發(fā)布時(shí)間：2020-03-23 03:37

【摘要】：本文共分為三個(gè)部分,第一部分為,HER2在胃癌輔助放療中的作用研究,第二部分為吡咯替尼對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞放療敏感性的影響及其機(jī)制研究,第三部分為吡咯替尼與化療藥物聯(lián)合使用的效應(yīng)研究。第一部分:HER2在胃癌輔助放療中的作用研究【目的】探索HER2在胃癌放療中的作用�！痉椒ā恳罁�(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)納入2013年1月至2015年6月止,于我院胃腸外科行根治性胃癌手術(shù)的患者,回顧性分析本單位胃腺癌HER2陽(yáng)性率,并分析HER2與患者臨床病理特征之間的關(guān)系;納入2013年1月至2017年12月止,于我院胃腸外科行根治性胃癌手術(shù)并于我院腫瘤科行標(biāo)準(zhǔn)輔助放療的患者,定期隨訪,前瞻性地研究HER2對(duì)接受輔助放療患者預(yù)后的影響。【結(jié)果】本單位HER2檢測(cè)率為99.9%,HER2陽(yáng)性率為8.313%;HER2表達(dá)與胃癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P=0.042),與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、浸潤(rùn)深度及臨床分期無(wú)顯著相關(guān)性。在接受輔助放療的胃癌患者中,HER2陽(yáng)性患者中位OS為42.83個(gè)月(95%CI 0.2123-3.615),HER2陰性患者中位OS為37.53個(gè)月(95%CI 0.2767-4.708),兩組之間沒(méi)有顯著差異性(P=0.7029)�！窘Y(jié)論】術(shù)后接受輔助放療的胃癌患者的OS與HER2狀態(tài)無(wú)顯著相關(guān)性。第二部分:吡咯替尼對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞放療敏感性的影響及其機(jī)制研究【目的】探究吡咯替尼對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞放療敏感性的影響。【方法】本研究使用了兩株高表達(dá)HER2的細(xì)胞株NCI-N87和SKBR3,兩株低表達(dá)HER2的細(xì)胞株MKN28和MCF7。用western blot和免疫熒光法檢測(cè)各個(gè)細(xì)胞株的HER2表達(dá)情況,CCK-8法檢測(cè)吡咯替尼對(duì)各個(gè)細(xì)胞株增殖能力的影響。NCI-N87和SKBR3細(xì)胞分別接受單純射線處理和吡咯替尼聯(lián)合射線處理后,CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞放療敏感性的變化,western blot檢測(cè)PI3K/Akt和MEK/MAPK通路的活化情況及HER2入核情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布情況,western blot和免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷的標(biāo)志物ΓH2AX表達(dá)情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過(guò)裸鼠移植瘤模型驗(yàn)證吡咯替尼的放療增敏效應(yīng)�！窘Y(jié)果】吡咯替尼對(duì)HER2高表達(dá)的細(xì)胞增殖抑制作用更明顯。放療聯(lián)合吡咯替尼處理組的細(xì)胞增殖能力抑制率明顯大于單純放療組(P0.01)。克隆形成實(shí)驗(yàn)證實(shí),吡咯替尼能明顯增加NCI-N87及SKBR3的放療敏感性,SER值分別為1.375和1.326。吡咯替尼聯(lián)合放療對(duì)裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用較單純放療組更為顯著。吡咯替尼能有效抑制放療引起的HER2入核和DNA損傷修復(fù),增加放療引起的細(xì)胞凋亡和G2/M期阻滯。【結(jié)論】吡咯替尼能有效提高HER2高表達(dá)胃癌細(xì)胞的放療敏感性,其機(jī)制可能是抑制放療引起的HER2入核和DNA損傷的修復(fù),增加放療引起的細(xì)胞凋亡和G2/M期阻滯。本研究為HER2陽(yáng)性胃癌患者的治療提供了新的思路。第三部分:吡咯替尼與化療藥物聯(lián)合使用的效應(yīng)研究。【目的】研究吡咯替尼與化療藥物聯(lián)合使用的抗腫瘤效應(yīng)。【方法】本研究使用了兩株高表達(dá)HER2的細(xì)胞株NCI-N87和SKBR3,使用的化療藥物為5-氟尿嘧啶、順鉑、多西他賽和表柔比星。兩株細(xì)胞均接受一定濃度梯度的單藥化療藥物處理和化療藥物聯(lián)合吡咯替尼處理。48h后,CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化,比較兩組間的差異。NCI-N87和SKBR3細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型建立后,分為處理組、單藥化療藥物處理組、化療藥物聯(lián)合吡咯替尼處理組和化療藥物聯(lián)合吡咯替尼和放療處理組,觀察并記錄各組腫瘤生長(zhǎng)變化�！窘Y(jié)果】在NCI-N87細(xì)胞中,吡咯替尼聯(lián)合多西他賽或順鉑對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用顯著強(qiáng)于單藥多西他賽或單藥順鉑(P0.01);在SKBR3細(xì)胞中,吡咯替尼聯(lián)合多西他賽或5-氟尿嘧啶對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用顯著強(qiáng)于單藥多西他賽或5-氟尿嘧啶(P0.01);而吡咯替尼聯(lián)合多柔比星對(duì)兩株細(xì)胞增殖的抑制作用與單藥多柔比星相比無(wú)明顯差異。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí),吡咯替尼聯(lián)合多西他賽的抗腫瘤效應(yīng)明顯強(qiáng)于單藥多西他賽(P0.05);且在胃癌模型中,兩藥聯(lián)合放療對(duì)腫瘤的抑制作用更強(qiáng)于兩藥聯(lián)合(P0.05),但在乳腺癌模型中,兩藥聯(lián)合放療與單純兩藥聯(lián)合相比,抗腫瘤作用無(wú)明顯差異。【結(jié)論】吡咯替尼能有效提高多西他賽的抗腫瘤效應(yīng),為HER2陽(yáng)性胃癌患者提供了新的治療策略。
【圖文】：

中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論了輔助放療的胃癌患者的預(yù)后的影響，用 K-M 法分析 HER2 陰性和陽(yáng)性患者的生存情況中位 OS 為 42.83 個(gè)月（95%CI 0.2123-3.615），HE（95%CI 0.2767-4.708），兩組之間沒(méi)有顯著差異性R2 對(duì)接受輔助放療的胃癌患者的生存沒(méi)有顯著影響性胃癌患者在接受輔助放療的同時(shí)聯(lián)合使用 HER2 靶此在后一部分實(shí)驗(yàn)中探索了 HER2 靶向藥物吡咯的放療敏感性。

分析實(shí)驗(yàn)至少重復(fù) 3 次，數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，兩組數(shù)據(jù)之驗(yàn)來(lái)分析，當(dāng) P 值小于 0.05 時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。果達(dá)狀態(tài)不同的胃癌細(xì)胞對(duì)吡咯替尼的敏感性不同。tern blot 檢測(cè)胃癌細(xì)胞 NCI-N87、MKN28 的 HER2 表達(dá)情況，證實(shí)胞高表達(dá) HER2，而 MKN28 細(xì)胞 HER2 表達(dá)極低；由于胃癌 HER2 高極為有限，購(gòu)買困難，因此我們選用了兩株 HER2 表達(dá)狀態(tài)不同的乳腺照，其中 SKBR3 為 HER2 高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株，，MCF7 為 HER2 低細(xì)胞株。免疫熒光結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了 NCI-N87 與 SKBR3 為 HER2 高表且 HER2 主要位于細(xì)胞膜。結(jié)果如圖 1a、1b 所示。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2596116