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ERp29與肺癌吉西他濱化療敏感性的相關(guān)性及其機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2019-09-25 11:30
【摘要】:背景和目的肺癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29(endoplasmic reticulumprotein29,ERp29)定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),在多種腫瘤中表達(dá)異常。ERp29表達(dá)與腫瘤分化程度、復(fù)發(fā)及預(yù)后相關(guān)。但是ERp29在肺癌的作用鮮有報(bào)道。有報(bào)道顯示ERp29與腫瘤細(xì)胞放化療敏感性相關(guān)。蛋白組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)吉西他濱耐藥的胰腺癌細(xì)胞表達(dá)ERp29前體明顯增高。因此推測(cè)ERp29可能與吉西他濱化療敏感性相關(guān)。本研究旨在檢測(cè)肺癌患者ERp29的表達(dá),分析ERp29表達(dá)與肺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性,觀察ERp29基因沉默對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、遷移和吉西他濱化療敏感性的影響,并探討其可能的機(jī)制。方法Western blot方法檢測(cè)20例肺癌標(biāo)本及其匹配的癌旁組織ERp29的表達(dá)。免疫組化檢測(cè)75例肺腺癌患者ERp29的表達(dá),分析ERp29表達(dá)與肺腺癌患者臨床病理特征(包括年齡、性別、T分期、TNM分期、腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)的相關(guān)性。應(yīng)用siRNA方法下調(diào)兩種肺腺癌細(xì)胞株(A549和SPC-A1細(xì)胞)ERp29的表達(dá)。采用CCK-8法,分析ERp29 siRNA對(duì)A549和SPC-A1細(xì)胞體外增殖的影響。劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ERp29 siRNA對(duì)肺癌細(xì)胞遷移的影響。不同濃度的吉西他濱作用A549和SPC-A1細(xì)胞,采用SPSS 13.0軟件計(jì)算吉西他濱對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)。CCK-8法檢測(cè)ERp29 siRNA對(duì)肺癌細(xì)胞吉西他濱化療敏感性的影響。不同濃度的吉西他濱作用A549和SPC-A1細(xì)胞,Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞ERp29表達(dá)。檢測(cè)吉西他濱聯(lián)合ERp29 siRNA對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響。Western blot方法檢測(cè)吉西他濱聯(lián)合ERp29 siRNA對(duì)細(xì)胞HSP27表達(dá)的影響。CCK-8法檢測(cè)HSP27 siRNA對(duì)肺癌細(xì)胞吉西他濱化療敏感性的影響。結(jié)果Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示20例患者肺癌組織ERp29表達(dá)明顯高于癌旁組織,P0.05。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示75例患者肺腺癌組織ERp29高表達(dá)率為73%(55/75),癌旁組織為1%(1/75),兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=83.093,P0.01)。ERp29表達(dá)與肺腺癌患者年齡、性別、T分期、TNM分期、腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯相關(guān)(P0.05)。與對(duì)照siRNA相比,ERp29 siRNA明顯下調(diào)A549和SPC-A1細(xì)胞ERp29蛋白表達(dá)。ERp29基因沉默對(duì)A549和SPC-A1細(xì)胞體外增殖無(wú)明顯影響。劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)顯示ERp29基因沉默明顯抑制肺癌細(xì)胞遷移。吉西他濱對(duì)A549和SPC-A1細(xì)胞的IC50分別是0.51±0.06μM和4.29±0.20μM。轉(zhuǎn)染ERp29siRNA后,吉西他濱對(duì)A549和SPC-A1細(xì)胞增殖的抑制作用增強(qiáng),細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性增加。不同濃度的吉西他濱作用肺癌細(xì)胞后,細(xì)胞ERp29表達(dá)增加。20μM吉西他濱作用A549細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率由6.43±0.55%增加至20.9±2.83%,吉西他濱和ERp29siRNA聯(lián)合應(yīng)用將細(xì)胞凋亡率提高至30.8±1.41%。50μM吉西他濱作用SPC-A1細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率由6.1±1.12%增加至19.82±1.76%,吉西他濱和ERp29siRNA聯(lián)合應(yīng)用將細(xì)胞凋亡率提高至27.53±1.11%。吉西他濱聯(lián)合ERp29 siRNA協(xié)同增加肺癌細(xì)胞磷酸化HSP27與總HSP27比值。轉(zhuǎn)染HSP27 siRNA后,肺癌細(xì)胞HSP27表達(dá)明顯下調(diào),吉西他濱對(duì)細(xì)胞的抗腫瘤作用減弱,細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性降低。結(jié)論肺癌組織ERp29表達(dá)明顯高于癌旁組織。ERp29基因沉默明顯增加吉西他濱的細(xì)胞增殖抑制率,增加吉西他濱誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,提高肺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性。ERp29可能通過調(diào)節(jié)磷酸化HSP27,影響肺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性。ERp29有望成為治療肺癌的新靶點(diǎn)。
【圖文】:

免疫組化,肺腺癌,免疫組化檢測(cè),患者


逡逑2.2.2肺腺癌患者ERp29表達(dá)逡逑如圖1-2所示,ERp29陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿。肺癌紐織ERp巧高表達(dá)率為逡逑73%(55/75),癌旁組織僅為1%(1/75),,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(/=83.093,尸<0.01)。逡逑私;?八哪’’節(jié)產(chǎn)二4逡逑一-'游、邐一-之逡逑'.冷.邐>逡逑囼邐公....今采’邐4邐■■逡逑、妥-\邐t邋."’I邐}B處多*逡逑j邋'邋2P0iim邐I邋。邋i邋邋1G0um邐j:;,'.

本文編號(hào):2541415

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