【摘要】：背景：脂肪代謝及脂質(zhì)分子與腫瘤關(guān)系密切。單酰胺基脂肪酶(MAGL)主要參與人體內(nèi)甘油三脂代謝生成游離脂肪酸(FFAs)。最新研究表明,單酰基甘油脂肪酶通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)提高腫瘤細(xì)胞致病性及侵襲性。并且抑制MAGL基因或活性后,一些與腫瘤密切相關(guān)的脂質(zhì)分子如溶血磷脂(LPA),前列腺素E2(PGE2)等水平隨FFAs水平發(fā)生變化。MAGL-FFAs通路調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)從而影響腫瘤侵襲性,MAGL是其中關(guān)鍵的節(jié)點(diǎn)。在結(jié)腸癌中MAGL高表達(dá)與腫瘤組織中,并且抑制MAGL基因表達(dá)及活性會(huì)導(dǎo)致結(jié)直腸癌細(xì)胞株增殖減弱,凋亡增多,細(xì)胞周期阻滯,侵襲能力下降,其可能與Cyclin D1及Bcl-2有關(guān),但是MAGL與細(xì)胞凋亡及腫瘤遷移之間的關(guān)系仍不明確。本實(shí)驗(yàn)旨在探索JZL184抑制MAGL活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系增殖、凋亡和遷移影響,尋求結(jié)直腸癌治療新的靶點(diǎn)及治療方法。 目的：研究MAGL抑制劑JZL184對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移能力及對(duì)化療藥物敏感性的影響及其機(jī)制。 方法：本實(shí)驗(yàn)首先利用JZL184干預(yù)結(jié)直腸癌細(xì)胞系,通過(guò)MTT檢測(cè)JZL184對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系增殖能力的影響,及JZL184聯(lián)合5-FU與單用5-FU對(duì)腫瘤影響有無(wú)差異,流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)JZL184對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的影響以及比較L184聯(lián)合不同濃度的5-FU與單用5-FU對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系凋亡影響的差異。然后Transwell檢測(cè)JZL184對(duì)不同轉(zhuǎn)移潛能的SW480及SW620細(xì)胞系細(xì)胞遷移的影響。之后利用Realtime-PCR和Western-blot檢測(cè)Bcl-2及Bax基因及蛋白水平的變化。最后利用Western-blot檢測(cè)其他細(xì)胞凋亡分子pro-Caspase8和pro-Caspase3、與上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)的分子以及AKT-mTOR通路中p-AKT及p-mTOR蛋白水平的變化。 結(jié)果：JZL184可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480、Lovo、HCT116細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡增多。JZL184聯(lián)合不同濃度的5-FU與單用5-FU相比,可提高結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡并抑制細(xì)胞增殖。隨后我們利用JZL184干預(yù)具有不同轉(zhuǎn)移潛能的SW480及SW620,發(fā)現(xiàn)JZL184可抑制兩種細(xì)胞系細(xì)胞遷移并且其抑制SW620的效果要強(qiáng)于SW480。最后我們通過(guò)Western blot及Real-time PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)與凋亡相關(guān)BCL的2mRNA及蛋白水平下降,Bax的mRNA及蛋白水平上升,E-cardherin蛋白水平上升,Pro-Caspase8、pro-Caspase3、p-AKT、p-mTOR、Vimentin及Snail蛋白水平下降。 結(jié)論：JZL184可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖及遷移,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,增加腫瘤細(xì)胞對(duì)5-FU敏感性。其機(jī)制可能是JZL184調(diào)控與凋亡有關(guān)的BCL-2/Bax和pro-Caspase8/pro-Caspase3表達(dá)水平從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡,影響EMT相關(guān)蛋白表達(dá)從而抑制腫瘤細(xì)胞遷移能力。并且JZL184可能通過(guò)AKT-mTOR通路調(diào)節(jié)上述分子從而影響腫瘤細(xì)胞凋亡及轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2559377