【摘要】：目的：本研究希望通過對(duì)CD97和CathepsinZ (CTSZ)對(duì)胃癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響及分子機(jī)制研究,探索CD97和CTSZ在胃癌細(xì)胞侵襲力改變中的作用及作用機(jī)制。同時(shí)通過研究胃癌患者胃癌組織中CTSZ的表達(dá)及臨床意義,探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用,并進(jìn)一步了解其在臨床方面的價(jià)值,為胃癌的早期診斷和免疫治療提供理論基礎(chǔ)。方法：本實(shí)驗(yàn)首先通過PCR及western blot對(duì)不同胃癌細(xì)胞株的CTSZ基因水平及總蛋白進(jìn)行檢測(cè),隨后分別以pcDNA3.1及pGCsilencer質(zhì)粒作為載體,重組構(gòu)建CTSZ過表達(dá)質(zhì)粒及siRNA CTSZ干擾質(zhì)粒。通過轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞得到CTSZ過表達(dá)克隆和CTSZ RNAi克隆,并通過共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、invasion assay、刮痕試驗(yàn)等觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為造成的影響。此外,進(jìn)一步研究可能的細(xì)胞骨架信號(hào)通路,探討CTSZ和CD97影響胃癌細(xì)胞侵襲性的作用機(jī)制。應(yīng)用免疫組化對(duì)胃癌患者的正常組織、癌旁組織、癌組織進(jìn)行染色,檢測(cè)CTSZ表達(dá)水平。同時(shí)觀察胃癌組織CTSZ表達(dá)水平在胃癌TNM不同分期時(shí)的差異。結(jié)果：①不同胃癌細(xì)胞株的CTSZ基因與總蛋白表達(dá)水平不同；②CTSZ與胃癌細(xì)胞中溶酶體的分布區(qū)域相同；③與未轉(zhuǎn)染組相比,過表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-CTSZ轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后,細(xì)胞骨架呈現(xiàn)向四周發(fā)散狀改變,細(xì)胞周期縮短,侵襲性和遷徙能力上升。干擾克隆pGCsilencer-CTSZ轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后,遷徒相關(guān)蛋白及周期相關(guān)蛋白表達(dá)水平下降,侵襲性和遷徙能力下降；④轉(zhuǎn)錄因子篩查中發(fā)現(xiàn)與未轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)錄因子SP1在pcDNA3.1-CD97過表達(dá)組增高,在pcDNA3.1-CD97+JNK信號(hào)通路抑制劑SP600125組表達(dá)下降；⑤免疫共沉淀(chips)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SP1轉(zhuǎn)錄因子作用于CTSZ轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游1000bp,和雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)到的CD97同樣作用于CTSZ轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游1000bp的結(jié)果一致;，

本文編號(hào)：2582858