【摘要】：目的:臨床研究目的:研究益氣除痰方(YQCTF)對III期肺鱗癌同期放化療患者的客觀有效率及無進展生存期的影響,以及治療相關(guān)毒副反應(yīng),分析YQCTF對不同證型患者療效及生存質(zhì)量的影響,探討YQCTF治療III期肺鱗癌的優(yōu)勢人群。實驗研究目的:通過實驗,觀察YQCTF對人肺鱗癌SK-MES-1細胞增殖、凋亡、周期以及對JNK、p-JNK基因的影響,探討YQCTF抑制人肺鱗癌SK-MES-1細胞可能的分子機制。方法:臨床研究方法1臨床研究方法:用前瞻隨機的方法將四個中心120例符合要求的患者隨機為治療組、對照組各60例,治療組采用同期放化療+YQCTF治療(在益氣除痰方基礎(chǔ)上按照肺熱痰瘀、脾虛痰濕、陰虛痰熱、氣陰兩虛四種證型辨證用藥),對照組采用同期放化療,收集治療前后患者相關(guān)資料,包括腫瘤大小、血常規(guī)、肝腎功能、中醫(yī)證型、ECOG PS評分、基因(部分患者)、FACT-L4.0量表評分等,同期放化療結(jié)束后復(fù)查相關(guān)資料評估療效、毒副反應(yīng)及生存質(zhì)量量表評分,化療結(jié)束后每2個月行CT檢查評估腫瘤變化,直至腫瘤進展,記錄首次化療開始至腫瘤進展的時間,定義為PFS。選擇可能影響PFS的因素納入Cox比例風險模型,篩選出對PFS有影響的因素。2統(tǒng)計學方法:計量資料采用均值±標準差表示(x±S),符合正態(tài)分布且方差齊性者,采用t檢驗,對于不符合正態(tài)分布者改用秩和檢驗;所有計數(shù)資料用頻數(shù)(f)和百分率或構(gòu)成比(p)表示;兩組等級資料采用獨立樣本秩和Mann-Whitney U檢驗;無序分類資料采用Pearson卡方檢驗(x2),四格表資料中出現(xiàn)n≥40但有1≤T5時,用校正的卡方檢驗;當n40或有T1時,改用用Fisher確切概率法;組間無進展生存時間(PFS)差異比較采用Log-rank檢驗;Cox回歸分析,運用Backward wald回歸分析法進行多因素分析;所有數(shù)據(jù)均由SPSS 20.0進行統(tǒng)計。a值取0.05。實驗研究方法1細胞實驗制備益氣除痰湯,經(jīng)過人肺鱗癌SK-MES-1細胞復(fù)蘇及傳代,在倒置顯微鏡下觀察細胞計數(shù),利用公式計算細胞密度,用CCK8法檢測細胞活力,倒置顯微鏡觀察YQCTF對細胞狀態(tài)的影響,Annexin V-PI雙染法檢測肺癌細胞凋亡率,流式細胞術(shù)細胞DNA含量測定檢測細胞周期,qRT-PCR法檢測JNK、p-JNK基因的表達。2動物實驗構(gòu)建人肺鱗癌SK-MES-1細胞裸鼠移植瘤模型,造模成功后,隨機分為四組:模型組、中藥組、化療組、聯(lián)合組,分別予以給藥14天后,期間第1天、第5天、第9天、第14天觀察體重及瘤徑,處死處理后后計算瘤重,臟器組織的病理學觀察,將腫瘤組織中JNK、p-JNK蛋白行Western Blot檢測。結(jié)果:臨床研究1臨床療效:治療組(中藥聯(lián)合 CCRT 治療)ORR 率 81.4%,DCR 率 93.1%,PFS12.5±0.85月,對照組(CCRT)ORR 率 74.1%,DCR 率 93.1%,PFS9.2±0.82 月(見表 3、表4)。兩組患者治療后的瘤體客觀反應(yīng)率進行秩和檢驗,結(jié)果無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。兩組患者PFS進行Log-rank檢驗,結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。2相關(guān)預(yù)后因素對PFS的影響:2.1中醫(yī)證型對PFS的影響:治療組肺熱痰瘀、脾虛痰濕、陰虛痰熱、氣陰兩虛四種證型PFS分別為 12.3±1.25月、14.6±0.16月、8.6±1.32月、4.2±1.45月,對照組四種證型中位PFS分別為10.1±0.94月、12.4±0.70月、7.9±0.50月、5.8±1.20月,兩組不同證型患者間PFS差異采用Log-rank檢驗,P值均小于0.01;2.2腫瘤分期對PFS的影響:治療組Ⅲa、Ⅲb期患者的中位PFS分別為13.7±0.62月、8.7±1.94月,對照組Ⅲa、Ⅲb期中位PFS分別為 10.6±0.57月、6.9±0.80月,兩組不同分期患者間PFS差異比較經(jīng)Log-rank檢驗,P值均小于0.001;2.3治療前PS評分對PFS的影響:全部患者治療前按PS評分0、1、2分分3組,中位 PFS 分別為 14.60 士 1.90、11.20±0.80、8.50±0.59 月,不同組間患者 PFS差異比較經(jīng)Log-rank檢驗,P0.005;2.4放療不同劑量組患者PFS的差異:所有患者按實際接受放療劑量分為標準劑量組(≥60Gy)85例、低劑量組(60Gy)31例,結(jié)果標準劑量組及低劑量組的中位PFS分別為12.40±0.56、7.60士0.56月,不同劑量組患者間PFS差異比較經(jīng)Log-rank檢驗,P值均小于0.01;3 PFS相關(guān)關(guān)因素Cox回歸分析非基因因素:性別、T及N分期、腫瘤的客觀反應(yīng)、中醫(yī)證型、KPS評分、骨髓抑制、消化道不良反應(yīng)均為PFS不利因素,分期為PFS有利因素�；蛞蛩�:PTEN為PFS保護性因素外,HER2、PI3K、AKT、mTOR、FGFR、VEGF均為PFS不利因素。4兩組患者放化療不良反應(yīng)差異對兩組患者發(fā)生骨髓抑制及消化道不良反應(yīng)分級分別進行獨立樣本秩和檢驗(Mann-Whitney U檢驗),結(jié)果發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計結(jié)果分別為P=0.090、P=0.437,均為P＞O.05。對兩組患者發(fā)生放射性肺炎的率進行pearson卡方檢驗,P=0.0490.05。5兩組患者治療前后肺癌患者生存質(zhì)量測定量表(FACT-L4.0)生理狀況、社會/家庭狀況、情感狀況、功能狀況及附加模塊積分比較差異治療組患者治療后FACT-L4.0量表各模塊積分均較治療前改善(P0.01);按中醫(yī)證型分類分組統(tǒng)計,除氣陰兩虛型患者外,其他證型患者治療后FACT-L4.0量表各模塊積分均較治療前改善(P＜0.05)。對照組患者治療后FACT-L4.0量表各模塊積分均較治療前改善(P＜0.01);按患者中醫(yī)證型分類分組統(tǒng)計,除脾虛痰濕型患者在5個模塊積分治療后均較治療前有改善外(P＜0.05),其他中醫(yī)證型患者治療后FACT-L4.0量表積分均有模塊積分較治療前沒有明顯改善(P＞0.05)。實驗研究1細胞實驗CCK8法檢測不同干預(yù)濃度的YQCTF作用于SK-MES-1細胞48小時后增值情況,經(jīng)Oneway-ANOVA單因素分析,提示YQCTF能抑制SK-MES-1細胞增,且成濃度依賴性;流式細胞結(jié)果顯示經(jīng)不同濃度YQCTF干預(yù)48h后,經(jīng)Oneway-ANOVA單因素方差分析,不同濃度YQCTF均能誘導(dǎo)缺氧SK-MES-1細胞調(diào)亡,呈藥物濃度依賴效應(yīng);Oneway-ANOVA單因素方差分析提示不同濃度的YQCTF均能影響細胞周期,可明顯X椉覩O/G1期細胞的比例,降低S期細胞和G2/M期細胞比例,在YQCTF低濃度的條件下就可使細胞周期阻滯于GO/G1期,隨著YQCTF濃度的升高,阻滯于GO/G1期的細胞增多;q-PCR擴增技術(shù)顯示經(jīng)過不同濃度的YQCTF作用后,YQCTF組JNK無明顯變化,p-JNK表達水平顯著下降,且具有一定的劑量依賴效應(yīng)。2動物實驗(1)聯(lián)合組小鼠的體重在給藥前期下降,給藥中后期緩慢上升;中藥組小鼠的體重在給藥前期、中期逐漸增加,后期出現(xiàn)下降;化療組小鼠體重在前期下降,中期、后期逐漸增加;模型組小鼠的體重是在前期、中期、后期持續(xù)增加,給藥過程中小鼠體重由重到輕分別為:模型組、中藥組、化療組、聯(lián)合組。(2)腫瘤生長抑制率的影響:中藥組、化療組和聯(lián)合組小鼠的瘤重均較模型組小鼠的瘤重小,各組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。聯(lián)合組的瘤重比中藥組小,與中藥組及化療組比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)抑瘤率方面:中藥組高于模型組,但聯(lián)合組又高于中藥組、化療組。(4)腫瘤病理學影響:模型組腫瘤組織內(nèi)血管豐富,細胞增殖抗原豐富,其它三組新生血管明顯減少,腫瘤細胞凋亡明顯增多,腫瘤細胞增殖受到顯著抑制。(5)移植瘤中JNK及p-JNK表達水平:Western blotting結(jié)果顯示與模型組相比,YQCTF組JNK無明顯變化、p-JNK表達水平顯著下降,且具有一定的劑量依賴效應(yīng),差異具有顯著性意義(P＜0.05)。結(jié)論:臨床研究結(jié)論:YQCTF聯(lián)合同期放化療治療III期肺鱗癌,能延長患者PFS,降低放射性肺炎發(fā)生率,改善患者生存質(zhì)量,不同中醫(yī)證型患者間的療效及生存質(zhì)量改善有差異。實驗研究結(jié)論:YQCTF能抑制人肺鱗癌SK-MES-1細胞增殖,阻滯細胞周期,誘導(dǎo)SK-MES-1細胞調(diào)亡,對SK-MES-1細胞的生長抑制作用可能與抑制JNK/SAPK的激活有關(guān)。
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2593139