【摘要】：目的：本實驗主要研究天然單體藥藤黃酸對B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的抗腫瘤效應(yīng)包括對細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響。明確類固醇受體共刺激因子-3(SRC-3)在B細(xì)胞NHL中的致病作用。探討藤黃酸對SRC-3的調(diào)控及其在抗腫瘤過程中的具體機制,為B細(xì)胞NHL靶向治療提供新的思路。方法：采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測臨床淋巴結(jié)組織與小鼠腫瘤樣本中SRC-3的表達水平。MTT比色法檢測藤黃酸干預(yù)后的細(xì)胞增殖活性。流式細(xì)胞學(xué)檢測藤黃酸干預(yù)后細(xì)胞周期分布改變與細(xì)胞凋亡。免疫印跡技術(shù)檢測藤黃酸干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)相關(guān)分子蛋白水平變化。Q-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)相關(guān)分子mRNA水平改變。免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)SRC-3蛋白定位以及半定量改變。慢病毒轉(zhuǎn)染干擾SRC-3的轉(zhuǎn)錄與表達。免疫共沉淀技術(shù)檢測SRC-3與]HDAC1的相互作用以及SRC-3的泛素化修飾。通過BALB/c-nu小鼠右側(cè)皮下接種Daudi細(xì)胞構(gòu)建B細(xì)胞NHL移植瘤小鼠模型。對小鼠進行皮下注射藤黃酸(4 mg/kg/2 d)進行干預(yù)。定期測量小鼠皮下瘤體大小,小鼠體重改變。免疫印跡技術(shù)檢測小鼠瘤體內(nèi)蛋白水平改變。結(jié)果：(1)SRC-3在B細(xì)胞NHL細(xì)胞系以及臨床病人淋巴結(jié)樣本內(nèi)均過度表達。(2)藤黃酸可以抑制B細(xì)胞NHL細(xì)胞系增殖,具有劑量及時間依賴性。(3)藤黃酸可以誘導(dǎo)B細(xì)胞NHL細(xì)胞系G1/S期細(xì)胞周期阻滯。藤黃酸干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)cyclin D3、p-Rb蛋白水平減少,p21、p27蛋白水平增加。(4)藤黃酸可以誘導(dǎo)B細(xì)胞NHL細(xì)胞系細(xì)胞凋亡。其caspase 3裂解激活,cyto C釋放增加,Bcl-2蛋白水平減低。(5)藤黃酸可明顯下調(diào)SRC-3、Bcl-6、c-Myc的蛋白水平,并抑制NF-κBo(6)轉(zhuǎn)染SRC-3干擾慢病毒可以引起細(xì)胞內(nèi)Bcl-2, Bcl-6, c-Myc, cyclin D3的下調(diào),p21和p27的上調(diào),對NF-κB和IκB-a蛋白水平無影響。(7)藤黃酸干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)AKT信號通路無明顯受抑,組蛋白H3在H3K9、H3K27位點發(fā)生去乙�；RC-3干擾后,AKT信號通路受抑,組蛋白未發(fā)生去乙�；�。(8)藤黃酸干預(yù)后,HDAC1、HDAC3、HDAC8蛋白水平無增加,HDAC1與下調(diào)的SRC-3結(jié)合增加,誘導(dǎo)組蛋白去乙酰化。(9)藤黃酸可上調(diào)SRC-3的特異性E3酶組份Cullin3,誘導(dǎo)SRC-3泛素化蛋白酶體途徑降解。(10)構(gòu)建SRC-3干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,與對照組相比,藤黃酸對其細(xì)胞增殖抑制減弱、細(xì)胞周期阻滯減弱、細(xì)胞凋亡減弱、下游基因下調(diào)減弱。(11)在B細(xì)胞NHL移植瘤小鼠模型中,藤黃酸干預(yù)組皮下腫瘤明顯小于對照組。干預(yù)組瘤體內(nèi)SRC-3, Bcl-2, Bcl-6, c-Myc, NF-κB癌蛋白水平較對照組低。結(jié)論：SRC-3的過度表達提示它在B細(xì)胞NHL中具有重要的致病作用。藤黃酸能發(fā)揮較強的抗B細(xì)胞NHL作用,包括細(xì)胞生長抑制、細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡。藤黃酸在B細(xì)胞NHL的抗腫瘤作用與其下調(diào)SRC-3、增強其與HDAC1結(jié)合、誘導(dǎo)H3K9、H3K27去乙酰化、調(diào)控下游基因Bcl-2、Bcl-6、CCND3.MYC密切相關(guān)。
【圖文】：

２．藤黃酸對Ｂ細(xì)胞ＮＨＬ細(xì)胞系X椫車那上戾義戲直穡蓿�，邋０．０�(dān)澹埃�，０．２，，邋０．４，邋０．８，邋１．６，邋３．２邋簽冲６．４邋＾＼１藤粨溽作用�

本文編號：2555204