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食管癌中P53蛋白和Akt蛋白相互關(guān)系研究

發(fā)布時(shí)間:2020-01-22 17:31
【摘要】:目的食管癌是人類(lèi)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,占所有惡性腫瘤的2%,每年全球約有40萬(wàn)人死于食管癌。我國(guó)是食管癌高發(fā)地區(qū)之一。癌基因和抑癌基因表達(dá)的失調(diào)造成細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的改變,繼而帶來(lái)癌細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展。p53是人體內(nèi)重要的抑癌基因,akt是人體內(nèi)重要的癌基因。在正常人體細(xì)胞內(nèi)兩者處于動(dòng)態(tài)平衡中,共同調(diào)節(jié)了細(xì)胞的增殖和凋亡。癌細(xì)胞凋亡和增殖的失衡提示其細(xì)胞內(nèi)P53和Akt的表達(dá)較正常人體細(xì)胞發(fā)生了變化。本文旨在探究食管癌細(xì)胞中兩個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路上游節(jié)點(diǎn):P53和Akt蛋白之間的關(guān)系正常細(xì)胞發(fā)生了何種變化,初步明確其在癌細(xì)胞內(nèi)的生物學(xué)特性,從而更好地了解腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展。方法取手術(shù)切除的食管癌及癌旁組織制成病理切片并行免疫組化檢查,檢測(cè)有無(wú)p-Akt1,p-Akt2,Akt和P53蛋白表達(dá);取TE-1食管高分化鱗癌細(xì)胞培養(yǎng),提取細(xì)胞蛋白western blot法檢測(cè)其p-Akt1,p-Akt2,Akt和P53濃度;再分別使用P53抑制劑Pifithrin-α,Akt1抑制劑A-674563,Akt2抑制劑CCT128930作用于TE-1細(xì)胞,分別提取細(xì)胞蛋白,western blot法檢測(cè)p-Akt1,p-Akt2和P53濃度,觀察蛋白之間相互關(guān)系;取人體食管癌組織對(duì)p53基因外顯子進(jìn)行基因測(cè)序,并比對(duì)GENEBANK發(fā)現(xiàn)其突變,對(duì)比相關(guān)文獻(xiàn)明確突變類(lèi)型;結(jié)果50 例食管癌組織中,分別 52%(26/50)、42%(21/50)、30%(15/50)、66%(33/50)的食管癌組織表達(dá)P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白,癌旁組織分別22%(11/50)、18%(9/50)、8%(4/50)、28%(14/50)的癌旁組織表達(dá)P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白,食管癌顯著表達(dá)更多的P53(p=0.002)、Akt(p=0.009)、p-Akt1(p=0.005)和p-Akt2(p=0.000)蛋白。跟中高分化食管癌、Ⅲ+Ⅳ期食管癌、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌相比,P53蛋白在低分化食管癌、Ⅰ+Ⅱ期食管癌、沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌中表達(dá)沒(méi)有顯著增加(p0.05)。跟中高分化食管癌、Ⅲ+Ⅳ期食管癌相比,Akt,p-Akt1,p-Akt2蛋白在低分化食管癌、Ⅰ+Ⅱ期食管癌中表達(dá)沒(méi)有顯著增加(p0.05);在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌中Akt,p-Akt1,p-Akt2蛋白表達(dá)顯著增加(p0.05,提示Akt蛋白的兩個(gè)亞型參與了食管癌細(xì)胞再淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)移。和對(duì)照組相比,使用P53抑制劑Pifithrin-α的食管癌TE-1細(xì)胞P53、Akt、p-Akt1表達(dá)量明顯下降(p=0.002,p=0.032,p=0.016);p-Akt2表達(dá)量沒(méi)有明顯下降(p=0.133);使用p-akt1抑制劑A-674563后P53、Akt、p-Akt1表達(dá)量明顯下降(p=0.004,p=0.004,p=0.011);p-Akt2表達(dá)量沒(méi)有明顯下降(p=0.519)。使用 p-akt2 抑制劑 CCT128930 后 P53、Akt、p-Akt1、p-Akt2 表達(dá)量明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.014,p=0.013,p=0.010,p=0.005)。在50例食管癌組織標(biāo)本中均未測(cè)出有R175H、H179R、R248Q和R273H位置的突變。結(jié)論食管癌較正常組織表達(dá)更多的P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白,Akt1和Akt2蛋白可能參與了食管癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。異于正常組織里P53和Akt之間的相互抑制關(guān)系,在食管癌細(xì)胞內(nèi)P53蛋白和Akt1、Akt2蛋白互為促進(jìn),共同介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展。但是蛋白之間這一相互關(guān)系的變化并不是p53基因發(fā)生突變出現(xiàn)p53R175H、H179R、R248Q和R273H突變體的原因,仍需進(jìn)一步的研究闡明其機(jī)理。
【圖文】:

蛋白,食管癌,癌組織


圖3邋p-Aktl蛋白在食管癌組織中表達(dá)邐圖4邐p-Akt2蛋白在食管癌組織中表達(dá)逡逑為陽(yáng)性(x邋200)邐為陽(yáng)性(x邋200)逡逑表1邋P53蛋白在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)逡逑m\邐Ml邐P53邐P逡逑m±邐il逡逑癌組織邐50邐^邐24邐M02逡逑癌旁粘膜邐50邐11邐39逡逑表2邋Akt蛋白在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)逡逑m\邐Ml邐Akt邐p逡逑il邐il逡逑

蛋白,食管癌,癌組織


圖3邋p-Aktl蛋白在食管癌組織中表達(dá)邐圖4邐p-Akt2蛋白在食管癌組織中表達(dá)逡逑為陽(yáng)性(x邋200)邐為陽(yáng)性(x邋200)逡逑表1邋P53蛋白在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)逡逑m\邐Ml邐P53邐P逡逑m±邐il逡逑癌組織邐50邐^邐24邐M02逡逑癌旁粘膜邐50邐11邐39逡逑表2邋Akt蛋白在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)逡逑m\邐Ml邐Akt邐p逡逑il邐il逡逑
【學(xué)位授予單位】:揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類(lèi)號(hào)】:R735.1

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本文編號(hào):2572017


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