【摘要】：目的:探索CA12的表達(dá)與乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞的相關(guān)性;并觀察CA12-siRNA對乳腺癌細(xì)胞凋亡以及紫杉醇敏感性的影響,試圖為紫杉醇耐藥乳腺癌細(xì)胞的治療提供新的策略。方法:體外培養(yǎng)正常乳腺細(xì)胞(MCF-10)、乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)及乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞(MCF-7TaxR),并將后兩者各自分為三組:實(shí)驗(yàn)組(CA12-siRNA)、陰性對照組(Scramble-siRNA)以及空白對照組(DMSO)1、western blot 的方法檢測 CA12-siRNA 轉(zhuǎn)染前后 MCF-10、MCF-7 及 MCF-7 TaxR中CA12的表達(dá)2、MTT法檢測MCF-7 TaxR在CA12-siRNA轉(zhuǎn)染前后紫杉醇的敏感性。3、相差顯微鏡及經(jīng)Hoechst 33342染色后,熒光倒置相差顯微鏡以及流式細(xì)胞儀檢測單純轉(zhuǎn)染siRNA及siRNA聯(lián)合紫杉醇兩種處理方法下,MCF-7及MCF-7 TaxR各組細(xì)胞凋亡情況。4、western blot檢測經(jīng)線粒體途徑介導(dǎo)的凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1、相較于MCF-10組,CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR組中高表達(dá),組間兩兩比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、經(jīng)攜帶CA12的siRNA轉(zhuǎn)染后,CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)量下降,相較于兩對照組(空白+陰性)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3、CA12-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞與紫杉醇共同培養(yǎng)48小時(shí),MCF-7 TaxR的實(shí)驗(yàn)組較兩對照組(空白+陰性)紫杉醇敏感性降低,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、CA12-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞與紫杉醇共同培養(yǎng)48小時(shí),實(shí)驗(yàn)組較兩對照組(空白+陰性)細(xì)胞凋亡數(shù)增多,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、CA12-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞與紫杉醇培養(yǎng)48小時(shí),用western blot的方法檢測線粒體通路相關(guān)蛋白的表達(dá),MCF-7 TaxR細(xì)胞的結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與兩對照組(空白+陰性)相比,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表達(dá)量明顯下調(diào),而促凋亡蛋白Bax、Bid的表達(dá)明顯增加,同時(shí)下游效應(yīng)分子caspase-9、caspase-7和PARP的活化蛋白Cleavedcaspase-7、Cleavedcaspase-9、CleavedPARP 表達(dá)也明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:CA12在乳腺癌細(xì)胞MCF-7及乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞MCF-7 TaxR中高表達(dá),表明CA12的表達(dá)與乳腺癌相關(guān),且與耐藥相關(guān)。其表達(dá)可以被CA12-siRNA特異性敲低。CA12的沉默聯(lián)合紫杉醇可以經(jīng)激活線粒體細(xì)胞凋亡通路,促使MCF-7 TaxR細(xì)胞凋亡,增加乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞對于紫杉醇的敏感性。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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1 黃婷;CA12-siRNA對乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR凋亡和耐藥的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2017年

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本文編號：2516929