【摘要】：第一部分人骨肉瘤組織中Micro RNA-223的異常表達和上皮細胞轉(zhuǎn)化序列2(ECT2)的變化及其臨床價值目的:深入探討人骨肉瘤組織micro RNA-223和上皮細胞轉(zhuǎn)化序列2(ECT2)的表達及其臨床價值。方法:臨床上收集新疆自治區(qū)人民醫(yī)院與安徽醫(yī)科大學68例人骨肉瘤標本,用RT-PCR的方法檢測68例骨肉瘤標本中病灶組織(即腫瘤組織)中miRNA-223的濃度變化、腫瘤周邊組織miRNA-223的濃度表達、非患病組織(即正常組織)中miRNA-223的濃度表達;用免疫組織化學的方法與RT-PCR兩種試驗方法分別進行檢測68例骨肉瘤標本中正常組織中ECT2的濃度變化、腫瘤周圍組織中濃度變化、骨肉瘤組織中ECT2的濃度變化。結(jié)果:miRNA-223在68例骨肉瘤組織標本中的表達較正常組織顯著減低,腫瘤邊緣組織中的表達介于兩者之間,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。ECT2在68例骨肉瘤組織細胞中的濃度變化,由低到高成遞增表現(xiàn)的排列順序是同一患者來源的正常組織中濃度明顯低于腫瘤周邊組織中的表達顯著低于骨肉瘤組織中的濃度變化,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:miRNA-223在骨腫瘤組織的表達明顯下降,而與之相反的是ECT2的異常升高,miRNA-223和ECT2對骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展機制有一定作用,miRNA-223與ECT2兩者可能有一定的關聯(lián)性。第二部分通過體外試驗,Micro RNA-223對人骨肉瘤細胞病理生理機制作用的進一步探究目的:深入探討micro RNA-223作用于骨肉瘤細胞對其病理生理機制的干擾,其中包括對細胞周期、細胞增殖與凋亡、細胞侵襲性的深刻影響。方法:用脂質(zhì)體法將miRNA-223模擬物瞬時轉(zhuǎn)染入人骨肉瘤細胞中,設立三個不同測試組,分別為A組空白對照組、B組miRNA-223轉(zhuǎn)染組和C組陰性對照轉(zhuǎn)染組,并通過高倍顯微鏡設備仔細觀察轉(zhuǎn)染效果情況并記錄,RT-PCR分別檢測空白組、陰性轉(zhuǎn)染組、miRNA-223轉(zhuǎn)染組中miRNA-223和ECT2的變化,再應用MTT增倍實驗的試驗方法分別進行檢測空白對照組、陰性轉(zhuǎn)染組和miRNA-223轉(zhuǎn)染組內(nèi)細胞的擴增變化情況,并使用流式細胞儀分別檢測3個實驗組細胞生長的狀態(tài),最后應用細胞侵襲實驗分別檢測3個實驗組細胞的侵襲力是否不同。結(jié)果:Mi RNA-223轉(zhuǎn)染組中miRNA-223的濃度顯著增高,而空白試驗組與陰性對照組無明顯變化。與之相對應的轉(zhuǎn)染組ECT2的濃度顯著降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05);Mi RNA223轉(zhuǎn)染組中骨肉瘤細胞生長過程的各個環(huán)節(jié)均受到明顯的改變,表現(xiàn)為增殖受抑,凋亡加速,腫瘤細胞的侵襲能力大幅度減弱,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:Mi RNA-223對人骨肉瘤細胞的增殖、侵襲有顯著的阻礙作用,加速了腫瘤細胞的凋亡,同時我們發(fā)現(xiàn)隨著miRNA-223的表達升高ECT2有明顯降低受抑制的趨勢。第三部分配對異常表達的Micro RNA-223和ECT2,不同表達組合對骨肉瘤預后的相關性探討目的:探討骨肉瘤中micro RNA-223/ECT2組合異常表達對骨肉瘤預后的干擾。方法:2006年至2009年新疆自治區(qū)人民醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學一附院確診的68例骨肉瘤患者。所有患者均給與術前新輔助化療方案,化療的藥物包括甲氨蝶呤、多柔比星、順鉑、異環(huán)玲酰胺,治療的給藥途徑是靜脈注射。正規(guī)化療周期完成后采取擇期手術切除腫瘤病灶并行病理學檢查確診。病檢部分必須包括骨肉瘤腫瘤組織、腫瘤周圍組織、和正常的周圍組織標本。再次通過完成實驗一步驟并得到相關結(jié)果,我們以miR-223,ECT2的數(shù)值范圍得出各自中位數(shù),分別miR-223為2.50,ECT2為4.79.將。將miR-223,ECT2分為低于中位數(shù)表達和高于中位數(shù)表達,低于2.50的miR-223為低表達組共有38例,高表達組30例;低濃度的ECT2表達組共有32例,高濃度組36例。在此基礎上,根據(jù)68個病人的結(jié)果,將他們分為四組10例miR-223低/ECT2低,28例miR-223低/ECT2高,22例miR-223高/ECT2低,8例miR-223高/ECT2高組。術后對患者進行詳細的隨訪計劃,術后化療的隨訪分為2個階段,以術后三年為分界線,三年之內(nèi)的情況每3個月化療一次,每半年進行一次全身腫瘤血復查,包括血液系統(tǒng)腫瘤標志物檢查及全身PET-CT每年一次。術后3年之后根據(jù)病人情況每4-5個月進行一次聯(lián)合化療,必須完成PET-CT檢查或全身多部位CT檢查,血液系統(tǒng)腫瘤標志物的復查及手術部位核磁的檢查必不可少并詳細記錄情況。根據(jù)隨訪結(jié)果治愈、復發(fā)、轉(zhuǎn)移進行記錄。結(jié)果:隨訪5.8-36.3個月,平均29.6個月,28例出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復發(fā),15例隨訪中死亡,3年的總生存率73.53%,3年無病生存率58.82.我們發(fā)現(xiàn)miR-223低表達/ECT2低表達組、miR-223低表達/ECT2高表達組、miR-223高表達/ECT2低表達組、miR-223高表達/ECT2高表達組4種不同情況的患者預后差異顯著結(jié)論:miR-223/ECT2組合軸異常表達與人骨肉瘤侵襲性有顯著相關,對于人骨肉瘤的預后有一定相關,同時我們發(fā)現(xiàn)miR-223低表達/ECT2高表達組預后極差。該組病理學分型惡性程度高、對于化療的反應不敏感、術后復發(fā)率及轉(zhuǎn)移率較其他各組明顯升高。
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學博士學位論文1. RT-PCR檢測骨肉瘤組織,腫瘤邊緣組織,正常組織中MiRNA-223的變化我們對68例骨肉瘤組織,腫瘤邊緣組織,正常組織通過實時定量RT-P分別檢測miRNA-223的表達，以正常組織中miR223含量為一個標準單位瘤周圍組織中miR223含量顯著下降接近一半，在腫瘤組織內(nèi)miR233含量單位的1/4。根據(jù)檢查結(jié)果我們可以判定miR223與骨肉瘤腫瘤呈負相關(P1)實驗結(jié)果

圖2.ECT2在各組中的濃度表達，骨肉瘤中最高（P<0.05）討論：骨肉瘤與軟骨肉瘤、纖維肉瘤均是來源于間葉組織，但其惡性程度葉組織所涉及的惡性腫瘤中首屈一指，起源于骨母細胞，文獻報道骨肉特點在電子顯微鏡下表現(xiàn)為梭形基質(zhì)細胞的大量異生，病理生理機制特高，極度惡性，在發(fā)現(xiàn)初期即有可能出現(xiàn)血性轉(zhuǎn)移或者其他部位的轉(zhuǎn)移最終結(jié)局是災難性的[1-3]，在今年的文獻報告中，人類骨骼系統(tǒng)原發(fā)性惡年不斷增加，其中骨肉瘤的增長居于領先地位，是發(fā)病最多死亡率最高高的骨腫瘤，據(jù)統(tǒng)計約為1.02／10萬發(fā)病率[4]。在青少年中，，尤其是學齡適齡中小學學生中骨腫瘤凸顯，流行病學調(diào)查高于其他不同年齡組[5.6]。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1

【參考文獻】

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本文編號：2545820