發(fā)布時間：2020-02-25 23:41

【摘要】：目的：本研究希望通過對CD97和CathepsinZ (CTSZ)對胃癌細胞株生物學特性的影響及分子機制研究,探索CD97和CTSZ在胃癌細胞侵襲力改變中的作用及作用機制。同時通過研究胃癌患者胃癌組織中CTSZ的表達及臨床意義,探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用,并進一步了解其在臨床方面的價值,為胃癌的早期診斷和免疫治療提供理論基礎。方法：本實驗首先通過PCR及western blot對不同胃癌細胞株的CTSZ基因水平及總蛋白進行檢測,隨后分別以pcDNA3.1及pGCsilencer質粒作為載體,重組構建CTSZ過表達質粒及siRNA CTSZ干擾質粒。通過轉染胃癌細胞得到CTSZ過表達克隆和CTSZ RNAi克隆,并通過共聚焦顯微鏡、流式細胞術、invasion assay、刮痕試驗等觀察其對胃癌細胞生物學行為造成的影響。此外,進一步研究可能的細胞骨架信號通路,探討CTSZ和CD97影響胃癌細胞侵襲性的作用機制。應用免疫組化對胃癌患者的正常組織、癌旁組織、癌組織進行染色,檢測CTSZ表達水平。同時觀察胃癌組織CTSZ表達水平在胃癌TNM不同分期時的差異。結果：①不同胃癌細胞株的CTSZ基因與總蛋白表達水平不同；②CTSZ與胃癌細胞中溶酶體的分布區(qū)域相同；③與未轉染組相比,過表達質粒pcDNA3.1-CTSZ轉染胃癌細胞后,細胞骨架呈現(xiàn)向四周發(fā)散狀改變,細胞周期縮短,侵襲性和遷徙能力上升。干擾克隆pGCsilencer-CTSZ轉染胃癌細胞后,遷徒相關蛋白及周期相關蛋白表達水平下降,侵襲性和遷徙能力下降；④轉錄因子篩查中發(fā)現(xiàn)與未轉染組相比,轉錄因子SP1在pcDNA3.1-CD97過表達組增高,在pcDNA3.1-CD97+JNK信號通路抑制劑SP600125組表達下降；⑤免疫共沉淀(chips)檢測發(fā)現(xiàn)SP1轉錄因子作用于CTSZ轉錄起始點上游1000bp,和雙熒光素酶報告基因檢測到的CD97同樣作用于CTSZ轉錄起始點上游1000bp的結果一致;，

本文編號：2582858