【摘要】：背景:肺癌是世界范圍內(nèi)致死率首位的癌癥,而非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌總數(shù)的80-85%,其有效治療對提升人類健康水平意義重大。傳統(tǒng)的手術(shù)治療和放化療則由于適應(yīng)性、耐藥和毒副作用在治療中捉襟見肘。近年來,基于驅(qū)動基因的靶向治療在NSCLC中大放異彩,然而耐藥和不敏感問題依然存在,因此NSCLC的惡性機(jī)制需要繼續(xù)深入研究。蛋白的乙酰化和去乙�；揎椩谏顒又袕V泛存在且作用關(guān)鍵。NAD依賴的去乙�；赋聊畔⒄{(diào)節(jié)因子3(NAD-dependent deacetylase sirtuin-3,SIRT3)是機(jī)體內(nèi)重要的去乙酰化酶,通過去乙�；饔谜{(diào)控重要蛋白的功能,廣泛調(diào)節(jié)細(xì)胞生命進(jìn)程,影響多種疾病的發(fā)展轉(zhuǎn)歸。由于NSCLC的遺傳異質(zhì)性以及SIRT3底物廣泛性等復(fù)雜影響因素,SIRT3在NSCLC中的作用存在爭議,相應(yīng)的分子機(jī)制有待闡明。因此,探索SIRT3對NSCLC的作用及相應(yīng)分子機(jī)制將對理解NSCLC的惡性進(jìn)展規(guī)律乃至治療提供新的理論依據(jù)。目的:探索SIRT3對NSCLC惡性進(jìn)展的作用以及相應(yīng)分子機(jī)制。方法:(1)收集70對NSCLC腫瘤組織及相應(yīng)正常組織標(biāo)本和臨床信息。采用免疫組化、蛋白印跡及實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)探索SIRT3在NSCLC臨床組織和正常組織中mRNA水平和蛋白表達(dá)水平的差異;(2)采用免疫組化定量統(tǒng)計(jì)方法分析SIRT3和NSCLC臨床病理特征的關(guān)系以及SIRT3和NSCLC增殖指標(biāo)Ki-67表達(dá)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)活化的關(guān)系;(3)采用RNA干涉技術(shù)和質(zhì)粒過表達(dá)技術(shù)建立SIRT3低表達(dá)和過表達(dá)NSCLC細(xì)胞系(H520:SIRT3-;SW900:SIRT3-;H520:SIRT3+),利用蛋白印跡技術(shù)檢測SIRT3含量對Akt磷酸化水平的影響,采用激光共聚焦技術(shù)、蛋白免疫共沉淀技術(shù)探索SIRT3和Akt的相互作用關(guān)系;(4)采用免疫組化技術(shù)探索磷酸酶和張力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、SIRT3、p53在NSCLC組織中的相關(guān)性;采用蛋白印跡技術(shù)探索PTEN和SIRT3在NSCLC細(xì)胞系中蛋白表達(dá)狀況,根據(jù)結(jié)果采用RNA干涉技術(shù)和質(zhì)粒過表達(dá)技術(shù)建立不同PTEN表達(dá)背景下,SIRT3高低表達(dá)的細(xì)胞模型(H520:PTEN-/SIRT3-、PTEN+/SIRT3-;A549:PTEN-/SIRT3+、PTEN+/SIRT3+);(5)在上述細(xì)胞模型中,采用蛋白印跡技術(shù)和蛋白免疫共沉淀技術(shù)探索不同PTEN表達(dá)背景下,SIRT3對p53含量的影響,以及借助泛素蛋白酶體途徑相關(guān)抑制劑探索SIRT3對p53泛素化降解路徑的調(diào)控作用;(6)利用激光共聚焦技術(shù)、蛋白免疫共沉淀技術(shù)探索SIRT3和p53的相互作用關(guān)系,并利用上述細(xì)胞模型,探索PTEN缺失背景下,SIRT3對p53的去乙酰化修飾作用。結(jié)果:(1)SIRT3在NSCLC臨床組織中較正常組織顯著高表達(dá);(2)SIRT3和病人預(yù)后相關(guān),高表達(dá)SIRT3病人生存期較短;SIRT3表達(dá)和NSCLC的病理分型有關(guān),其中鱗癌表達(dá)較高;SIRT3和其余病理特征無明顯關(guān)聯(lián);(3)在NSCLC組織中,SIRT3和惡性增殖指標(biāo)Ki-67、p-Akt(磷酸化活化的Akt)呈現(xiàn)正相關(guān);在NSCLC細(xì)胞系中,SIRT3可以與Akt共定位和共沉淀;在NSCLC細(xì)胞系中SIRT3可以促進(jìn)Akt的磷酸化活化;(4)在NSCLC組織中,PTEN呈現(xiàn)低表達(dá),在此背景下,呈現(xiàn)出SIRT3的高表達(dá)和p53的相應(yīng)低表達(dá)。在PTEN缺失的NSCLC細(xì)胞系中,SIRT3可以促進(jìn)泛素蛋白酶體介導(dǎo)的p53降解,而在PTEN存在的情況下,卻失去這種作用;(5)在PTEN缺失的NSCLC細(xì)胞系中,SIRT3可以去乙�；痯53的賴氨酸320/382位點(diǎn),這種翻譯后修飾可能和p53的穩(wěn)定相關(guān)。結(jié)論:(1)SIRT3在NSCLC組織中高表達(dá),且和惡性增殖指標(biāo)Ki-67正相關(guān),同時(shí)SIRT3的高表達(dá)也預(yù)示著相對較差的預(yù)后,這些線索提示SIRT3可能在NSCLC扮演著癌基因的作用;SIRT3的表達(dá)量與NSCLC的病理分型相關(guān),但是NSCLC分期分化等惡性程度特征沒有明顯關(guān)聯(lián),這可能歸因于腫瘤的異質(zhì)性和個(gè)體遺傳背景的差異性以及SIRT3作用底物的廣泛性。這些均提示SIRT3在NSCLC中的機(jī)制復(fù)雜多樣;(2)p-Akt是促進(jìn)腫瘤惡性進(jìn)展的中心樞紐,Akt的去乙�；梢燥@著影響其磷酸化活化,而SIRT3是細(xì)胞內(nèi)重要的去乙�；�,這些線索提示SIRT3可能通過去乙酰化修飾促進(jìn)Akt的磷酸化活化,進(jìn)而促進(jìn)NSCLC的惡性進(jìn)程。本課題發(fā)現(xiàn)在NSCLC組織中SIRT3和p-Akt正相關(guān),同時(shí)在NSCLC細(xì)胞系中,SIRT3能夠促進(jìn)Akt的磷酸化活化;并且SIRT3可以和Akt發(fā)生共沉淀和共定位,這些結(jié)果部分作證了SIRT3通過調(diào)節(jié)Akt影響NSCLC的科學(xué)假說;(3)p53的去乙�；揎椧种屏似湟职┕δ�,而PTEN的去乙�；揎梽t促進(jìn)其腫瘤抑制功能,這些提示在不同遺傳背景的腫瘤中,去乙�；揎棔l(fā)揮不同的作用。本課題中,在NSCLC組織中,PTEN呈現(xiàn)低表達(dá),而SIRT3高表達(dá),同時(shí)p53低表達(dá),這提示在特定PTEN缺失背景下的NSCLC中,SIRT3可能通過抑制p53含量來發(fā)揮自身的癌基因作用;同時(shí),我們在NSCLC模型中進(jìn)一步揭示了在PTEN缺失的背景下,SIRT3可以促進(jìn)泛素蛋白酶體介導(dǎo)的p53的降解;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),SIRT3可以去乙酰化p53的賴氨酸320/382位點(diǎn),而相應(yīng)位點(diǎn)的去乙�；揎梽t抑制了p53功能。因此這些結(jié)果提示了SIRT3在PTEN缺失背景下,通過對p53的調(diào)節(jié)影響NSCLC的惡性進(jìn)展。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 樓秀余;;白藜蘆醇延長壽命機(jī)制是激活去乙�；竅J];生物技術(shù)世界;2015年12期

2 王光輝;段莉;梁宇杰;費(fèi)志強(qiáng);王大平;;組蛋白去乙�；{(diào)控軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)的機(jī)理研究[J];中國臨床解剖學(xué)雜志;2015年06期

3 黃仕嫻;張秋苑;;去乙�；�6在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2014年09期

4 楊文嘉;王冬來;朱衛(wèi)國;;去乙�；窼IRT1的表達(dá)及活性調(diào)控機(jī)制[J];遺傳;2010年10期

5 陳國珍;田杰;;組蛋白乙酰化酶和去乙�；概c胚胎發(fā)育[J];國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2008年03期

6 ;SIRT6蛋白通過H3K9去乙酰化抑制NF-κB信號活性減緩細(xì)胞衰老[J];科學(xué)通報(bào);2009年06期

7 聶建云;陳文林;黃云超;;組蛋白去乙�；{(diào)控與乳腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J];實(shí)用癌癥雜志;2007年04期

8 李方暉;曹偉;趙軍;劉承宜;郝選明;;去乙酰化酶的功能及其在體育科學(xué)中的應(yīng)用[J];體育學(xué)刊;2011年06期

9 張愛紅;仲伯華;;4-去乙�；L春堿氨基酸衍生物的合成[J];中國新藥雜志;2010年01期

10 秦曉琴;鄧艷春;;抑癌基因的乙�；c去乙�；痆J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2008年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊蕾;吳大瑋;韓進(jìn);劉春紅;徐劍鋒;;藥物干預(yù)對慢性阻塞性肺疾病肺泡巨噬細(xì)胞白細(xì)胞介素8、腫瘤壞死因子α、核因子κB表達(dá)和去乙�；富钚缘挠绊慬A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

2 李莉;田杰;;組蛋白乙�；负腿ヒ阴；冈诩�(xì)胞周期中的調(diào)控作用[A];遺傳學(xué)進(jìn)步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

3 葉欽勇;范飛;;去乙酰化PGC-1α對MPP+誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2014年

4 郎丹瑩;李瑞航;呂庚寅;郭曉光;劉研;魏欣;郭藹光;徐虹;;返白系白化過程中的組蛋白去乙�；痆A];第六屆全國小麥基因組學(xué)及分子育種大會論文集[C];2015年

5 王傳貴;;Sirtuin去乙�；腹δ苎芯窟M(jìn)展報(bào)告[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報(bào)告三[C];2014年

6 郭艷飛;黃勇霖;趙秀娟;蔡祿;;釀酒酵母H4K5去乙酰化對鎳脅迫下MAPK通路的調(diào)控作用[A];中國毒理學(xué)會第九次全國毒理學(xué)大會論文集[C];2019年

7 王曉燕;聶繼盛;牛僑;;苯并(a)芘對神經(jīng)元組蛋白乙�；负腿ヒ阴；富虮磉_(dá)影響[A];全國生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

8 李偉;趙彥艷;;iNOS基因調(diào)控區(qū)-1026C/A多態(tài)的功能研究[A];第八次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議(中華醫(yī)學(xué)會2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會)論文摘要匯編[C];2009年

9 張浪璽;楊光輝;張業(yè);;第三類去乙�；讣易宄蓡TSIRT7的定位研究[A];第七屆全國醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會暨醫(yī)學(xué)生化分會會員代表大會論文集[C];2011年

10 李詠;楊啊晶;張秀敏;李電東;何琪楊;;SIRT1去乙酰化酶抑制劑調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的機(jī)制[A];2007醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 張瑩;去乙�；窼IRT2調(diào)控黏連蛋白SMC1磷酸化抑制結(jié)腸癌增殖的機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

2 李靚;LncRNA HDAC11-AS1調(diào)控Adropin組蛋白去乙�；瘜用}粥樣硬化的影響[D];南華大學(xué);2017年

3 楊洋;去乙�；M蛋白酶1在馬兜鈴酸腎病發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 聶建云;組蛋白去乙酰化調(diào)控對乳腺癌細(xì)胞增殖周期影響的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

5 袁方;MST1促進(jìn)細(xì)胞凋亡機(jī)制方面的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 張武霞;兩性離子化糖胺聚糖的生物活性及其機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

7 傅智軼;微管蛋白翻譯后修飾在DRG軸突生長和馬尾神經(jīng)損傷后修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 熊延路;去乙�；窼IRT3在非小細(xì)胞肺癌惡性進(jìn)展中的作用及其機(jī)制的初步研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

2 蔡美貞;Geminin調(diào)控FoxO3乙酰化修飾的機(jī)理研究[D];廈門大學(xué);2017年

3 蘆雯;釀酒酵母中去乙酰化酶Hda1調(diào)節(jié)亮氨酸代謝機(jī)制的研究[D];上海師范大學(xué);2019年

4 徐瑩;放線菌中氮調(diào)控因子GlnR介導(dǎo)的蛋白質(zhì)去乙�；c壓力響應(yīng)機(jī)制研究[D];華東理工大學(xué);2018年

5 汪慧強(qiáng);人乙�；负腿ヒ阴；秆芯矿w系的建立及對兩個(gè)新乙�；傅目寺�、表達(dá)、純化和功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 丁瑜;去乙�；�3在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

7 呂文蕾;人去乙酰化酶SIRT1的基因克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2014年

8 涂順;基于“Clip-Chip”技術(shù)的全局性蛋白質(zhì)去乙�；傅陌l(fā)現(xiàn)研究[D];上海交通大學(xué);2013年

9 胡偉偉;去乙酰化酶Sirt1對細(xì)胞程序性壞死的調(diào)控機(jī)制[D];華東師范大學(xué);2013年

10 尤海鴻;組蛋白去乙�；种苿═SA）影響體細(xì)胞克隆胚早期發(fā)育過程的初步研究[D];西南大學(xué);2008年

，

本文編號：2604262