發(fā)布時(shí)間：2019-09-16 10:35

【摘要】：背景乳腺癌擴(kuò)增性抗原1(Amplified in Breast cancer 1,AIB1)是一種由anzick SL等于1997年在尋找乳腺癌中頻繁擴(kuò)增的基因時(shí)發(fā)現(xiàn)的基因,該基因?qū)儆趐160類固醇受體轉(zhuǎn)錄共激活因子(steroid receptor coactivator,SRC)家族的成員。既往的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),AIB1與其轉(zhuǎn)錄因子共同組成復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,不僅在機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝以及內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等發(fā)面發(fā)揮著重要的作用,而且還參與了多種腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移等過程。EMT即上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT),是指上皮細(xì)胞在特定的生理和病理情況下經(jīng)過一系列細(xì)胞表型或功能的改變,轉(zhuǎn)變?yōu)殚g質(zhì)細(xì)胞的現(xiàn)象,現(xiàn)在已經(jīng)有研究結(jié)果顯示,在生理情況下胚胎和器官的發(fā)育、創(chuàng)傷的修復(fù)、器官組織的纖維化都涉及到了細(xì)胞的EMT過程,在病理?xiàng)l件下腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等過程也包含有細(xì)胞的EMT過程,是腫瘤發(fā)生浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。本實(shí)驗(yàn)旨在檢測(cè)并分析AIBl、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白在人原發(fā)性肝癌組織及癌旁組織的表達(dá)水平,探討其和人原發(fā)性肝癌的臨床病理特征之間的關(guān)系;并用RNA干擾技術(shù)沉默肝癌細(xì)胞株HepG2中AIB1基因的表達(dá)及其對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白分子表達(dá)的水平和細(xì)胞侵襲力的影響。目的本研究主要通過檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者肝癌組織及其癌旁組織中AIBl、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白分子的表達(dá)水平,來進(jìn)一步分析AIBl、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白分子在人原發(fā)性肝癌組織的表達(dá)水平及其與臨床病理特征之間的關(guān)系;采用RNA干擾技術(shù)沉默肝癌細(xì)胞株HepG2中AIB1的表達(dá)及其對(duì)EMT標(biāo)記蛋白分子表達(dá)的水平和細(xì)胞侵襲力的影響。方法采用免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)在85例原發(fā)性肝癌患者的肝癌組織及其癌旁組織AIBl、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白分子緊密連接蛋白(ZO-1)、上皮樣鈣黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和神經(jīng)性鈣黏蛋白(N-cadherin)的表達(dá)水平,分析AIBl、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記分子在人原發(fā)性肝癌組織的表達(dá)水平及其和臨床病理特征之間相關(guān)性。把以AIBl基因?yàn)榘悬c(diǎn)的pLenti6-AIBl RNAi慢病毒載體感染肝癌細(xì)胞HepG2株后,檢測(cè)肝癌細(xì)胞株HepG2中的AIBl基因的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白分子的表達(dá)水平,并用Transwell小室實(shí)驗(yàn)分析其細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果原發(fā)性肝癌組織中AIBl、Vimentin蛋白的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織,E-cadherin蛋白的表達(dá)水平低于癌旁正常組織。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)性肝癌腫瘤組織中,AIBl高表達(dá)的發(fā)生率和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AIB1高表達(dá)的發(fā)生率相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(63%vs43%,P0.05),Vimentin蛋白高表達(dá)的發(fā)生率顯著高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Vimentin蛋白高表達(dá)的發(fā)生率(66%vs19%,P0.05),E-cadherin蛋白低表達(dá)的發(fā)生率顯著高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的E-cadherin蛋白低表達(dá)的發(fā)生率(69%vs43%,P0.05)。在原發(fā)性肝癌組織中AIBl蛋白的表達(dá)水平與E-cadherin蛋白的表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.435,P0.05),而與Vimentin蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.358,P0.05)。用pLenti6-AIBl RNAi慢病毒載體去感染肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞后,檢測(cè)細(xì)胞中AIBl mRNA的表達(dá)水平明顯下降,HepG2細(xì)胞的侵襲力顯著下降,E-cadherin蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào),Vimentin蛋白表達(dá)水平顯著下降。結(jié)論AIB1在肝癌組織中高表達(dá),且與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。在肝癌細(xì)胞株HepG2中,沉默AIBl基因的表達(dá),可使肝癌細(xì)胞HepG2中E-cadherin表達(dá)水平增加,使Vimentin表達(dá)水平下降,并可以導(dǎo)致細(xì)胞侵襲能力下降,提示AIB1基因可能通過誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的EMT過程來促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移。
【圖文】：

圖 2 實(shí)時(shí) PCR 檢測(cè) HepG2 細(xì)胞感染慢病毒 pLenti6-A照組比較，P<0.05)圖 3 蛋白印跡檢測(cè) HepG2 細(xì)胞感染慢病毒 pLenti6-AP<0.05)4.4AIB1 基因?qū)?EMT 標(biāo)記分子表達(dá)的影響蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，沉默肝癌細(xì)胞株

圖 3 蛋白印跡檢測(cè) HepG2 細(xì)胞感染慢病毒 pLenti6-AIP<0.05)4.4AIB1 基因?qū)?EMT 標(biāo)記分子表達(dá)的影響蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，，沉默肝癌細(xì)胞株組 E-cadherin 蛋白的表達(dá)水平與空白對(duì)照、陰性的是，RNA 干擾組的 Vimentin 蛋白的表達(dá)和空低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，見圖 4。此基因的表達(dá)后可以升高肝癌細(xì)胞株 HepG2 細(xì)胞降低 Vimentin 蛋白的表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2536140