【摘要】：蛋白酶激活受體-2(Proteinase-actived receptors 2,PAR-2)是位于細(xì)胞膜表面的G蛋白藕聯(lián)受體,該受體受激活后可引起一系列關(guān)于腫瘤生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面的生物學(xué)行為。食管癌是人類(lèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)生機(jī)制目前還不太明確,是當(dāng)前食管癌研究中重要的一個(gè)方面。本課題第一部分探討PAR-2激動(dòng)劑對(duì)人食管鱗癌細(xì)胞系EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA表達(dá)的影響,以及PAR-2 shRNA的負(fù)調(diào)控效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PAR-2激動(dòng)劑SLIGKV能促進(jìn)食管癌細(xì)胞EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白的表達(dá)水平;PAR-2基因表達(dá)下調(diào)的食管癌穩(wěn)定細(xì)胞系PAR-2shRNA EC109中c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白表達(dá)均降低,表明PAR-2shRNA能負(fù)調(diào)控食管癌細(xì)胞EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA的表達(dá)。課題第二部分探討PAR-2激動(dòng)及抑制對(duì)食管癌細(xì)胞MAPK通路ERK1蛋白表達(dá)及活性的影響,以及對(duì)細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]c濃度變化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PAR-2激動(dòng)劑SLIGKV能促進(jìn)食管癌細(xì)胞ERK1 mRNA的表達(dá)水平,對(duì)ERK1總蛋白表達(dá)水平無(wú)影響,但能促進(jìn)p-ERK1蛋白的表達(dá),使ERK1蛋白活性增加;利用PAR-2 shRNA抑制PAR-2能下調(diào)ERK1 mRNA及p-ERK1蛋白的表達(dá),但對(duì)ERK1總蛋白表達(dá)無(wú)影響。另研究表明PAR-2激動(dòng)劑SLIGKV能使食管癌細(xì)胞胞內(nèi)[Ca~(2+)]c濃度增加,抑制PAR-2則能抑制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的胞內(nèi)[Ca~(2+)]c濃度的升高。課題第三部分探討MAPK通路抑制劑對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的影響,以及對(duì)c-fos、CyclinD1、PCNA表達(dá)的影響。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MAPK通路抑制劑PD98059能抑制食管癌細(xì)胞EC-109的增殖,呈濃度依賴(lài)性;經(jīng)PD98059最有效藥物濃度預(yù)處理食管癌細(xì)胞后,其能明顯抑制SLIGKV誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖,使癌細(xì)胞生長(zhǎng)曲線下移;流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制劑PD98059能使G0/G1期食管癌細(xì)胞百分比增加,S期、G2/M期細(xì)胞百分比及細(xì)胞增殖指數(shù)降低。另結(jié)果顯示抑制劑PD98059能下調(diào)c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白的表達(dá)水平。綜上所述,PAR-2激動(dòng)劑能促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞系EC-109 c-fos、CyclinD1、PCNA、p-ERK1的表達(dá),增加ERK1蛋白的活性,使癌細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]c的濃度上升,PAR-2 shRNA則能負(fù)調(diào)控c-fos、CyclinD1、PCNA、p-ERK1的表達(dá),降低ERK1蛋白的活性;MAPK通路抑制劑呈濃度依賴(lài)性的抑制食管癌細(xì)胞EC-109的增殖,且能明顯抑制激動(dòng)劑SLIGKV誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖,使食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)曲線下移,另可增加G0/G1期食管癌細(xì)胞百分比,降低S期、G2/M期細(xì)胞百分比及細(xì)胞增殖指數(shù),下調(diào)c-fos、CyclinD1、PCNA mRNA及蛋白的表達(dá)水平。以上結(jié)果表明,PAR-2可能是通過(guò)ERK1 MAPK通路及Ca~(2+)途徑來(lái)調(diào)控腫瘤增殖相關(guān)分子及細(xì)胞周期相關(guān)分子c-fos、CyclinD1、PCNA的表達(dá),進(jìn)而來(lái)調(diào)節(jié)食管癌細(xì)胞的細(xì)胞周期,通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期來(lái)調(diào)控癌細(xì)胞的增殖,從而促進(jìn)食管癌的發(fā)生。
【圖文】：

14的影響。1：對(duì)照組；2：激動(dòng)劑組；3：反激動(dòng)劑組：4：PAR-2 shRNA 組Fig 1-1 mRNA expressions of PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA after activation andinhibition of PAR-2.1:blank control;2:PAR-2 agonist group;3:PAR-2 anti-agonistgroup; 4:PAR-2 shRNA group1.2.2 Western-blot 法檢測(cè)各組 PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA 蛋白的表達(dá)結(jié)果

醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 一、PAR-2 對(duì)食管鱗癌細(xì)胞 c-fos、CyclinD1、PCNA 表達(dá)的影響-2 PAR-2 激動(dòng)劑對(duì) PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA 蛋白表達(dá)變化的影響。照組；2：激動(dòng)劑組；3：反激動(dòng)劑組：4：PAR-2 shRNA 組1-2 Protein expressions of PAR-2、c-fos、CyclinD1、PCNA after activation andition of PAR-2.1:blank control;2:PAR-2 agonist group;3:PAR-2 anti-agonistp; 4:PAR-2 shRNA group
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：2555141