【摘要】：目的:肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一,絕大多數(shù)肝癌患者有肝纖維化和肝硬化病史,肝纖維化晚期發(fā)展成肝硬化,其中相當(dāng)一部分肝硬化最終發(fā)展為肝癌。二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN)是一種強烈的化學(xué)致癌劑,對肝臟有著明顯的親和力,整個誘癌過程大致經(jīng)歷了肝炎、肝纖維化-硬化至肝癌形成,與人類肝癌的發(fā)生過程十分相似。本實驗采用間斷口服DEN,構(gòu)建大鼠誘發(fā)性肝癌模型。上皮細(xì)胞間質(zhì)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)指上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)細(xì)胞表型的動態(tài)生物學(xué)過程,主要特征以上皮細(xì)胞標(biāo)記物(E-cadherin等)表達(dá)下降,同時間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物(vimentin等)的過度表達(dá)等,其在胚胎發(fā)育、炎癥、器官纖維化及腫瘤發(fā)生過程中具有重要作用。Micro RNA(miRNA)作為新型基因調(diào)節(jié)劑,它在腫瘤的形成過程中發(fā)揮著重要作用,同時有研究發(fā)現(xiàn)miRNA可以調(diào)節(jié)EMT。miR-122在肝臟發(fā)育過程中呈持續(xù)性表達(dá)狀態(tài),一旦表達(dá)出現(xiàn)異�？赡芤鹨幌盗懈闻K疾病。研究表明,miR-122表達(dá)下調(diào)參與肝癌的發(fā)生,提示其可能起到抑癌基因樣作用。觀察大鼠肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中miR-122的表達(dá)變化,通過分析miR-122與TGF-β1、E-cadherin的相關(guān)性,探討miR-122在肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程的意義。方法:1.動物來源:體重180~200g,清潔級雄性SD大鼠。2.肝癌模型建立:55只大鼠按照隨機化原則,選擇40只作為實驗組,15只作為對照組。實驗組自由飲用0.01%DEN溶液6周,停藥2周,期間正常飲水,繼續(xù)喂藥6周后停止用藥,接著正常飲水2周。對照組自由飲水。3.在處理后第4、8、12及16周末稱得兩組大鼠體重及肝臟質(zhì)量,計算肝臟指數(shù)。觀察肝臟大體形態(tài)及病理學(xué)變化。4.采用q RT-PCR技術(shù),檢測兩組大鼠肝組織miR-122及TGF-β1在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)差異。5.采用western-blot技術(shù),檢測兩組大鼠肝組織TGF-β1與E-cadherin在蛋白水平的表達(dá)差異。6.數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對各數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1.實驗組大鼠第4周末表現(xiàn)為肝臟炎癥;第8周末表現(xiàn)為肝臟纖維化-硬化;第12周末表現(xiàn)為肝細(xì)胞不典型增生;第16周末形成肝細(xì)胞癌。實驗組大鼠16周末成癌率達(dá)100%(15/15),總體死亡率為17.5%(7/40)。對照組無死亡。2.實驗過程中,對照組大鼠體重變化呈直線上升,實驗組體重增長緩慢,且各周期大鼠體重明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組大鼠各個時期的肝臟指數(shù)高于對照組大鼠,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.q RT-PCR顯示實驗組大鼠肝細(xì)胞miR-122呈逐漸下降趨勢,各周期與對照組有顯著差異(P0.05);第4周與第8周實驗組大鼠肝組織中的miR-122比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.1090.05)。實驗組TGF-β1m RNA表達(dá)呈逐漸上升趨勢,第4周實驗組與對照組大鼠TGF-β1m RNA比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.1780.05)。其余各周期與對照組有顯著差異(P0.05);第4周與第8周實驗組大鼠TGF-β1m RNA比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.2330.05)。4.western-blot顯示實驗組大鼠肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,TGF-β1蛋白表達(dá)呈逐漸上升趨勢,第4周實驗組大鼠與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0540.05)。其余各周期與對照組有顯著差異(P0.05);第4周與第8周實驗組大鼠肝組織TGF-β1蛋白比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.1550.05)。實驗組E-cadherin蛋白的表達(dá)量呈逐漸下降趨勢,第4周與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.3100.05)。其余各個周期實驗組大鼠與對照組有顯著差異(P0.05)。5.Pearson相關(guān)性分析顯示,miR-122與TGF-β1m RNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=㧟0.842,P0.001),與E-cadherin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.808,P0.001);TGF-β1與E-cadherin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=㧟0.820,P0.001)。結(jié)論:1.采用口服DEN建立誘發(fā)性肝癌模型是一種操作簡單、誘癌率高及死亡率低的造模方式。2.大鼠肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中miR-122表達(dá)逐漸下降,提示miR-122與肝癌發(fā)生發(fā)展可能有著密切關(guān)系。3.miR-122可能通過TGF-β1調(diào)節(jié)EMT過程,從而對肝癌的發(fā)生發(fā)展起到抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2544733