【摘要】：肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界排名第六的癌癥,也是因癌癥死亡的第三大病因。HCC患者的預后和存活與腫瘤轉移的程度密切相關。然而HCC發(fā)生轉移的機制仍不清楚。本實驗是旨在探討C反應蛋白(C-reactive protein,CRP)在體外影響肝癌細胞生物學行為的相關分子機制。通過免疫組化檢測到CRP在肝癌組織中是高表達的。并且CRP沉默后在體外抑制HCC轉移。運用iTRAQ的質譜篩選CRP siRNA和陰性對照siRNA處理Hep G2后分泌蛋白的中差異表達的蛋白。本實驗篩選出109個差異表達的蛋白,其中45個是上調的,64個是下調的。進一步運用Western Blot和實時熒光定量PCR驗證差異表達的蛋白。在這些差異表達的蛋白中發(fā)現(xiàn)IL-11,CTSD這些與腫瘤的轉移密切相關的蛋白明顯下調。此外,我們還發(fā)現(xiàn)Hep G2細胞中CRP沉默后,下調了HIF-1α的表達水平,降低了HIF-1α的熒光素酶活性以及ERK和Akt磷酸化。結論是本實驗運用了定量蛋白質組學方法篩選出CRP促進HCC體外侵襲和遷移的相關蛋白,還發(fā)現(xiàn)CRP沉默后可能是通過MEK/ERK和PI3K/AKT信號通路降低HIF-1α活性后抑制了HCC轉移。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文 實驗結果.1 相比于癌旁組織,肝癌組織中 CRP 是高表達的利用組織芯片的免疫組化染色檢測 CRP 的表達，每個芯片含有 40 例肝癌和 40 例癌旁組織。用染色指數(shù)評價目的蛋白的表達水平。染色強度分為 0~性細胞的百分比為 0-100，，兩者相乘的結果為最后的得分。研究結果發(fā)現(xiàn) C肝癌組織中的表達明顯高于癌旁組織（如圖 1.1）。

1.2 Western blot 檢測 CRP siRNA 處理HepG2 和BEL 7402細胞后 CRP 蛋白在細胞和細胞內的表達水平igure 1.2 Cells were transfected with CRP-targeted siRNAs. Western blot analysis shows the silencing of CRP significantly reduced CRP protein levels, intracellular CRP(Ic-CRand extracellular CRP (Ec-CRP) of HepG2 and BEL 7402cells.The respective gray scaleanalysis results are shown..3 CRPsiRNA 轉染后對肝癌侵襲能力的影響侵襲遷移是腫瘤細胞的一個很重要的生物學功能，與腫瘤患者的預后有一聯(lián)系。本實驗在體外用 CRP siRNA, Negative siRNA 處理 HepG2 和 BEL7402 究結果顯示轉染 CRP siRNA 的兩株肝癌細胞侵襲能力分別明顯下降了 63 %%（如圖 1.3）。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：2563515