【摘要】：結(jié)腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，患者術(shù)后腫瘤復發(fā)、浸潤和遠處轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為，是其主要的死亡原因。有研究證實，CDC25B編碼的是一種新的癌基因，過量CDC25B基因表達產(chǎn)物可造成細胞惡性轉(zhuǎn)化和促進腫瘤生長。由于CDC25B與細胞有絲分裂及惡性腫瘤發(fā)生關(guān)系密切，使其已成為腫瘤生物學及抗腫瘤研究領(lǐng)域的研究熱點。有大量研究表明，查爾酮及其衍生物具有良好的抗腫瘤作用，能夠從多靶點、多途徑抑制多種腫瘤細胞的生物學活性。 本課題將結(jié)腸癌的生物學特性研究與查爾酮新藥研究開發(fā)結(jié)合在一起，研究查爾酮化合物是否可以通過細胞周期中關(guān)鍵酶的調(diào)控，控制結(jié)腸癌細胞增殖等生物學行為，進而探究其治療結(jié)腸癌，預防結(jié)腸癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的生物學效應，本研究將對開發(fā)新的抗腫瘤藥物具有重要現(xiàn)實意義和應用價值。 本研究在篩選新合成的系列查爾酮化合物對CDC25B作用基礎(chǔ)上，又進行了對CDC25B抑制活性較好的查爾酮化合物K對人結(jié)腸癌COLO205細胞系生物學行為干預作用的研究，并對查爾酮化合物K抗結(jié)腸癌的作用機制進行了初步探討，為該藥特異性調(diào)控結(jié)腸癌細胞的生物學特性提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 1.基于CDC25B磷酸酶抑制劑的新型查爾酮衍生物的篩選 結(jié)論：在19個2，-羥基-4，-異戊烯氧基系列查爾酮衍生物中，有16個化合物對CDC25B磷酸酶有良好的抑制活性�；衔飇和r對CDC25B磷酸酶抑制活性最好�；衔飇對結(jié)腸癌HCT116、肺癌A549、宮頸癌HeLa細胞均有良好的增殖抑制作用。 2.查爾酮化合物K對人結(jié)腸癌COLO205細胞增殖與凋亡的影響 結(jié)論：查爾酮化合物K可以在體外抑制COLO205細胞的增殖，并誘導其凋亡�？梢宰饔糜贔as/FasL、bcl-2家族，活化Caspase-3，誘導凋亡發(fā)生。 3.查爾酮化合物K對結(jié)腸癌COLO205細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響 結(jié)論：查爾酮化合物K能夠在體外抑制COLO205細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力，能夠下調(diào)MMP-2蛋白表達、上調(diào)TIMP-2蛋白表達而調(diào)控與侵襲轉(zhuǎn)移生物學相關(guān)的信號通路的活性，從而發(fā)揮抑制侵襲轉(zhuǎn)移的作用。 4.查爾酮化合物K對結(jié)腸癌COLO205細胞荷瘤鼠的治療作用 結(jié)論：查爾酮化合物K治療的小鼠可以抑制腫瘤的生長和延長生存期，其抑瘤及延長荷瘤鼠生存期效果與伊立替康基本相同。
【圖文】：

圖 3.1 0.8μmol/L 化合物 K 對四種結(jié)腸癌細胞的抑制率Fig3.1 Inhibition rates of 0.8 μmol/L compound K on four types of colon cancer cells3.2.2 化合物 K 對結(jié)腸癌 COLO205 細胞形態(tài)影響的觀察3.2.2.1 不同濃度化合物 K 對 COLO205 細胞形態(tài)的影響將化合物 K 配制成 0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 三個濃度作為實驗組，性對照組細胞以不含藥的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，作用 12 h 后顯微鏡下觀察各組細形態(tài)變化。結(jié)果如圖 3.2 顯示，陰性對照組細胞生長良好，呈多角形或梭形，，胞呈增殖狀態(tài)。實驗組，當化合物 K 濃度為 0.5μmol/L 時，細胞形態(tài)無明顯變化但細胞增殖速度降低，細胞數(shù)量減少。隨著藥物濃度增加，細胞突起回縮，細呈圓形或橢圓形，細胞分裂增殖速度明顯下降。當藥物濃度達 2μmol/L 時，細壞死脫落明顯，大部分細胞漂浮，貼壁細胞數(shù)量明顯減少。

圖 3.2 不同濃度的化合物 K 對 COLO205 細胞形態(tài)的影響（200×）Fig3.2 TheresultsofthecompoundskatdifferentconcentrationsonCOLO205cellsA：陰性對照組，12h；B-D：0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L,12h3.2.2.2 不同時間化合物 K 對 COLO205 細胞形態(tài)的影響化合物 K 濃度為 2 μmol/L 時，會引起細胞發(fā)生明顯死亡。因此，選用化合物濃度為 1μmol/L，觀察加藥后 6 h、12 h 和 24 h 對 COLO205 細胞的影響。結(jié)果如圖 3.3 顯示，加藥 6 h 后部分細胞變圓，但貼壁、增殖情況與對照組無明顯差別。隨著作用時間延長，加藥 12 h 后，細胞皺縮，貼壁細胞數(shù)目減少，細胞增殖緩慢。藥物作用 24 h 時，大部分細胞壞死脫落，與陰性對照組相比貼壁細胞數(shù)目顯著減少。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

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本文編號：2550178