【摘要】：第一部分人骨肉瘤組織中Micro RNA-223的異常表達(dá)和上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化序列2(ECT2)的變化及其臨床價(jià)值目的:深入探討人骨肉瘤組織micro RNA-223和上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化序列2(ECT2)的表達(dá)及其臨床價(jià)值。方法:臨床上收集新疆自治區(qū)人民醫(yī)院與安徽醫(yī)科大學(xué)68例人骨肉瘤標(biāo)本,用RT-PCR的方法檢測(cè)68例骨肉瘤標(biāo)本中病灶組織(即腫瘤組織)中miRNA-223的濃度變化、腫瘤周邊組織miRNA-223的濃度表達(dá)、非患病組織(即正常組織)中miRNA-223的濃度表達(dá);用免疫組織化學(xué)的方法與RT-PCR兩種試驗(yàn)方法分別進(jìn)行檢測(cè)68例骨肉瘤標(biāo)本中正常組織中ECT2的濃度變化、腫瘤周圍組織中濃度變化、骨肉瘤組織中ECT2的濃度變化。結(jié)果:miRNA-223在68例骨肉瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)較正常組織顯著減低,腫瘤邊緣組織中的表達(dá)介于兩者之間,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ECT2在68例骨肉瘤組織細(xì)胞中的濃度變化,由低到高成遞增表現(xiàn)的排列順序是同一患者來源的正常組織中濃度明顯低于腫瘤周邊組織中的表達(dá)顯著低于骨肉瘤組織中的濃度變化,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:miRNA-223在骨腫瘤組織的表達(dá)明顯下降,而與之相反的是ECT2的異常升高,miRNA-223和ECT2對(duì)骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制有一定作用,miRNA-223與ECT2兩者可能有一定的關(guān)聯(lián)性。第二部分通過體外試驗(yàn),Micro RNA-223對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞病理生理機(jī)制作用的進(jìn)一步探究目的:深入探討micro RNA-223作用于骨肉瘤細(xì)胞對(duì)其病理生理機(jī)制的干擾,其中包括對(duì)細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖與凋亡、細(xì)胞侵襲性的深刻影響。方法:用脂質(zhì)體法將miRNA-223模擬物瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入人骨肉瘤細(xì)胞中,設(shè)立三個(gè)不同測(cè)試組,分別為A組空白對(duì)照組、B組miRNA-223轉(zhuǎn)染組和C組陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染組,并通過高倍顯微鏡設(shè)備仔細(xì)觀察轉(zhuǎn)染效果情況并記錄,RT-PCR分別檢測(cè)空白組、陰性轉(zhuǎn)染組、miRNA-223轉(zhuǎn)染組中miRNA-223和ECT2的變化,再應(yīng)用MTT增倍實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)方法分別進(jìn)行檢測(cè)空白對(duì)照組、陰性轉(zhuǎn)染組和miRNA-223轉(zhuǎn)染組內(nèi)細(xì)胞的擴(kuò)增變化情況,并使用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),最后應(yīng)用細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的侵襲力是否不同。結(jié)果:Mi RNA-223轉(zhuǎn)染組中miRNA-223的濃度顯著增高,而空白試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組無明顯變化。與之相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)染組ECT2的濃度顯著降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Mi RNA223轉(zhuǎn)染組中骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)過程的各個(gè)環(huán)節(jié)均受到明顯的改變,表現(xiàn)為增殖受抑,凋亡加速,腫瘤細(xì)胞的侵襲能力大幅度減弱,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:Mi RNA-223對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的增殖、侵襲有顯著的阻礙作用,加速了腫瘤細(xì)胞的凋亡,同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)隨著miRNA-223的表達(dá)升高ECT2有明顯降低受抑制的趨勢(shì)。第三部分配對(duì)異常表達(dá)的Micro RNA-223和ECT2,不同表達(dá)組合對(duì)骨肉瘤預(yù)后的相關(guān)性探討目的:探討骨肉瘤中micro RNA-223/ECT2組合異常表達(dá)對(duì)骨肉瘤預(yù)后的干擾。方法:2006年至2009年新疆自治區(qū)人民醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學(xué)一附院確診的68例骨肉瘤患者。所有患者均給與術(shù)前新輔助化療方案,化療的藥物包括甲氨蝶呤、多柔比星、順鉑、異環(huán)玲酰胺,治療的給藥途徑是靜脈注射。正規(guī)化療周期完成后采取擇期手術(shù)切除腫瘤病灶并行病理學(xué)檢查確診。病檢部分必須包括骨肉瘤腫瘤組織、腫瘤周圍組織、和正常的周圍組織標(biāo)本。再次通過完成實(shí)驗(yàn)一步驟并得到相關(guān)結(jié)果,我們以miR-223,ECT2的數(shù)值范圍得出各自中位數(shù),分別miR-223為2.50,ECT2為4.79.將。將miR-223,ECT2分為低于中位數(shù)表達(dá)和高于中位數(shù)表達(dá),低于2.50的miR-223為低表達(dá)組共有38例,高表達(dá)組30例;低濃度的ECT2表達(dá)組共有32例,高濃度組36例。在此基礎(chǔ)上,根據(jù)68個(gè)病人的結(jié)果,將他們分為四組10例miR-223低/ECT2低,28例miR-223低/ECT2高,22例miR-223高/ECT2低,8例miR-223高/ECT2高組。術(shù)后對(duì)患者進(jìn)行詳細(xì)的隨訪計(jì)劃,術(shù)后化療的隨訪分為2個(gè)階段,以術(shù)后三年為分界線,三年之內(nèi)的情況每3個(gè)月化療一次,每半年進(jìn)行一次全身腫瘤血復(fù)查,包括血液系統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物檢查及全身PET-CT每年一次。術(shù)后3年之后根據(jù)病人情況每4-5個(gè)月進(jìn)行一次聯(lián)合化療,必須完成PET-CT檢查或全身多部位CT檢查,血液系統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物的復(fù)查及手術(shù)部位核磁的檢查必不可少并詳細(xì)記錄情況。根據(jù)隨訪結(jié)果治愈、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移進(jìn)行記錄。結(jié)果:隨訪5.8-36.3個(gè)月,平均29.6個(gè)月,28例出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),15例隨訪中死亡,3年的總生存率73.53%,3年無病生存率58.82.我們發(fā)現(xiàn)miR-223低表達(dá)/ECT2低表達(dá)組、miR-223低表達(dá)/ECT2高表達(dá)組、miR-223高表達(dá)/ECT2低表達(dá)組、miR-223高表達(dá)/ECT2高表達(dá)組4種不同情況的患者預(yù)后差異顯著結(jié)論:miR-223/ECT2組合軸異常表達(dá)與人骨肉瘤侵襲性有顯著相關(guān),對(duì)于人骨肉瘤的預(yù)后有一定相關(guān),同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)miR-223低表達(dá)/ECT2高表達(dá)組預(yù)后極差。該組病理學(xué)分型惡性程度高、對(duì)于化療的反應(yīng)不敏感、術(shù)后復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移率較其他各組明顯升高。
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文1. RT-PCR檢測(cè)骨肉瘤組織,腫瘤邊緣組織,正常組織中MiRNA-223的變化我們對(duì)68例骨肉瘤組織,腫瘤邊緣組織,正常組織通過實(shí)時(shí)定量RT-P分別檢測(cè)miRNA-223的表達(dá)，以正常組織中miR223含量為一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)單位瘤周圍組織中miR223含量顯著下降接近一半，在腫瘤組織內(nèi)miR233含量單位的1/4。根據(jù)檢查結(jié)果我們可以判定miR223與骨肉瘤腫瘤呈負(fù)相關(guān)(P1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2.ECT2在各組中的濃度表達(dá)，骨肉瘤中最高（P<0.05）討論：骨肉瘤與軟骨肉瘤、纖維肉瘤均是來源于間葉組織，但其惡性程度葉組織所涉及的惡性腫瘤中首屈一指，起源于骨母細(xì)胞，文獻(xiàn)報(bào)道骨肉特點(diǎn)在電子顯微鏡下表現(xiàn)為梭形基質(zhì)細(xì)胞的大量異生，病理生理機(jī)制特高，極度惡性，在發(fā)現(xiàn)初期即有可能出現(xiàn)血性轉(zhuǎn)移或者其他部位的轉(zhuǎn)移最終結(jié)局是災(zāi)難性的[1-3]，在今年的文獻(xiàn)報(bào)告中，人類骨骼系統(tǒng)原發(fā)性惡年不斷增加，其中骨肉瘤的增長(zhǎng)居于領(lǐng)先地位，是發(fā)病最多死亡率最高高的骨腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)約為1.02／10萬發(fā)病率[4]。在青少年中，，尤其是學(xué)齡適齡中小學(xué)學(xué)生中骨腫瘤凸顯，流行病學(xué)調(diào)查高于其他不同年齡組[5.6]。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2545820