發(fā)布時間：2019-08-07 13:56

【摘要】：第一部分ATRA誘導(dǎo)Sp100蛋白的表達(dá)及其對白血病NB4細(xì)胞增殖的影響目的:探討Sp100在全反式維甲酸(ATRA)處理NB4細(xì)胞過程中的表達(dá)及其對NB4細(xì)胞增殖和周期的影響。方法:1μM的ATRA處理NB4細(xì)胞后,Q-PCR檢測Sp100 m RNA的表達(dá),Western blot檢測Sp100蛋白的表達(dá),間接免疫熒光(IF)檢測Sp100定位的變化;采用慢病毒RNA干擾的方法干擾Sp100的表達(dá)后,觀察Sp100-sh RNA對NB4細(xì)胞增殖和周期的影響,Western blot檢測Sp100蛋白表達(dá),CCK-8檢測NB4細(xì)胞的增殖,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測NB4細(xì)胞的周期。結(jié)果:ATRA能明顯促進(jìn)NB4細(xì)胞中Sp100 m RNA水平和蛋白水平的表達(dá),并將Sp100由彌散的小點狀轉(zhuǎn)變?yōu)檩^大的斑塊狀;成功構(gòu)建Sp100基因RNA干擾的穩(wěn)定細(xì)胞株,感染Sp100-sh RNA的NB4細(xì)胞增殖活力明顯高于未感染組和病毒空載組,并使G2/M期的細(xì)胞增多。結(jié)論:ATRA促進(jìn)NB4細(xì)胞中Sp100的表達(dá),Sp100可能參與NB4細(xì)胞增殖活力的調(diào)節(jié)。第二部分LG268對NB4細(xì)胞增殖和凋亡的影響目的:研究LG268對NB4細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法:LG268作用NB4細(xì)胞24 h或48 h,CCK-8實驗和細(xì)胞集落形成實驗檢測細(xì)胞的增殖;FCM檢測NB4細(xì)胞的凋亡和周期;Western blot檢測Survivin、PARP、c-Myc,、cyclin D1、ERK、p-ERK、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:LG268以劑量依賴的方式抑制NB4細(xì)胞的增殖,以時間依賴的方式促進(jìn)NB4細(xì)胞的凋亡;LG268可明顯降低細(xì)胞的集落形成能力,將NB4細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期;此外,LG268能夠下調(diào)Survivin、c-Myc和cyclin D1蛋白的表達(dá),并使PARP的活化增多;LG268促進(jìn)p38 MAPK的磷酸化而下調(diào)ERK的磷酸化。結(jié)論:LG268可抑制NB4細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡。
【圖文】：

圖 1.1ATRA 對 NB4 細(xì)胞 Sp100 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響Fig 1.1 Effects of ATRA on the expression of Sp100 mRNA and protein in NB4 cellsA. the expression of Sp100 mRNA was increased with ATRA treatment than that with DMSO treatment;B. the expression of Sp100 protein was increased with ATRA treatment than that with DMSO treatment;C. the relative expression of Sp100 protein;*P<0.052.2 ATRA 對 NB4 細(xì)胞 Sp100 蛋白定位的影響間接免疫熒光實驗顯示，，與 DMSO 處理（control）相比，1 μM 的 ATRA 處理NB4 細(xì)胞 3 d 后，Sp100 由彌散的小點狀變?yōu)檩^大的斑塊狀（圖 1.2）。

圖 1.1ATRA 對 NB4 細(xì)胞 Sp100 mRNA 和蛋白表達(dá)的影響ffects of ATRA on the expression of Sp100 mRNA and proteinsion of Sp100 mRNA was increased with ATRA treatment than that with DMSO treatmsion of Sp100 protein was increased with ATRA treatment than that with DMSO treatme expression of Sp100 protein;RA 對 NB4 細(xì)胞 Sp100 蛋白定位的影響疫熒光實驗顯示，與 DMSO 處理（control）相比，1 μM 的 3 d 后，Sp100 由彌散的小點狀變?yōu)檩^大的斑塊狀（圖 1.2）。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2523999