001)(圖1)。2.EZH2和H3K27me3蛋白的表達(dá)水平呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)(r~2=0.2396,P=0.0001)。3.利用χ~2檢驗(yàn)分析EZH2和H3K27me3與臨床病理特征之間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)EZH2和H3K27me3的高表達(dá)與更多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(EZH2,P=0.008;H3K27me3,P=0.021)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(EZH2,P=0.003;H3K27me3,P=0.002)顯著相關(guān);并且,EZH2的高表達(dá)患者更容易發(fā)生脈管侵犯(P=0.009)。4.單因素預(yù)后分析顯示EZH2和H3K27me3高表達(dá)預(yù)示著更短的OS EZH2:HR 4.56,95%CI 1.31-15.78,P=0.008,H3K27me3:HR 3.86,95%CI1.46-10.19,P=0.003)和DFS(EZH2:3.89,95%CI 1.24-12.17,P=0.019;H3K27me3:2.85,HR 95%CI 1.69-6.98,P=0.011)。5.進(jìn)一步多因素分析發(fā)現(xiàn),經(jīng)過臨床病理因素矯正后,H3K27me3和EZH2并不是OS(EZH2:HR 1.77,95%CI 0.48-6.40,P=0.384;H3K27me3:HR 95%CI 2.04 0.44-9.51,P=0.361)和DFS(EZH2:HR 1.03,95%CI0.34-3.12,P=0.947;H3K27me3:HR 3.19,95%CI 0.79-12.76,P=0.101)的獨(dú)立預(yù)后因素;而TNM臨床分期是唯一的獨(dú)立預(yù)后因子(OS:P=0.024,DFS:P=0.012)。6.qPCR及Western blot法測定RKO、HCT-116、LoVo、DLD-1四種結(jié)腸癌細(xì)胞中EZH2 mRNA及EZH2蛋白相對表達(dá)量,EZH2在RKO及LoVo細(xì)胞中表達(dá)最高,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7.通過轉(zhuǎn)染siRNA成功建立敲低EZH2的RKO及LoVo細(xì)胞模型,qPCR及Western blot法驗(yàn)證敲低效果,EZH2在RKO-si EZH2-1、RKO-siEZH2-2及LoVo-siEZH2-1、LoVo-siEZH2-2細(xì)胞株中相較于在RKO-scramble及LoVo-scramble細(xì)胞株中表達(dá)明顯降低,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。8.應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測體外EZH2下調(diào)后對RKO與LoVo細(xì)胞侵襲能力的影響,結(jié)果顯示,與RKO-scramble及LoVo-scramble細(xì)胞相比,RKO-siEZH2及LoVo-siEZH2的侵襲能力顯著降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示有顯著性差異(P0.001)。結(jié)論:1.EZH2及H3K27me3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)較其配對正常組織中升高,且EZH2及H3K27me3的在癌組織中的表達(dá)成正相關(guān)。2.在結(jié)直腸癌組織中,EZH2及H3K27me3在病理學(xué)分期較晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)較高,EZH2在具有脈管瘤栓患者中表達(dá)也較高。3.EZH2和H3K27me3在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)預(yù)測患者的OS及DFS均較短,有較差預(yù)后,但不是獨(dú)立的預(yù)后預(yù)測因子。4.成功構(gòu)建瞬時(shí)敲低EZH2的RKO-siEZH2及Lo Vo-siEZH2細(xì)胞株,RKO-siEZH2及LoVo-siEZH2細(xì)胞株侵襲能力減弱。
【圖文】：

17圖 1 EZH2 和 H3K27me3 在結(jié)直腸癌組織及配對正常組織中的表達(dá)Fig.1 Expresion of EZH2 and H3K27me3 in colorectal cancer and itpaired mormal tissues. (A, B, E) EZH2 and (C, D, F) H3K27me3 wermainly nuclear positive and were highly expressed in cancer tissues bulow expressed in normal tissues (200×). Expression level between canceand normal tissures was significantly different (P<0.001)

18圖 2 EZH2 和 H3K27me3 表達(dá)水平的相關(guān)性Fig.2 Correlation between expression of EZH2 and H3K27me3. In thesame case, high expresion of (A) EZH2 always accompanied with highexpression of (B) H3K27me3, The lower expresion level of (C) EZH2, thelower (D) H3K27me3（200×）. (E) The expression levels of EZH2 andH3K27me3 showed a significant positive correlation.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.35

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 萬曉龍;趙楠;景鵬瑞;魯曉嵐;董水瀅;史海濤;;miR-125a-3p調(diào)控人結(jié)腸癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2018年07期

2 尹宜海;劉霞;張守成;;華蟾素聯(lián)合三氧化二砷對結(jié)腸癌細(xì)胞的作用[J];江蘇醫(yī)藥;2017年15期

3 王立明,鄭靈,秦榮,張朝軍,馬丹,向佳梅;結(jié)腸癌細(xì)胞中氧自由基含量的臨床測定[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年02期

4 樊代明,張學(xué)庸,陳希陶,胡家露,牟震先,陳寶軍,喬太東,朱明華,楊鴻兵,楊振東;抗結(jié)腸癌細(xì)胞單克隆抗體的制備及相應(yīng)抗原免疫組化鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1988年02期

5 周進(jìn)明;周琪;彭秋平;楊黎;李紅梅;梁后杰;;糖皮質(zhì)激素受體β表達(dá)與結(jié)腸癌細(xì)胞激素敏感相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中華腫瘤防治雜志;2010年05期

6 張朝陽;徐克森;楊廣運(yùn);王金申;高穎;劉炎峰;帥晶;王家勇;李少燕;壽楠海;牛軍;;反義整合素β6基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞作用的研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年37期

7 鄭見寶;祁杰;王訓(xùn)凱;李孝彬;王孝瓏;陳南征;余鈞輝;韓陽;孫學(xué)軍;;下調(diào)尾型同源盒基因-2對結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲及遷移能力的影響及其機(jī)制[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2017年04期

8 蔡文杰;王艷;隨力;王銘潔;;硫化氫促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的生長[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2014年12期

9 田永剛;許軍;劉昶;;人工氣腹對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];腹腔鏡外科雜志;2009年10期

10 林潔;黃瓊;來茂德;;5-氮-2′-脫氧胞苷對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2008年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 許峰;王杉;葉穎江;崔志榮;;腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞在結(jié)腸癌細(xì)胞殺傷中的作用及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

2 王貴玉;王錫山;;激光捕獲微切割技術(shù)分離結(jié)腸癌細(xì)胞用于蛋白組學(xué)研究[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2005年

3 何向鋒;王建紅;譚清和;徐小紅;陸俊國;楊磊;沈茜;徐薇薇;凌國杰;江棋;;肝竇內(nèi)皮細(xì)胞攝取結(jié)腸癌細(xì)胞來源外泌體的熒光示蹤研究[A];第八屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第十三屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

4 郭俊明;賴依峰;肖丙秀;劉瓊;;大豆異黃酮對體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞生長和細(xì)胞周期的影響[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2003年學(xué)術(shù)交流會論文摘要集[C];2003年

5 沈丹;鄧長生;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其激動(dòng)劑對結(jié)腸癌細(xì)胞的生長抑制作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

6 吳寒;王建春;汪玉霞;陳鵬宇;歐陽靜萍;;γδT細(xì)胞對結(jié)腸癌細(xì)胞的作用研究[A];第十四屆全國腫瘤生物治療大會論文集[C];2015年

7 陳旭;林志烽;席文錦;王微;霍毅;楊安鋼;王濤;;MicroRNA-487b調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲、遷移及其機(jī)制研究[A];第十二屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2017年

8 王國強(qiáng);方m錁，

本文編號：2604868