發(fā)布時(shí)間：2019-07-24 09:23

【摘要】：目的：證明DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型構(gòu)建成功,同時(shí)證明PIK3R3在潰瘍性結(jié)腸炎中發(fā)揮重要功能。方法：通過(guò)DSS誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型,檢測(cè)臨床指標(biāo)、病理改變及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)情況,同時(shí)檢測(cè)PIK3R3在模型中的表達(dá)水平。運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)潰瘍性結(jié)腸炎臨床標(biāo)本中PIK3R3的表達(dá)情況。結(jié)果：DSS誘導(dǎo)的模型小鼠體重下降,結(jié)腸縮短；結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)破壞,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增多；PIK3R3在DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸及潰瘍性結(jié)腸炎臨床組織標(biāo)本中呈現(xiàn)高表達(dá)。結(jié)論：DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型構(gòu)建成功。PIK3R3在DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型及臨床標(biāo)本中表達(dá)水平升高,PIK3R3在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中發(fā)揮重要功能。目的：通過(guò)DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,評(píng)估TAT-N15在潰瘍性結(jié)腸炎中的治療作用,并與陰性對(duì)照(對(duì)照多肽)及陽(yáng)性對(duì)照(潑尼松龍)做對(duì)比。方法：檢測(cè)各組小鼠體重情況,結(jié)腸長(zhǎng)度,疾病活動(dòng)指數(shù)；HE染色評(píng)估各組的病理改變并定量評(píng)分；免疫組化Ki-67染色評(píng)估上皮細(xì)胞的損傷情況；運(yùn)用real-time PCR、 ELISA及流式CBA法評(píng)估相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果：TAT-N 15能抑制模型中小鼠體重的下降,降低疾病活動(dòng)指數(shù),緩解小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的縮短;同時(shí)能改善病理變化和炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn);降低Ki-67指數(shù)：減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。結(jié)論：TAT-N 15能有效的降低疾病的臨床指標(biāo),改善疾病的病理變化,促進(jìn)炎癥的盡快恢復(fù),減少促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。目的：證明TAT-N15能有效的抑制潰瘍性結(jié)腸炎向炎癥相關(guān)性結(jié)直腸腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。方法：通過(guò)構(gòu)建AOM/DSS誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)性結(jié)直腸腫瘤模型,給予TAT-N15藥物治療,觀察癌前病變,最終生成腫瘤情況(個(gè)數(shù)、大小、分布及負(fù)荷等),臨床指標(biāo)(潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率,疾病活動(dòng)指數(shù),結(jié)腸長(zhǎng)度),病理改變,腫瘤的增殖和凋亡(Ki-67及TUNEL),以及細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果：TAT-N15能有效抑制癌前病變,肉眼可見(jiàn)腫瘤減少,HE染色顯示癌前病變減少；最終形成的腫瘤評(píng)估發(fā)現(xiàn)TAT-N15組腫瘤數(shù)量更少,體積更小,荷瘤量更低；臨床指標(biāo)中：潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率更低,疾病活動(dòng)指數(shù)更低,結(jié)腸長(zhǎng)度更長(zhǎng)；病理改變更輕；腫瘤的增殖更低,凋亡指數(shù)更高；促炎細(xì)胞因子表達(dá)更低,抑炎細(xì)胞因子表達(dá)升高。結(jié)論：TAT-N15能有效的抑制腫瘤的癌前病變,抑制最終炎癥相關(guān)性腫瘤的生成。目的：驗(yàn)證在動(dòng)物模型中TAT-N15能有效的抑制NF-κB信號(hào)通路；觀察TAT-N15對(duì)緊密連接蛋白ZO-1表達(dá)的影響及對(duì)Treg細(xì)胞表達(dá)的影響。方法：構(gòu)建AOM/DSS誘導(dǎo)的動(dòng)物模型,驗(yàn)證TAT-N15對(duì)p-NF-κB p65表達(dá)的影響；體外LoVo細(xì)胞中證明TAT-N15對(duì)p-NF-κB p65的影響；檢測(cè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中TAT-N15對(duì)ZO-1表達(dá)的影響,體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中過(guò)表達(dá)及低表達(dá)PIK3R3檢測(cè)ZO-1的表達(dá)變化,LPS誘導(dǎo)的結(jié)腸滲透模型中檢測(cè)TAT-N15對(duì)結(jié)腸滲透能力的影響；動(dòng)物模型中,流式細(xì)胞學(xué)及免疫組化染色檢測(cè)TAT-N15對(duì)Treg細(xì)胞比例的影響。結(jié)果：在AOM/DSS誘導(dǎo)的動(dòng)物模型中,TAT-N15能有效的抑制p-NF-κB p65蛋白及p-STAT3蛋白水平,增加了ZO-1蛋白的表達(dá),同時(shí)可升高Treg細(xì)胞的比例；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,TAT-N15對(duì)p-NF-κB p65的表達(dá)水平存在時(shí)間及劑量依賴(lài)關(guān)系,能有效抑制p-NF-κB p65表達(dá),對(duì)PIK3R3本身表達(dá)無(wú)影響；LPS誘導(dǎo)的滲透試驗(yàn)中,TAT-N15能降低腸道的滲透能力。結(jié)論：TAT-N15通過(guò)抑制NF-κB通路抑制炎癥,同時(shí)增加腸道緊密連接蛋白的表達(dá),增加Treg細(xì)胞的比例保護(hù)腸道的免疫功能。
【圖文】：

ＰＩＫ３Ｒ３同樣含有ｉ－ＳＨ２結(jié)構(gòu)域，可與ｐｌｌＯ形成異源二聚體，參與ＡＫＴ的活逡逑化，發(fā)揮經(jīng)典的ＰＩ３Ｋ的功能。與其他調(diào)節(jié)亞基相比較，ＰＩＫ３Ｒ３在其Ｎ末端含有２４逡逑個(gè)氨基酸組成的結(jié)構(gòu)域（Ｎ２４），這是與其他調(diào)節(jié)亞基的唯一區(qū)別（圖１）。我們實(shí)驗(yàn)逡逑室利用分子生物學(xué)技術(shù)將ＨＩＶ病毒的ｔａｔ蛋白與Ｎ２４重組體外合成融合多膚逡逑ＴＡＴ－Ｎ２４。ＴＡＴ－Ｎ２４能特異性的阻斷ＰＩＫ３Ｒ３的Ｎ２４結(jié)構(gòu)域與其他分子的結(jié)合，成為逡逑ＰＩＫ３Ｒ３特異性的抑制}3＂１。在ＴＡＴ－Ｎ２４的基礎(chǔ)上，，我們保留了邋Ｎ２４發(fā)揮功能的粉。逡逑結(jié)構(gòu)，去除９個(gè)無(wú)關(guān)氨基酸，形成ＴＡＴ－Ｎ１５。與ＴＡＴ－Ｎ２４相比，ＴＡＴ－Ｎ１５有更高的穩(wěn)逡逑定性和更好的溶解性，同時(shí)不影響其功能。逡逑？邐ｉ邋ｐｓ。逡逑的４力口５巧化與其他調(diào)節(jié)３＾＾｜＾＾５！｜－區(qū)巧逡逑圖１邋ＰＩＫ３Ｒ３與其他調(diào)節(jié)亞基的結(jié)構(gòu)區(qū)別逡逑我們實(shí)驗(yàn)室在前期的工作中，針對(duì)ＰＩＫ３Ｒ３在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移、耐藥逡逑及血管生成等方面進(jìn)行了深入的研究［＂－２２］。在炎癥的研究中，我們發(fā)現(xiàn)ＰＩＫ３Ｒ３通過(guò)逡逑ＡＫＴ非依賴(lài)途徑影響ＮＦ－ｋＢ信號(hào)通路ｐ６５的x鎪嶧傭俳傺紫赴蜃擁謀澩镥義希校場(chǎng)玻矗�。根据晤U喬捌詰奶逋庀赴笛櫚慕峁

本文編號(hào)：2518546