【摘要】：目的:體外實驗觀察不同肝素酶(Heparanase,HPSE)表達水平的肝癌細胞株的粘附、侵襲能力,并探究HPSE對內(nèi)皮細胞P選擇素細胞定位的影響。方法:1、細胞慢病毒轉染(Lv):選用肝癌細胞株HepG2作為實驗用細胞株,分別予以HPSE過表達及RNAi的慢病毒予以轉染,通過qRT-PCR及Western-blot技術檢測轉染細胞中HPSE基因及其蛋白的表達水平;2、細胞功能實驗:分別通過細胞粘附實驗,增殖實驗,侵襲、遷移實驗檢測轉染細胞的粘附、增殖、侵襲及遷移能力;3、細胞免疫熒光:分別予以人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)與轉染細胞進行非接觸性共培養(yǎng),通過細胞免疫熒光觀察不同HPSE作用下P選擇素在HUVECs中細胞定位;4、ELISA實驗:通過ELISA檢測非接觸性共培養(yǎng)下室培養(yǎng)基中可溶性CD62P的含量。結果:1、qRT-PCR結果:HPSE過表達組中,Lv轉染HPSE的Hep G2細胞HPSE mRNA的表達明顯高于陰性對照(NC)(P㩳0.05);HPSE RNAi組中,三組Lv轉染HPSE的HepG2細胞HPSE mRNA的表達明顯低于NC(P㩳0.05);2、Western-blot結果:在HPSE過表達組中,Lv轉染HPSE的HepG2細胞HPSE蛋白的表達明顯高于NC;HPSE RNAi干擾組中,三組Lv轉染HPSE RNAi的HepG2細胞HPSE蛋白表達明顯低于NC,且Lv轉染HPSE RNAi1 HepG2細胞中HPSE蛋白表達量低于Lv轉染HPSE RNAi2、3 HepG2細胞;3、細胞功能實驗:HPSE過表達組中,Lv轉染HPSE的HepG2的細胞增殖、粘附、侵襲及遷移能力均大于NC,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05);HPSE RNAi組中,Lv轉染HPSE RNAi的HepG2細胞增殖、粘附、侵襲能力均小于NC,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),但Lv轉染HPSE RNAi的HepG2的細胞遷移能力與NC無統(tǒng)計學差異(P㧐0.05);4、細胞免疫熒光實驗:在不同HPSE表達水平的轉染HepG2作用下,均可見CD62P表達HUVECs胞質(zhì)中;5、ELISA實驗:HPSE過表達組,Lv轉染HPSE的HepG2細胞作用下HUVECs培養(yǎng)上清液中可溶性CD62P的含量與NC無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05);HPSE RNAi組,Lv轉染HPSE RNAi HepG2的細胞作用下HUVECs培養(yǎng)上清液中可溶性CD62P的含量與NC無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。結論:HPSE過表達及RNAi慢病毒轉染HepG2細胞可有效上調(diào)及下調(diào)HPSE基因及蛋白表達;體外實驗HepG2內(nèi)HPSE表達上調(diào)可增加細胞的增殖、粘附、侵襲及遷移能力;HepG2內(nèi)HPSE表達下調(diào)使細胞的增殖、粘附、侵襲能力減弱,但對細胞的遷移能力無影響;不同HPSE表達水平HepG2作用下,CD62P均表達于HUVECs細胞胞質(zhì)內(nèi),但對HUVECs培養(yǎng)上清液中可溶性CD62P的含量無影響。
【圖文】：

圖 1 熒光顯微鏡下觀察的 HPSE 過表達及 RNAi 慢病毒轉染 HepG2 細胞注 1-A：明視野下 HPSE 過表達慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100）；1-B：HPSE 過表達慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100，熒光標記基因 GFP1-C：明視野下 HPSE 過表達陰性對照轉染 HepG-2 細胞后（SP×100）；1-D：HPSE 過表達陰性對照轉染 HepG-2 細胞后（SP×100，熒光標記基因 G1-E：明視野下 HPSE RNAi1 慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100）；1-F：HPSE RNAi1 慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100，熒光標記基因 GFP1-G：明視野下 HPSE RNAi2 慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100）；1-H：HPSE RNAi2 慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100，熒光標記基因 GFP1-I：明視野下 HPSE RNAi3 慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100）；1-J：HPSE RNAi3 慢病毒轉染 HepG-2 細胞后（SP×100，熒光標記基因 GFP1-K：明視野下 HPSE RNAi 陰性對照轉染 HepG-2 細胞后（SP×100）；

圖 2 HPSE 過表達（2-A）及 RNAi 慢病毒（2-B）轉染HepG2 細胞 HPSE 基因的表達水平RT-PCR 檢測 HPSE 過表達及 RNAi 慢病毒轉染的 HepG2 細胞中 HPSE 基達水平變化：如圖 2-A 所示，，HPSE 過表達 HepG2 細胞組中，Lv-HPSE2 細胞中 HPSE 基因的表達量明顯高于 NC，差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P1）；圖 2-B 所示，Lv-HPSE RNAi1、2、3 HepG2 細胞中 HPSE 基因表達量低于 NC，差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P㩳0.01）；其中 Lv-HPSE RNAi12 細胞中 HPSE 的表達量低于 Lv-HPSE RNAi2、3 HepG2 細胞中 HPSE 基量。estern Blot 檢測 HPSE 蛋白的表達
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 陳新創(chuàng);黃黎明;蔣國強;;血清可溶性E-選擇素檢測對乳腺癌遠處轉移的預測價值[J];中華危重癥醫(yī)學雜志(電子版);2016年02期

2 師騰瑞;于衛(wèi)華;海春旭;秦緒軍;;活性氧調(diào)控細胞增殖的分子機制研究進展[J];癌變·畸變·突變;2015年06期

3 陳曉鵬;羅俊生;田野;聶宸麟;崔巍;張衛(wèi)東;;肝素酶調(diào)節(jié)對肝癌細胞粘附侵襲能力的影響[J];中國腫瘤臨床;2014年18期

4 王煉煉;鄧幼林;李聰;;Chk1基因對人卵巢癌細胞HO8910增殖及細胞周期調(diào)控的影響及可能機制[J];重慶醫(yī)科大學學報;2014年11期

5 范磊;吳強;邢曉娟;劉郁東;邵增務;;Targeted Silencing of Heparanase Gene by Small Interfering RNA Inhibits Invasiveness and Metastasis of Osteosarcoma Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2011年03期

6 張梁;黃涵;周娜;鄧巧瑩;黃永秩;;結直腸癌患者血清可溶性E-選擇素及細胞黏附分子-1水平及臨床意義[J];檢驗醫(yī)學;2010年08期

7 樊嘉;史穎弘;;肝癌復發(fā)和轉移的新理念[J];中華消化外科雜志;2010年01期

8 陳孝平,裘法祖,吳在德,何松青,張萬廣,劉安重,孟春城,江斌,喬森,潘華鋒,史光軍,曹斌;肝細胞癌門靜脈癌栓形成的分子生物學機制研究[J];中華實驗外科雜志;2005年09期

9 ;Interaction of vascular endothelial cells with leukocytes, platelets and cancer cells in inflammation, thrombosis and cancer growth and metastasis[J];Acta Pharmacologica Sinica;2003年12期

本文編號：2577463