【摘要】：第一部分慢性血吸蟲肝病致凝血-纖溶失衡結(jié)構(gòu)方程模型研究目的通過結(jié)構(gòu)方程模型驗(yàn)證慢性血吸蟲病患者凝血/抗凝血系統(tǒng)失衡及纖溶系統(tǒng)異常,以闡明晚期慢性血吸蟲病患者D-二聚體(D-Dimer,D-D)水平升高的發(fā)生機(jī)制。方法隨機(jī)選擇150例慢性血吸蟲病組(慢血組)患者,90例晚期慢性血吸蟲病組(晚血組)患者及69例健康對照組;采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血漿組織型纖溶酶原激活劑(tissue plasminogen activator,t PA)、尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase type plasminogen activator,uPA)、纖溶酶/抗纖溶酶復(fù)合物(plasmin-anti-plasmin complex,PAP)、纖溶酶原(plasma plasminogen,PLG)、抗凝血酶(antithrombin,AT)、纖溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI1)的含量;免疫比濁法檢測D-D含量,凝固法檢測第8因子(factorⅧ,FⅧ)活性,發(fā)色底物法檢測AT-Ⅲ、PLG、蛋白S(protein S,PS)、蛋白C(protein C,PC)活性;結(jié)合患者肝功能、凝血四項(xiàng)、肝纖維化四項(xiàng)和血常規(guī)資料分析不同組別患者凝血/抗凝血系統(tǒng)失衡及纖溶系統(tǒng)異常情況;利用AMOS軟件對“慢性血吸蟲病分期-(凝血-纖溶)-D-D”路徑機(jī)制進(jìn)行結(jié)構(gòu)方程模型的分析和驗(yàn)證。結(jié)果慢血組患者FⅧ、PAP、D-D、tPA及uPA水平明顯高于正常對照組,且晚血組明顯高于慢血組;而at-iii、蛋白c、蛋白s、at、plg和pai1水平卻明顯低于正常對照組,且晚血組明顯低于慢血組;差異均具統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。根據(jù)慢性血吸蟲病患者隨著分期與病情進(jìn)展,機(jī)體凝血/抗凝血失衡致高凝狀態(tài),進(jìn)而引起纖溶代償性亢進(jìn),最終導(dǎo)致晚期患者產(chǎn)生高水平d-d的推測理論模型建立“慢性血吸蟲病分期-(凝血-纖溶)-d-d”結(jié)構(gòu)方程模型路徑,通過最大似然法估計路徑系數(shù)。通過amos軟件模擬和計算,各參數(shù)與慢性血吸蟲病分期間具有良好的相關(guān)性,且通過卡方檢驗(yàn)(χ2=28.768,p=0.274)、擬合度分析(nfi=0.957)及路徑系數(shù)顯著性分析(p0.001),證實(shí)了該結(jié)構(gòu)方程模型收斂程度高,擬合度好,參數(shù)合理。結(jié)論通過結(jié)構(gòu)方程模型分析與驗(yàn)證,慢性血吸蟲病,尤其是晚期慢性血吸蟲病患者由于凝血/抗凝血系統(tǒng)失衡導(dǎo)致機(jī)體高凝血狀態(tài)而形成血管內(nèi)血栓,進(jìn)而引起纖溶系統(tǒng)亢進(jìn),d-d水平升高,以維持機(jī)體血流暢通,明確了慢性血吸蟲病d-d水平升高的發(fā)生機(jī)制,即慢性血吸蟲病隨著分期與病情進(jìn)展通過凝血-纖溶系統(tǒng)介導(dǎo)上調(diào)d-d水平,且纖溶系統(tǒng)在上調(diào)d-d過程中占主要優(yōu)勢,機(jī)體的纖溶狀況在一定程度上可以反映慢性血吸蟲病分期。第二部分斑蝥素抑制肝癌細(xì)胞生長的作用機(jī)制研究目的慢性血吸蟲病病情的惡化可發(fā)展成為肝癌,斑蝥素具有抗腫瘤活性,本研究旨在揭示斑蝥素對肝癌細(xì)胞系hepg2中肝癌干細(xì)胞(hepaticcancerstemcells,hcscs)細(xì)胞增殖,自我更新能力,細(xì)胞周期阻滯及凋亡的作用機(jī)制,為肝癌的靶向治療提供理論依據(jù)?方法采用微珠分選法從肝癌細(xì)胞系HepG2中分離出CD133+HCSCs,并用流式細(xì)胞法檢測CD133+表達(dá),然后用含生長因子的無血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);其次,采用MTT法檢測細(xì)胞增殖,體外成球?qū)嶒?yàn)檢測細(xì)胞自我更新,WB檢測β-catenin和cyclin D1的表達(dá),以評價細(xì)胞增殖和自我更新能力;再者,采用WB檢測組蛋白H2AX、H3,Myt1,cyclin A2,cyclin B1,p53和cdc2(Tyr 15)等細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的表達(dá),并運(yùn)用流式細(xì)胞儀評價細(xì)胞周期分布;最后,采用Annexin V/PI雙染色,運(yùn)用流式細(xì)胞儀與免疫熒光技術(shù)檢測CD133+HCSCs的細(xì)胞凋亡狀態(tài)。結(jié)果斑蝥素能抑制CD133+HCSCs的細(xì)胞活力且存在濃度和時間的依賴性(P0.05)?同時,斑蝥素能抑制CD133+HCSCs的細(xì)胞增殖和自我更新能力,用斑蝥素處理細(xì)胞48h,分別在5和20μM的濃度時對CD133+HCSCs和親代細(xì)胞的細(xì)胞增殖和自我更新能力抑制最明顯;斑蝥素可通過調(diào)控Wnt/β-catenin通路下調(diào)β-catenin和cyclin D1的表達(dá);與親代細(xì)胞相比,斑蝥素處理HCSCs 48h后可以上調(diào)H2AX,Myt1,cyclin A2,cyclin B1,p53和cdc2(Tyr 15)等細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的表達(dá)和磷酸化?流式細(xì)胞法檢測發(fā)現(xiàn)斑蝥素在5μM時可以顯著提高HCSCs G2/M期細(xì)胞數(shù)量,降低G1期細(xì)胞數(shù)量,并且也可以顯著提高CD133+HCSCs的細(xì)胞凋亡比例。結(jié)論斑蝥素可以抑制肝癌細(xì)胞系HepG2中CD133+HCSCs的細(xì)胞增殖,自我更新,促使細(xì)胞停滯于G2/M并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,為斑蝥素對肝癌的靶向治療提供了充分的理論基礎(chǔ)。
文內(nèi)圖片：
圖片說明：（A）慢性血吸蟲病凝血-纖溶系統(tǒng)失衡推測理論模型路徑圖
[Abstract]:The purpose of this study is to verify the imbalance of the coagulation/ anticoagulation system and the abnormal fibrinolytic system in the patients with chronic schistosomiasis through the structural equation model to clarify the D-dimer of the patients with advanced chronic schistosomiasis. D-D). Methods The plasma tissue type plasminogen activator (tPA) was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 150 patients with chronic schistosomiasis,90 advanced chronic schistosomiasis and 69 healthy controls. The content of urokinase-type plasminogen activator (uPA), plasmin-anti-plasmin complex (PAP), plasminogen activator inhibitor (PLG), antithrombin (AT), and plasminogen activator inhibitor 1 (PAI1). The activity of AT-鈪，

本文編號：2511996