【摘要】：研究背景食管癌(Esophageal carcinoma)是一種臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤,起源于食管上皮,主要的組織類型為鱗癌和腺癌。在我國(guó)90%的食管癌為鱗狀細(xì)胞癌,腺癌只占不到10%。男性患病率高于女性,多在40歲以上發(fā)病。由于人食管解剖結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),其預(yù)后較差,整體生存率低于10%,術(shù)后5年生存率約20%-40%。我國(guó)是食管癌高發(fā)區(qū)之一,同時(shí)也是高死亡率國(guó)家之一,大約每年有15萬(wàn)人死于食管癌,占癌癥總死亡率的23.53%。食管癌的早期癥狀多不明顯,一旦出現(xiàn)典型臨床癥狀,多數(shù)錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)。目前認(rèn)為食管癌是一種多因素作用、多基因相關(guān)、多階段發(fā)展的疾病,盡管眾多學(xué)者做了大量研究,仍未闡明其確切發(fā)病機(jī)制。鑒于其生存率低,預(yù)后差,因此早期識(shí)別食管癌就顯得尤為重要。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的主要作用機(jī)制之一。EMT是具有極性的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)換成能夠在細(xì)胞基質(zhì)間自由移動(dòng)的細(xì)胞過(guò)程,其轉(zhuǎn)變的主要特征在于原來(lái)的細(xì)胞失去上皮細(xì)胞特性,轉(zhuǎn)而表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞的特性。在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中,癌細(xì)胞通過(guò)EMT實(shí)現(xiàn)對(duì)周圍組織的浸潤(rùn)；到達(dá)種植部位后,癌細(xì)胞通過(guò)間質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化(Mesenchymal-epithelial transition, MET)最終形成與原發(fā)灶在形態(tài)結(jié)構(gòu)上相似的轉(zhuǎn)移灶�；|(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase, MMP)是一組由結(jié)締組織分泌依賴Zn2+的能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶家族,到目前為止共發(fā)現(xiàn)28個(gè)成員。目前研究表明MMP參與了血管基底膜的降解及細(xì)胞外基質(zhì)的重塑過(guò)程,從而導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞能夠侵襲、轉(zhuǎn)移到周圍組織并促進(jìn)腫瘤血管的生成。正是這一過(guò)程導(dǎo)致了腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率的增高,也是促進(jìn)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。ZEB(Zinc finger E-box binding protein)即E盒鋅指結(jié)合蛋白,其家族成員包括ZEB1 (zinc-finger E-box binding homeobox 1)和ZEB2 (zinc-finger E-box binding homeobox 2)2種。ZEB2能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向具有高侵襲、高轉(zhuǎn)移能力的間質(zhì)表型轉(zhuǎn)變,從而使腫瘤細(xì)胞喪失上皮細(xì)胞特性的標(biāo)志物,獲得間葉細(xì)胞特性的標(biāo)志物。另有研究表明ZEB2是通過(guò)與靶基因啟動(dòng)子區(qū)的E-box結(jié)合,從而抑制上皮細(xì)胞特性標(biāo)志物如細(xì)胞間E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)、緊密連接蛋白(claudin)、間隙連接蛋白(connexin)、橋粒斑蛋白(desmoplakin)等靶基因的轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致上皮細(xì)胞極性的喪失和細(xì)胞間連接的減少。與此同時(shí),過(guò)高表達(dá)的ZEB2可以促進(jìn)間質(zhì)性標(biāo)志物如波形蛋白(vimentin)、纖維連接蛋白(fibronectin)、MMP的表達(dá),誘導(dǎo)EMT的發(fā)生,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。Hedgehog信號(hào)通路包括配體Hh、胞膜受體Ptch和Smo、下游轉(zhuǎn)錄因子Gli、Hip(負(fù)性調(diào)節(jié)因子)和SuFu (Fu抑制因子)�？缒さ鞍譖tch和Smo形成受體復(fù)合物與Hedgehog結(jié)合后,Smo構(gòu)象發(fā)生改變,解除了Ptch對(duì)其的抑制,Smo進(jìn)入胞質(zhì),將信號(hào)下傳,激活轉(zhuǎn)錄因子Gli,后者進(jìn)入細(xì)胞核,啟動(dòng)Gli1, Wnt和EGF等目的基因的表達(dá)。SuFu通過(guò)結(jié)合Gli,阻止Gli激活下游靶基因,從而導(dǎo)致Hedgehog通路的抑制。研究發(fā)現(xiàn)Hedgehog信號(hào)通路在包括皮膚基底細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、前列腺癌、胃癌、乳腺癌和胰腺癌等多種腫瘤組織中出現(xiàn)異常激活。有研究表明,Gli1通過(guò)上調(diào)MMP11參與了乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。另有研究表明,Hedgehog信號(hào)通路中Gli1通過(guò)調(diào)節(jié)ZEB2促進(jìn)EMT發(fā)生、發(fā)展。EMT是否參與了食管癌的的發(fā)生、發(fā)展,并且MMP11、ZEB2是否參與其中均未可知；Hedgehog信號(hào)通路是否對(duì)食管癌有調(diào)控作用,具體調(diào)控途徑如何亦未可知。本部分采用免疫組化的方法檢測(cè)Gli1、MMP11、ZEB2在食管癌組織中的表達(dá),并探討其與臨床因素的相關(guān)性。研究目的檢測(cè)人食管鱗癌、癌旁組織和正常組織中Gli1、MMP11、ZEB2蛋白的表達(dá)水平,并探究它們和食管癌患者的年齡、性別、臨床分期等臨床病理因素的關(guān)系,為臨床診斷食管鱗癌尋求新的思路。研究方法運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)72例食管鱗癌組織及其對(duì)應(yīng)的72例癌旁組織(距腫塊邊緣5cm以上)和18例正常的食管組織中Gli1、MMP11、ZEB2蛋白的表達(dá)水平。應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件比較Gli1、MMP11、ZEB2蛋白表達(dá)量與食管鱗癌組織、癌旁組織和正常組織的臨床病理因素的關(guān)系。結(jié)果1、Gli1在食管鱗癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為55.6%，，癌旁組織為13.9%，食管正常組織中為11.1%,組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Gli1在癌旁組織和食管正常組織中的表達(dá)均顯著低于鱗癌組織(P0.05), Gli1在癌旁組織和食管正常組織中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、Gli1陽(yáng)性表達(dá)率在Ⅰ期和Ⅱ期遠(yuǎn)低于Ⅲ期和Ⅳ期(P0.05),T1期和T2期遠(yuǎn)低于T3期和T4期(P0.05),無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的遠(yuǎn)低于轉(zhuǎn)移的(P0.05),但其表達(dá)與年齡、性別、腫瘤位置、直徑及分化程度無(wú)關(guān)(P0.05)。3、MMP11在食管鱗癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為69.4%,癌旁組織為25.0%,食管正常組織中為22.2%,組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。MMP11在癌旁組織和正常組織中的表達(dá)均低于鱗癌(P0.05), MMP11在癌旁組織和食管正常組織中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、MMP11陽(yáng)性表達(dá)率在Ⅰ期和Ⅱ期遠(yuǎn)低于Ⅲ期和Ⅳ期(P0.05),T1期和T2期遠(yuǎn)低于T3期和T4期(P0.05),無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的遠(yuǎn)低于轉(zhuǎn)移的(P0.05),但其表達(dá)與年齡、性別、腫瘤位置、直徑及分化程度無(wú)關(guān)(P0.05)。5、ZEB2蛋白在食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為60.5%,癌旁組織為14.0%,食管正常組織中為8.3%,組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ZEB2在食管癌旁組織和正常組織中的表達(dá)均顯著低于食管鱗癌組織(P0.05), ZEB2在癌旁組織和正常食管組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6、ZEB2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在Ⅰ期和Ⅱ期遠(yuǎn)低于Ⅲ期和Ⅳ期(P0.05),T1期和T2期遠(yuǎn)低于T3期和T4期(P0.05),無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移的遠(yuǎn)低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的(P0.05),但其表達(dá)和患者的年齡、性別與腫瘤的位置、直徑及分化程度無(wú)關(guān)(P0.05)。7、Gli1、MMP11、ZEB2的表達(dá)在食管鱗癌中呈正相關(guān)。結(jié)論1、Gli1、MMP11、ZEB2與食管鱗癌的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān),與患者的年齡、性別、腫瘤的位置、直徑、分化程度無(wú)關(guān)。2、Gli1、MMP11、ZEB2參與了食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,較高表達(dá)的Gli1、MMP11、ZEB2可能是促進(jìn)食管鱗癌侵襲、轉(zhuǎn)移的因素之一。3、聯(lián)合檢測(cè)Gli1、MMP11、ZEB2有助于判斷食管鱗癌的惡性程度,可為臨床診斷及治療提供一定的理論參考依據(jù)。研究背景EMT的發(fā)生、發(fā)展與多種蛋白分子、基因及微環(huán)境等有關(guān),涉及到多個(gè)相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控,其中包括P13K/AKT信號(hào)通路、TGF-β信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路和Notch信號(hào)通路等,并且受到多種生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié),如上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等,與上皮細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合后,激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的表達(dá),最終促進(jìn)EMT的發(fā)生。環(huán)巴胺(Cyclopamine)是一種提取自山黎蘆的甾體類生物堿,通過(guò)特異性地與Smo結(jié)合導(dǎo)致Hedgehog信號(hào)通路失活,使用環(huán)巴胺處理人腫瘤細(xì)胞系,或者用小鼠異種移植體培養(yǎng)的腫瘤活組織之后,在體內(nèi)、外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用。本部分檢測(cè)Hedgehog、EMT在食管癌細(xì)胞中的表達(dá),采用環(huán)巴胺抑制Hedgehog后觀察Hedgehog、EMT的變化,研究二者之間是否具有一定的相關(guān)性。研究目的檢測(cè)人食管癌細(xì)胞及環(huán)巴胺干預(yù)后Gli1mRNA、MMP11mRNA、ZEB2mRNA的表達(dá)水平,探討Hedgehog和EMT在食管癌細(xì)胞中的相關(guān)性,并驗(yàn)證環(huán)巴胺的治療作用。研究方法1、MTT法檢測(cè)環(huán)巴胺的時(shí)間-劑量-效應(yīng)曲線及中效濃度。2.Real-time PCR檢測(cè)人食管癌細(xì)胞EC9706加入環(huán)巴胺前后Gli1mRNA、 MMP11mRNA、ZEB2mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果1、環(huán)巴胺處理EC9706后可以抑制細(xì)胞增殖、生長(zhǎng),細(xì)胞由飽滿的梭形貼壁生長(zhǎng)變?yōu)檩喞磺宓膱A鈍半貼壁狀態(tài),在一定濃度下抑制率隨濃度增高而增大且具有相關(guān)性,而且干預(yù)的時(shí)間越長(zhǎng),其抑制率也隨之加大,在相當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)具有藥物作用時(shí)間和作用濃度依賴性。作用2天后的IC5o為16±1.87μmol/L。2、環(huán)巴胺作用于EC9706后Gli1mRNA、MMP11mRNA、ZEB2mRNA表達(dá)均下調(diào)。結(jié)論1、環(huán)巴胺可以抑制人食管癌細(xì)胞EC9706的增殖。2、Hedgehog信號(hào)通路可能與MMP11、ZEB2具有一定的相關(guān)性,可能共同參與了食管癌細(xì)胞的增殖。3、環(huán)巴胺可能對(duì)食管癌具有治療作用。
【圖文】：

食管癌細(xì)胞EC9706(加環(huán)巴胺前)

環(huán)巴胺對(duì)EC9706細(xì)胞的ICso
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 Simona Gurzu;Camelia Silveanu;Annamaria Fetyko;Vlad Butiurca;Zsolt Kovacs;Ioan Jung;;Systematic review of the old and new concepts in the epithelial-mesenchymal transition of colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2016年30期

2 王慶海;蔣惠萍;鄧曉潔;方唯意;郭遂群;;上皮性卵巢癌中ZEB2和C-myc蛋白的表達(dá)及臨床意義[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年12期

3 Yutong He;Yan Wu;Guohui Song;Yongwei Li;Di Liang;Jing Jin;Denggui Wen;Baoen Shan;;Incidence and mortality rate of esophageal cancer has decreased during past 40 years in Hebei Province,China[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年06期

4 耿艷鳴;楊捷;陳超伍;喬云飛;蔣記心;;ZEB1在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及其臨床意義[J];臨床肺科雜志;2014年06期

5 魯艷明;銀鐸;王寧;李翔;李一寧;張淑蘭;;miRNA-200c對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲能力影響觀察[J];中華腫瘤防治雜志;2014年10期

6 周文娟;孟躍進(jìn);郭曉峰;閆東;;宮頸癌組織中ZEB2和E-cad蛋白的表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

7 何斌;孫曉青;;Gli-1基因的RNAi對(duì)前列腺癌DU145細(xì)胞的影響[J];河南外科學(xué)雜志;2012年05期

8 徐大方;陳平;趙群;趙偉;石磊;蔣健;;胃癌組織中MMP-11 mRNA的表達(dá)及臨床意義[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2012年15期

9 劉雪詠;張聲;;ZEB基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2012年01期

10 歐陽(yáng)小波;郝亞琴;王立;;Shh、Gli1和MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年09期

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1 劉靳波;SHH信號(hào)通路核轉(zhuǎn)錄因子Gli1在肝癌中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2567709