【摘要】：目的:探討靶向CDC42基因mi R-185對(duì)胃癌細(xì)胞MGC803增殖凋亡的影響及其可能作用機(jī)制。方法:根據(jù)前期基因芯片結(jié)果及生物信息學(xué)軟件對(duì)相關(guān)mi RNA的分析,篩選出在胃癌細(xì)胞與正常胃粘膜上皮細(xì)胞差異表達(dá)的mi RNA,及其可能的靶基因。實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。將mi R-185 mimic和Sh NC質(zhì)粒載體分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至MGC-803細(xì)胞,倒置熒光顯微鏡及實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,細(xì)胞集落形成檢測(cè)細(xì)胞增殖力,流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡。QRT-PCR、Western blot檢測(cè)CDC42的m RNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:利用前期基因芯片結(jié)果及生物信息學(xué)篩選出mi R-185作為研究對(duì)象,且CDC42可能為其靶基因,實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證表明,mi R-185在胃癌細(xì)胞系MGC803、SGC7901較正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1表達(dá)下調(diào)。倒置熒光顯微鏡和q RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-185 mimic的MGC803細(xì)胞中,mi R-185表達(dá)水平顯著升高。CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示,mi R-185-mimic轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖明顯受到抑制;細(xì)胞集落形成結(jié)果顯示:瞬間轉(zhuǎn)染mi R-185 mimic能抑制MGC803細(xì)胞集落形成。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染mi R-185 mimic的MGC803細(xì)胞能促使G1期停滯及促進(jìn)細(xì)胞凋亡,QRT-PCR、Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,瞬間轉(zhuǎn)染mi R-185mimic組較瞬間轉(zhuǎn)染Sh NC組、轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組及空白對(duì)照組CDC42的m RNA及蛋白表達(dá)水平均降低。結(jié)論:1、Mi R-185在胃癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。2、Mi R-185能夠抑制MGC-803細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3、Mi R-185可能通過(guò)靶向調(diào)控CDC42基因抑制胃癌細(xì)胞系MGC803增殖,促進(jìn)其凋亡。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2546719