發(fā)布時(shí)間：2020-02-11 04:40

【摘要】：研究背景及目的：循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating Tumor Cells, CTCs)是存在于腫瘤患者血液循環(huán)系統(tǒng)中的腫瘤細(xì)胞,有可能會(huì)導(dǎo)致疾病的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。CTCs的數(shù)量與復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移性乳腺癌(Metastatic Breast Cancer, MBC)患者預(yù)后相關(guān),血液中檢出越多,患者預(yù)后越差,同時(shí)在MBC的治療過(guò)程中,CTCs可以提前反映其腫瘤負(fù)荷的變化,用于評(píng)估治療療效。最近的研究發(fā)現(xiàn),存在于腫瘤患者外周血中的含有腫瘤特異性的游離DNA(Circulating Tumor DNA, ctDNA)片段,是一種敏感性高于CTCs的生物學(xué)標(biāo)記物(Biomarker)。在腫瘤患者治療過(guò)程中,CTCs和ctDNA做為新型液體活檢(liquid biopsy)指標(biāo),提供了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)療效和預(yù)測(cè)預(yù)后的可能。本研究主要觀察可手術(shù)乳腺癌患者外周血中的CTCs,分析其與臨床病理特征的關(guān)系,評(píng)估CTCs在可手術(shù)乳腺癌患者中的預(yù)后作用；動(dòng)態(tài)檢測(cè)進(jìn)展期乳腺癌患者血液中的ctDNA、CTCs,與核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)結(jié)果進(jìn)行比較,探討ctDNA/CTCs在進(jìn)展期乳腺癌患者術(shù)前化療療效中的評(píng)價(jià)作用。研究方法：(1)以2014年1月至2014年9月解放軍總醫(yī)院乳腺專(zhuān)病中心73例乳腺癌患者作為研究對(duì)象。術(shù)后第1天抽取外周血7.5m1保存于CellSave管中,用CellSearch系統(tǒng)檢測(cè)外周血的CTCs;分析入組患者的原發(fā)腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、 pTNM分期、腫瘤分子分型、ER、 PR、 Her-2、 Ki-67等指標(biāo)的表達(dá)情況：探討入組患者外周血CTCs與其原發(fā)腫瘤臨床病理特征的關(guān)系：以無(wú)病生存期(Disease Free Survival, DFS)為觀察指標(biāo),分析CTCs與可手術(shù)乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。(2)以2014年1月至2014年11月在解放軍總醫(yī)院乳腺專(zhuān)病中心接受術(shù)前化療的6例進(jìn)展期乳腺癌患者作為研究對(duì)象。應(yīng)用二代測(cè)序的方法,檢測(cè)患者第1次化療前的穿刺活檢標(biāo)本和化療后手術(shù)殘留腫瘤組織中與腫瘤相關(guān)的基因位點(diǎn),通過(guò)生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比分析出乳腺癌腫瘤組織特有的基因突變。應(yīng)用Digital PCR技術(shù)檢測(cè)入組患者連續(xù)血樣(每個(gè)化療周期第1天和手術(shù)前外周血標(biāo)本10ml存放于BCT管中,共7次)中突變基因位點(diǎn)的變化趨勢(shì)。應(yīng)用Cellsearch系統(tǒng)檢測(cè)入組患者連續(xù)血樣(每個(gè)化療周期第1天和手術(shù)前外周血標(biāo)本7.5m1存放于Cellsave管中,共7次)中的CTCS。分析比較ctDNA、CTCs、影像學(xué)檢查結(jié)果在進(jìn)展期乳腺癌患者術(shù)前化療中的療效評(píng)估作用。結(jié)果：CTCs與可手術(shù)乳腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系：(1)CTCs在可手術(shù)乳腺癌患者中的檢出率為16.4%。(2) CTCs日性與陰性組中,腫瘤直徑超過(guò)5cm患者的比例分別為25%、3.3%,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.036)。(3)在多因素分析中,腫瘤大小是CTCs日性的獨(dú)立影響因素(P=0.024.OR=2.024)。(4) CTCs陽(yáng)性與陰性患者2年DFS分別為82.0%、92.9%,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.045)。ctDNA在進(jìn)展期乳腺癌術(shù)前化療中的療效評(píng)價(jià)作用：(1)6例患者臨床總緩解率為100%,其中臨床完全緩解為83.3%(5/6),臨床部分緩解為16.7%(1/6)。(2)5例患者的組織樣本中成功檢測(cè)到與腫瘤相關(guān)的8個(gè)突變基因：PIK3CA、 GRIN2A、 TP53、 EWSR1、PDGFRA、FYN、 FANCF、 KMT2C;并且在治療前后發(fā)生明顯變化。通過(guò)生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)分析比對(duì),PIK3CA、 TP53為與乳腺癌相關(guān)的熱點(diǎn)突變基因。EWSR1、PDGFRA、 FYN的具體突變位點(diǎn)位于染色體內(nèi)含子區(qū)域,這些區(qū)域的基因不能翻譯成功能性蛋白。GRIN2A、 FANCF、 KMT2C的突變位點(diǎn)位于外顯子區(qū)域,尚沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與乳腺癌相關(guān)的報(bào)道。(3)2例患者檢出了PIK3CA突變,檢出率為40%。2例患者的PIK3CA突變頻率在治療過(guò)程中均呈下降趨勢(shì)。(4)血液中PIK3CA (ctDNA)的連續(xù)檢測(cè)顯示出了較寬的動(dòng)態(tài)范圍,與CTCs有強(qiáng)相關(guān)性(P=0.013)。(5)對(duì)比CTCs、影像學(xué)檢查與ctDNA在術(shù)前化療中的作用,ctDNA與CTCs在2例患者中均比影像學(xué)檢查結(jié)果提前反映了治療療效。結(jié)論：本研究結(jié)果初步表明：(1) CTCs在可手術(shù)乳腺癌患者中總體檢出率較低,檢出率與腫瘤大小有關(guān),腫瘤越大,檢出率越多：另外,血液中CTCs的出現(xiàn)提示可手術(shù)乳腺癌患者更容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。(2) PIK3CA突變基因是與乳腺癌相關(guān)的熱點(diǎn)突變基因,其血液中的ctDNA變化較CTCs和核磁共振影像結(jié)果更能提前反映乳腺癌治療效果。提示PIK3CA突變的血液中ctDNA有可能作為新的療效評(píng)價(jià)指標(biāo),應(yīng)用于進(jìn)展期乳腺癌術(shù)前化療。
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學(xué)院碩±學(xué)位論文邐逡逑ＰＲ、Ｈｅｒ－２、防－６７等免疫組化結(jié)果及腫瘤大小、淋己結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等病理特征。腫逡逑瘤細(xì)胞核染色超過(guò)１％判定為ＥＲ、ＰＲ陽(yáng)性ＰＷ；腫瘤細(xì)胞膜染色判定為Ｈｅｒ－２陽(yáng)性，逡逑０或＋者為陰性，＋＋者行巧光原位雜交法（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｉｎ邋ｓｉｔｕ邋ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，，ＦＩＳＨ）逡逑進(jìn)一步驗(yàn)證，＋＋＋者為陽(yáng)性s侔┓腫臃中投ㄒ宀慰跡玻埃保襯輳櫻簦侵罰澹罟彩噸繡義瞎賾趕侔┭切偷畝ㄒ澹校福�，邋７w裕危頭制詒曜及湊盞冢釩嬤琢齜制諳低辰繡義希�？�

本文編號(hào)：2578367