【摘要】：目的 通過實驗研究化療藥物吉西他濱(GEM)處理胰腺癌星狀細(xì)胞(CaPSC)后上清液中趨化因子CXCL14的表達(dá)變化情況,以及高表達(dá)CXCL14的CaPSC上清液對胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的影響及其相關(guān)機(jī)制的研究。方法 組織塊提取法從新鮮的胰腺癌組織中提取CaPSC;ELISA法檢測吉西他濱處理后的CaPSC上清液中CXCL14的表達(dá)變化情況;構(gòu)建CXCL14過表達(dá)質(zhì)粒及干擾質(zhì)粒,慢病毒包裝質(zhì)粒后感染CaPSC,構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系CaPSC-CXCL14及CaPSC-shCXCL14;采用CCK-8細(xì)胞增殖實驗、劃痕實驗、Transwell細(xì)胞侵襲實驗分別檢測并分析CaPSC-CXCL14細(xì)胞上清液對胰腺癌細(xì)胞系Panc-1及BXPC-3增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響;通過real-time PCR、Western blot分別檢測高表達(dá)CXCL14的CaPSC細(xì)胞上清液處理Panc-1及BXPC-3后細(xì)胞中β-catenin及EMT相關(guān)m RNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)變化情況。結(jié)果 ELISA結(jié)果顯示GEM處理CaPSC后,細(xì)胞上清中CXCL14的表達(dá)明顯增加;慢病毒包裝質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)成功構(gòu)建CXCL14過表達(dá)細(xì)胞株CaPSC-CXCL14及下調(diào)表達(dá)細(xì)胞株CaPSC-shCXCL14;CCK-8檢測結(jié)果顯示:CaPSC-CXCL14上清液處理Panc-1及BXPC-3細(xì)胞后第1、2、3天細(xì)胞增殖速率與CaPSC上清液處理組比較均無明顯改變(P0.05;P0.05,P0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義;劃痕實驗結(jié)果顯示:劃痕后24h、48h,CaPSC-CXCL14上清液處理胰腺癌細(xì)胞組細(xì)胞相對遷移距離均高于CaPSC上清液處理組,Panc-1(P0.05;P0.01)、BXPC-3(P0.05;P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而且該效應(yīng)被XAV-939顯著抑制;Transwell侵襲實驗結(jié)果表明:細(xì)胞接種24h、48h后,CaPSC-CXCL14上清液處理胰腺癌細(xì)胞組的侵襲細(xì)胞數(shù)量多于DMEM、CaPSC及CaPSC-shCXCL14上清液處理組,Panc-1(P0.01、P0.01、P0.01),BXPC-3(P0.01、P0.05、P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,該效應(yīng)同樣被XAV-939顯著抑制;Western blot、real-time PCR結(jié)果顯示:CaPSC-CXCL14上清液處理胰腺癌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)β-catenin及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)蛋白的表達(dá)顯著高于CaPSC及CaPSC-shCXCL14組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,以上效應(yīng)可以被XAV-939顯著抑制。結(jié)論 化療藥物吉西他濱可以誘導(dǎo)胰腺癌星狀細(xì)胞高分泌CXCL14進(jìn)而以旁分泌的方式通過β-catenin-EMT信號通路促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,但對胰腺癌細(xì)胞的增殖影響不明顯。提示吉西他濱聯(lián)合CXCL14或β-catenin-EMT通路抑制劑有望成為胰腺癌治療的新思路。
【圖文】：

吉西他濱誘導(dǎo)胰腺癌星狀細(xì)胞高分泌 CXCL14 進(jìn)而促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究 結(jié) 果結(jié) 果1.組織塊提取法從新鮮的胰腺癌組織中提取胰腺星狀細(xì)胞我們通過組織塊提取法，將胰腺癌組織剪碎后放置 6 孔板板底，，加入相應(yīng)培養(yǎng)基后在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，一周左右可見大量成纖維樣的胰腺星狀細(xì)胞從胰腺癌組織塊周圍爬出（圖 1）。

結(jié) 果 吉西他濱誘導(dǎo)胰腺癌星狀細(xì)胞高分泌 CXCL14 進(jìn)而促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究測分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱處理過后的胰腺癌星狀細(xì)胞 CXCL14 的分泌量較其他因子顯著增強(qiáng)；進(jìn)一步通過 Western Blot 檢測發(fā)現(xiàn) CXCL14 在吉西他濱處理過后的胰腺癌星狀細(xì)胞中表達(dá)亦明顯增高（圖 2）。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Quan-Jun Lin;Feng Yang;Chen Jin;De-Liang Fu;;Current status and progress of pancreatic cancer in China[J];World Journal of Gastroenterology;2015年26期

2 ;Interleukin-8, a promising predictor for prognosis of pancreatic cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2012年10期

本文編號：2602681