【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤組織及正常腦組織中的酪蛋白激酶CK2及人造血相關(guān)的PBX相互作用蛋白HPIIP表達(dá)含量的測定,探討人腦膠質(zhì)瘤中酪蛋白激酶CK2和人造血相關(guān)的PBX相互作用蛋白HPIP在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)意義及兩者的相關(guān)性。方法:收集自2014年4月到2015年9月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本64例,已取得病例標(biāo)本病理診斷明確,由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科有經(jīng)驗(yàn)或高年資主任醫(yī)師按照WHO腦腫瘤分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)完成,其中I級(jí)人腦膠質(zhì)瘤9例,II級(jí)人腦膠質(zhì)瘤17例,III級(jí)人腦膠質(zhì)瘤18例,IV級(jí)人腦膠質(zhì)瘤11例。正常腦組織的病理標(biāo)本均來自因顱腦外傷或顱內(nèi)出血病患需要行內(nèi)減壓術(shù)所取的腦組織標(biāo)本,共取13例作為對(duì)照組。本次實(shí)驗(yàn)研究所收集的人腦膠質(zhì)瘤病理診斷,均為首診,在手術(shù)前均未采取任何放療及化療等抗腫瘤治療措施。所有實(shí)驗(yàn)用的標(biāo)本,均是手術(shù)中切除病理組織標(biāo)本后,快速取材,分別以10%的福爾馬林液和-80度液氮保存待用。所取標(biāo)本分為以下五組:正常腦組織組,I級(jí)膠質(zhì)瘤組,II級(jí)膠質(zhì)瘤組,III級(jí)膠質(zhì)瘤組,IV級(jí)膠質(zhì)瘤組。其中低級(jí)別膠質(zhì)瘤I~II級(jí),高級(jí)別膠質(zhì)瘤III~IV級(jí)。采用免疫組織化學(xué)方法IHC分別檢測CK2和HPIP在上述病理組織切片中的表達(dá),采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0分析,免疫熒光法檢測CK2和HPIP在同一病理切片內(nèi)表達(dá)情況,分析其表達(dá)特點(diǎn)。應(yīng)用Western Blot方法同測定上述每組標(biāo)本CK2和HPIP的蛋白印跡情況,應(yīng)用相關(guān)軟件Quantity One分別檢測各條帶的灰度值,根據(jù)灰度值在應(yīng)用SPSS 19.0軟件中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后得出結(jié)論。結(jié)果:1免疫組織化學(xué)IHC檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)描述,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)符合正態(tài)性檢驗(yàn)以(x±s%)表示,得知:HPIP在正常腦組織,低級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤I~II級(jí),陽性率分別為6.98±4.604%、25.54±20.093%、53.32±23.630%。而在高級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤III~IV級(jí),表達(dá)陽性率分別達(dá)到73.69±15.539%、82.79±16.246%,可見隨著腫瘤惡性程度不斷增高,HPIP表達(dá)量不斷增加,單因素方差分析(One-way ANOVA)結(jié)果統(tǒng)計(jì)量為14.736,P0.01,Pearson等級(jí)相關(guān)分析得出的相關(guān)系數(shù)r=0.779,P0.01,HPIP表達(dá)與腫瘤分級(jí)有關(guān)。腫瘤惡性程度分級(jí)越高,HPIP表達(dá)陽性率隨之越高,圖片見:Fig 1~5。統(tǒng)計(jì)圖表詳見Table 1、Table 2。CK2正常腦組織,低級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤I~II級(jí),陽性率分別為8.97±8.379%、28.70±19.848%、45.75±24.881%。高級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤III~IV級(jí)表達(dá)陽性率分別為66.50±18.170%、76.67±16.887%,可得出隨著腫瘤惡性程度增高,CK2表達(dá)量增加。單因素方差分析(One-way ANOVA)結(jié)果統(tǒng)計(jì)量為9.680 P0.01,Pearson等級(jí)相關(guān)分析得出相關(guān)系數(shù)r=0.712,P0.01,CK2表達(dá)可與腫瘤分級(jí)呈正相關(guān):CK2隨著腫瘤分級(jí)升高,而表達(dá)陽性率越高。圖片見Fig.6~10、Table 3、Table 4。針對(duì)HPIP與CK2的表達(dá)情況進(jìn)行了相關(guān)性分析。Pearson等級(jí)相關(guān)分析得出的相關(guān)系數(shù)為r=0.922,P0.01,即HPIP表達(dá)與CK2表達(dá)呈高度相關(guān):隨著HPIP表達(dá)陽性率等級(jí)越高,CK2表達(dá)陽性率等級(jí)亦越高,詳見Table 5。2免疫熒光結(jié)果分析得知;觀察兩種因子在同一病理組織標(biāo)本中的分布情況�？梢娋G色熒光是CK2因子,而紅色熒光是HPIP因子,細(xì)胞核顯示為藍(lán)色熒光。同一病理組織切片中兩種蛋白,分布表達(dá)共同定位在細(xì)胞核。詳見Fig11、Fig12、Fig13。3 Western blot結(jié)果顯示:采用此方法對(duì)各組織標(biāo)本的蛋白含量進(jìn)行測定。觀察CK2、HPIP兩種蛋白,分別在正常腦組織對(duì)照組,低級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤I~II級(jí)、高級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤III~IV級(jí)的蛋白表達(dá)情況,檢測結(jié)果以測定的灰度值為標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算方法為目的條帶與GAPDH光密度的比值作為蛋白的相對(duì)表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)重復(fù)10遍,分析HPIP、CK2的相對(duì)表達(dá)量,HPIP的相對(duì)表達(dá)量逐漸升高,CK2的相對(duì)表達(dá)量逐漸增高。各級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤組分別與正常腦組織組內(nèi)比較,采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差SD表示,P0.05,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Pearson等級(jí)相關(guān)分析得出的相關(guān)系數(shù)為r=0.926,P0.01,即隨著HPIP相對(duì)表達(dá)量升高,而CK2相對(duì)表達(dá)量升高。詳見Table 6、Table 7、Fig.14、Fig.15、Fig.16、Fig.17、Fig.18、Fig.19。結(jié)論:1 CK2與HPIP在正常腦組織均呈陽性表達(dá),在不同級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤都呈過表達(dá)。正常腦組織,低級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤I~II級(jí),高級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤III~IV級(jí)三組之間以及兩兩組間的表達(dá)比較,均存在顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著人腦膠質(zhì)瘤的惡性級(jí)別增高,CK2與HPIP表達(dá)量逐漸增高。表明在人腦膠質(zhì)瘤的發(fā)展過程中,CK2與HPIP可能具有重要的作用,與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度可能具有一定關(guān)系。2觀察同一病理組織標(biāo)本中兩種因子的分布情況。相同組織切片中兩種因子,分布表達(dá)均定位在細(xì)胞核。結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果,CK2與HPIP可能存在一定的相關(guān)性,提示兩者之間可能存在相互作用。3通過對(duì)正常腦組織、低級(jí)別和高級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤組內(nèi)檢測結(jié)果,兩種實(shí)驗(yàn)的等級(jí)相關(guān)性分析,P值均小于0.01。由此推斷,HPIP有可能通過輔助CK2在人腦膠質(zhì)瘤中發(fā)揮協(xié)同作用。
【圖文】：

HPIP在正常腦組織的表達(dá)IHC×400Fig.1ExpressioninnormalbrainofHPIPIHC×400

HPIP在I級(jí)腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)IHC×400Fig.2ExpressioninIlevelgliomasofHPIPIHC×400
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐小潔;王凌雪;范忠義;丁麗華;張浩;楊智洪;李杰之;葉棋濃;;敲減人HPIP基因表達(dá)抑制細(xì)胞生長增殖[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年02期

，

本文編號(hào)：2567814