【摘要】：目的:Talin-1是一種大分子骨架蛋白,其能促進(jìn)肝癌的進(jìn)展。然而Talin-1促進(jìn)肝癌進(jìn)展的機(jī)制目前尚無(wú)報(bào)道。本文通過(guò)人全基因芯片分析比較肝癌細(xì)胞和敲低Talin-1的肝癌細(xì)胞的全基因表達(dá)譜來(lái)分析Talin-1促進(jìn)肝癌發(fā)生發(fā)展的潛在機(jī)制。方法:分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative assay,qRT-PCR)及Western blot(WB)檢測(cè)肝癌細(xì)胞株MHCC-97L及正常肝上皮細(xì)胞LO2中Talin-1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。使用病毒轉(zhuǎn)染MHCC-97L細(xì)胞制備穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Talin-1敲低MHCC-97L細(xì)胞株(sh-Talin-1 MHCC-97L)。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)法分析比較MHCC-97L細(xì)胞和sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞的生長(zhǎng)能力;使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析比較MHCC-97L細(xì)胞和sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。使用人全基因芯片(40000個(gè)基因)分析MHCC-97L細(xì)胞和sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞中差異表達(dá)的基因;使用GO富集分析芯片數(shù)據(jù),分析Talin-1調(diào)控的生物學(xué)行為;使用Cytoscape v3.4.0制作Talin-1的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。使用GraphPad Prism 5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:MHCC-97L細(xì)胞及LO2細(xì)胞中Talin-1均有表達(dá),且Talin-1mRNA(P0.001)及蛋白(P0.001)在MHCC-97L細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于其在LO2細(xì)胞中的表達(dá)水平。Talin-1 mRNA(P0.001)及蛋白(P0.001)在MHCC-97L細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于其在sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞中的表達(dá)水平。進(jìn)一步通過(guò)全基因芯片分析發(fā)現(xiàn)在這40000個(gè)基因中,Talin-1敲低后3099個(gè)基因表達(dá)發(fā)生改變,其中1924個(gè)基因表達(dá)上調(diào),2175個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。通過(guò)GO富集分析發(fā)現(xiàn)Talin-1促進(jìn)許多HCC進(jìn)展相關(guān)的生物學(xué)行為,包括離子轉(zhuǎn)運(yùn)(相關(guān)基因:CAV3與KCNE3等),膜去極化(相關(guān)基因:CAV3與KCNE3等),細(xì)胞生長(zhǎng)(相關(guān)基因:EDN1,IGFBP5,CYR61等)及細(xì)胞粘附(相關(guān)基因:MUC1,SLAMF7,WISP1等)。最后通過(guò)檢索已發(fā)表文章和數(shù)據(jù)庫(kù)并制作Talin-1調(diào)控網(wǎng)絡(luò),我們發(fā)現(xiàn)Talin-1能調(diào)控細(xì)胞周期蛋白(如Cyclin D1,BCL-2家族和p53網(wǎng)絡(luò)),EMT相關(guān)蛋白(如E-鈣黏蛋白,N-鈣黏蛋白and vimentin)及PI3K/AKt/mTOR信號(hào)通路等的表達(dá)。結(jié)論:1、較之正常肝上皮細(xì)胞,Talin-1在MHCC-97L細(xì)胞中高表達(dá)。2、Talin-1可促進(jìn)MHCC-97L細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。3、Talin-1可促進(jìn)一系列肝癌發(fā)展相關(guān)生物學(xué)行為。4、Talin-1通過(guò)一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)參與MHCC-97L細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。
文內(nèi)圖片：
圖片說(shuō)明：Talin-1促進(jìn)MHCC-97L的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移
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圖片說(shuō)明：Talin-1在促進(jìn)MHCC-97L的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中調(diào)控的生物學(xué)行為
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Expressions of cysteine-rich61,connective tissue growth factor and Nov genes in hepatocellular carcinoma and their clinical significance[J];World Journal of Gastroenterology;2004年23期

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本文編號(hào)：2513804