【摘要】：乳腺癌(Breast Cancer,BC)是當(dāng)前一種常見的嚴(yán)重危害女性身心健康的惡性腫瘤。然而,乳腺癌具體的發(fā)病機(jī)理與分子機(jī)制至今仍尚未完全了解清楚。從分子水平進(jìn)一步了解乳腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,探索新穎有效的乳腺癌診斷方案及治療靶點(diǎn),對于乳腺癌的早期診斷及有效治療具有深遠(yuǎn)意義。微小RNA153,miRNA153,在多種腫瘤中對細(xì)胞增殖,侵襲,以及轉(zhuǎn)移過程都具有重要調(diào)控作用。我們前期的研究工作顯示miR153能有效抑制乳腺癌血管的管腔形成,但其中的機(jī)制并不完全清楚,在本研究中,我們對其進(jìn)行了進(jìn)一步的探索。為探究miR153的靶基因,我們應(yīng)用microRNA靶基因在線分析軟件,預(yù)測miRNA153可能的靶基因,我們發(fā)現(xiàn)miRNA153可能靶向ANGPT1的3'UTR。通過人工合成miR153模擬物,瞬時轉(zhuǎn)染高表達(dá)ANGPT1的細(xì)胞系MCF7,Western Blot結(jié)果顯示miR153能夠有效地下調(diào)ANGPT1蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步通過構(gòu)建ANGPT1 3'UTR雙熒光素酶報告基因載體,發(fā)現(xiàn)miR153能夠靶向ANGPT1的3,UTR,進(jìn)而調(diào)控ANGPT1的表達(dá)。我們通過在MCF7細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染miR153的模擬物,檢測到ANGPT1的下調(diào)后,用MCF7的條件培養(yǎng)基處理HUVEC細(xì)胞,再采用EdU實(shí)驗(yàn)檢測HUVEC細(xì)胞的增殖,采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測HUVEC細(xì)胞的遷移,管腔形成實(shí)驗(yàn)檢測HUVEC細(xì)胞的管腔形成能力。結(jié)果表明,miR153及ANGPT1敲低的MCF7條件培養(yǎng)基沒有明顯抑制HUVEC細(xì)胞的增殖,但對HUVEC細(xì)胞遷移以及管腔形成能力都具有顯著的抑制作用。同時,HUVEC直接轉(zhuǎn)染miR153 mimics后,其遷移能力以及管腔形成受到明顯抑制。另外,為了進(jìn)一步探索miR153是否通過靶向ANGPT1抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能,我們構(gòu)建了 ANGPT1的過表達(dá)質(zhì)粒,后期將通過穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞系,轉(zhuǎn)染miR153后收集條件培養(yǎng)基處理HUVEC細(xì)胞,檢測過表達(dá)ANGPT1對miR153功能的回復(fù)效果。綜上所述,miR153能夠靶向ANGPT1的3'UTR,進(jìn)而下調(diào)ANGPT1,可能通過該機(jī)制導(dǎo)致其對HUVEC細(xì)胞的遷移和管腔形成能力都有一定的抑制作用。本文發(fā)現(xiàn)了一個乳腺癌在血管形成方面發(fā)生發(fā)展的新的分子機(jī)制,為乳腺癌的深入研究,早期診斷以及有效治療提供了一些新的思路。
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2515533