【摘要】：研究目的:近年來隨著基因測序技術(shù)的更迭,越來越多的物種基因組被報道,腫瘤基因組測序也將成為一種腫瘤精準治療的治療策略。普遍認為腫瘤的發(fā)生發(fā)展是基因突變造成的,或突變后引發(fā)致癌基因的激活,或突變后的基因自身轉(zhuǎn)變?yōu)橹掳┗�。Rheb蛋白是Ras家族的一種GTP酶,在GTP存在的情況下結(jié)合并激活哺乳動物雷帕霉素靶復(fù)合體1(mTORC1)來調(diào)控細胞的生長和增殖。最近有報道稱,經(jīng)過基因測序在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了30多種Rheb的基因突變。在這些突變中RhebTyr35Asn突變是一個突變熱點。另一篇文章也報道了在293T細胞中瞬時高表達RhebY35N能激活mTORC1。而此突變的其他功能有待研究。因此,本論文將以RhebY35N突變基因為切入點探索其在細胞增殖和信號通路中的潛在功能,并尋找一種對此突變型腫瘤更有效的治療策略。研究方法:通過轉(zhuǎn)染RhebY35N質(zhì)粒構(gòu)建穩(wěn)定過表達RhebY35N的293T細胞系,利用藥物特異性的調(diào)控細胞內(nèi)信號通路,用免疫印跡和免疫共沉淀來分析RhebY35N調(diào)控的信號通路。通過構(gòu)建RhebY35N過表達的NIH3T3裸鼠模型來檢測RhebY35N對腫瘤生長增殖的作用及藥物的治療效果。研究結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn)抑制mTOR通路后RhebY35N仍能持續(xù)激活MAPK信號通路來促進腫瘤增殖。此外,還發(fā)現(xiàn)RhebWT結(jié)合AMPKα來激活A(yù)MPK通路,而RhebY35N競爭性結(jié)合AMPK減少AMPK磷酸化來抑制AMPK通路。最后,用RhebY35N穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NIH3T3高表達細胞系構(gòu)建裸鼠模型,所形成的瘤體可以被雷帕霉素和一種MAPK抑制劑協(xié)同抑制。綜上所述,研究發(fā)現(xiàn)RhebY35N是一個促癌突變,并能夠同時激活mTORC1和MAPK來促進腫瘤生長。同時本論文提出對該突變型腫瘤聯(lián)合利用mTORC1和MAPK的抑制劑具有更有效的治療效果,為臨床治療提供了理論依據(jù)。
【學位授予單位】：大連大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R730.231

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1 王洋;RhebY35N突變促進腫瘤發(fā)生發(fā)展機制的研究[D];大連大學;2017年

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本文編號：2581375