【摘要】：本文共分為三個部分,第一部分為,HER2在胃癌輔助放療中的作用研究,第二部分為吡咯替尼對HER2陽性胃癌細(xì)胞放療敏感性的影響及其機制研究,第三部分為吡咯替尼與化療藥物聯(lián)合使用的效應(yīng)研究。第一部分:HER2在胃癌輔助放療中的作用研究【目的】探索HER2在胃癌放療中的作用�！痉椒ā恳罁�(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)納入2013年1月至2015年6月止,于我院胃腸外科行根治性胃癌手術(shù)的患者,回顧性分析本單位胃腺癌HER2陽性率,并分析HER2與患者臨床病理特征之間的關(guān)系;納入2013年1月至2017年12月止,于我院胃腸外科行根治性胃癌手術(shù)并于我院腫瘤科行標(biāo)準(zhǔn)輔助放療的患者,定期隨訪,前瞻性地研究HER2對接受輔助放療患者預(yù)后的影響。【結(jié)果】本單位HER2檢測率為99.9%,HER2陽性率為8.313%;HER2表達與胃癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P=0.042),與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度及臨床分期無顯著相關(guān)性。在接受輔助放療的胃癌患者中,HER2陽性患者中位OS為42.83個月(95%CI 0.2123-3.615),HER2陰性患者中位OS為37.53個月(95%CI 0.2767-4.708),兩組之間沒有顯著差異性(P=0.7029)�！窘Y(jié)論】術(shù)后接受輔助放療的胃癌患者的OS與HER2狀態(tài)無顯著相關(guān)性。第二部分:吡咯替尼對HER2陽性胃癌細(xì)胞放療敏感性的影響及其機制研究【目的】探究吡咯替尼對HER2陽性胃癌細(xì)胞放療敏感性的影響�！痉椒ā勘狙芯渴褂昧藘芍旮弑磉_HER2的細(xì)胞株NCI-N87和SKBR3,兩株低表達HER2的細(xì)胞株MKN28和MCF7。用western blot和免疫熒光法檢測各個細(xì)胞株的HER2表達情況,CCK-8法檢測吡咯替尼對各個細(xì)胞株增殖能力的影響。NCI-N87和SKBR3細(xì)胞分別接受單純射線處理和吡咯替尼聯(lián)合射線處理后,CCK8法檢測細(xì)胞增殖能力的變化,克隆形成實驗檢測細(xì)胞放療敏感性的變化,western blot檢測PI3K/Akt和MEK/MAPK通路的活化情況及HER2入核情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布情況,western blot和免疫熒光法檢測細(xì)胞DNA損傷的標(biāo)志物ΓH2AX表達情況。體內(nèi)實驗通過裸鼠移植瘤模型驗證吡咯替尼的放療增敏效應(yīng)�！窘Y(jié)果】吡咯替尼對HER2高表達的細(xì)胞增殖抑制作用更明顯。放療聯(lián)合吡咯替尼處理組的細(xì)胞增殖能力抑制率明顯大于單純放療組(P0.01)�？寺⌒纬蓪嶒炞C實,吡咯替尼能明顯增加NCI-N87及SKBR3的放療敏感性,SER值分別為1.375和1.326。吡咯替尼聯(lián)合放療對裸鼠移植瘤的生長抑制作用較單純放療組更為顯著。吡咯替尼能有效抑制放療引起的HER2入核和DNA損傷修復(fù),增加放療引起的細(xì)胞凋亡和G2/M期阻滯�！窘Y(jié)論】吡咯替尼能有效提高HER2高表達胃癌細(xì)胞的放療敏感性,其機制可能是抑制放療引起的HER2入核和DNA損傷的修復(fù),增加放療引起的細(xì)胞凋亡和G2/M期阻滯。本研究為HER2陽性胃癌患者的治療提供了新的思路。第三部分:吡咯替尼與化療藥物聯(lián)合使用的效應(yīng)研究�！灸康摹垦芯窟量┨婺崤c化療藥物聯(lián)合使用的抗腫瘤效應(yīng)�！痉椒ā勘狙芯渴褂昧藘芍旮弑磉_HER2的細(xì)胞株NCI-N87和SKBR3,使用的化療藥物為5-氟尿嘧啶、順鉑、多西他賽和表柔比星。兩株細(xì)胞均接受一定濃度梯度的單藥化療藥物處理和化療藥物聯(lián)合吡咯替尼處理。48h后,CCK8法檢測細(xì)胞增殖能力的變化,比較兩組間的差異。NCI-N87和SKBR3細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型建立后,分為處理組、單藥化療藥物處理組、化療藥物聯(lián)合吡咯替尼處理組和化療藥物聯(lián)合吡咯替尼和放療處理組,觀察并記錄各組腫瘤生長變化。【結(jié)果】在NCI-N87細(xì)胞中,吡咯替尼聯(lián)合多西他賽或順鉑對細(xì)胞增殖抑制作用顯著強于單藥多西他賽或單藥順鉑(P0.01);在SKBR3細(xì)胞中,吡咯替尼聯(lián)合多西他賽或5-氟尿嘧啶對細(xì)胞增殖抑制作用顯著強于單藥多西他賽或5-氟尿嘧啶(P0.01);而吡咯替尼聯(lián)合多柔比星對兩株細(xì)胞增殖的抑制作用與單藥多柔比星相比無明顯差異。動物實驗進一步證實,吡咯替尼聯(lián)合多西他賽的抗腫瘤效應(yīng)明顯強于單藥多西他賽(P0.05);且在胃癌模型中,兩藥聯(lián)合放療對腫瘤的抑制作用更強于兩藥聯(lián)合(P0.05),但在乳腺癌模型中,兩藥聯(lián)合放療與單純兩藥聯(lián)合相比,抗腫瘤作用無明顯差異�！窘Y(jié)論】吡咯替尼能有效提高多西他賽的抗腫瘤效應(yīng),為HER2陽性胃癌患者提供了新的治療策略。
【圖文】：

中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論了輔助放療的胃癌患者的預(yù)后的影響，用 K-M 法分析 HER2 陰性和陽性患者的生存情況中位 OS 為 42.83 個月（95%CI 0.2123-3.615），HE（95%CI 0.2767-4.708），兩組之間沒有顯著差異性R2 對接受輔助放療的胃癌患者的生存沒有顯著影響性胃癌患者在接受輔助放療的同時聯(lián)合使用 HER2 靶此在后一部分實驗中探索了 HER2 靶向藥物吡咯的放療敏感性。

分析實驗至少重復(fù) 3 次，數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，兩組數(shù)據(jù)之驗來分析，當(dāng) P 值小于 0.05 時認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。果達狀態(tài)不同的胃癌細(xì)胞對吡咯替尼的敏感性不同。tern blot 檢測胃癌細(xì)胞 NCI-N87、MKN28 的 HER2 表達情況，證實胞高表達 HER2，而 MKN28 細(xì)胞 HER2 表達極低；由于胃癌 HER2 高極為有限，購買困難，因此我們選用了兩株 HER2 表達狀態(tài)不同的乳腺照，其中 SKBR3 為 HER2 高表達的乳腺癌細(xì)胞株，，MCF7 為 HER2 低細(xì)胞株。免疫熒光結(jié)果進一步證實了 NCI-N87 與 SKBR3 為 HER2 高表且 HER2 主要位于細(xì)胞膜。結(jié)果如圖 1a、1b 所示。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

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本文編號：2596116