【摘要】：背景族腺癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,難以早期診斷,臨床上確診膜腺癌患者的手術(shù)可切除率低,術(shù)后生存期相對(duì)其他腫瘤較短。然而,關(guān)于膜腺癌發(fā)病機(jī)制的研巧表明,膜腺癌的發(fā)生經(jīng)歷了相當(dāng)長的過程,從獲得關(guān)鍵的致病基因突變、逐漸發(fā)展為膜腺癌前病變、最終發(fā)展為膜腺癌,需要經(jīng)歷大約十年的時(shí)間。膜腺癌前病變?nèi)缒茉缙谠\斷、及時(shí)治療,可提高該疾病的治療效果;然而,略床上缺乏早期篩查膜腺癌前病變的標(biāo)志物。MicroRNA是一種22個(gè)堿基長度的核糖核酸,能在血清中穩(wěn)定存在,是一種潛在的血清診斷標(biāo)志物。Kras~(G12D)突變轉(zhuǎn)基因小鼠通過膚腺細(xì)胞特異性啟動(dòng)子,僅在膜腺細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生具有致癌活性的Kras6i2D突變蛋白;該小鼠可自發(fā)經(jīng)妨巧常膜腺-膜腺癌前病變-膜腺癌"過程。通過構(gòu)建繁殖Kras~(G12D)突變小鼠,并在膜腺癌前病變階段留取小鼠外周血清,通過microRNA芯片和實(shí)時(shí)定量PCR的方法,定量測(cè)定Kras~(G12D)小鼠外周血清中特異性高表達(dá)的microRNA,為臨床篩選族腺癌前病變的候選分子。目的1.飼養(yǎng)KraseisD轉(zhuǎn)基因小鼠,無藥物干預(yù),培養(yǎng)族腺癌前病變自然病程組小鼠;2.通過雨蛙化,誘導(dǎo)Kras~(G12D);突變轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生族腺炎,培養(yǎng)膜腺炎-族腺癌前病變組小鼠;3.通過microRNA忍片,篩選出膜腺炎-膜腺癌前病變中血清離表達(dá)microRNA;4.通過生物信息方法,篩選出microRNA分子作為驗(yàn)證對(duì)象;5.通過實(shí)時(shí)定量PCR,檢測(cè)候選的microRNA在膜腺癌前病變血清的表達(dá)來量。方法1.通過剪取小鼠鼠患消化提取DNA;再通過特異性引物,擴(kuò)增Kras~(G12D)突變基因和Cre重沮酶基因;進(jìn)而確定小鼠基因型;2.通過腹腔注射雨蛙r，

本文編號(hào)：2582551