【摘要】：背景甲狀腺乳頭狀癌是十分常見的甲狀腺惡性腫瘤。其特點(diǎn)為發(fā)病率高但預(yù)后較好。甲狀腺乳頭狀癌易發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,但由于轉(zhuǎn)移灶經(jīng)常較小,難以被術(shù)前超聲或術(shù)中觸診發(fā)現(xiàn)。因此為了降低疾病復(fù)發(fā)的可能風(fēng)險(xiǎn),相當(dāng)部分的術(shù)前未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌患者接受了預(yù)防性的中央組淋巴結(jié)清掃術(shù)。但該手術(shù)會增加喉返神經(jīng)損傷以及甲狀旁腺損傷的風(fēng)險(xiǎn)。一個(gè)新的判斷甲狀腺乳頭狀癌患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢查可以幫助檢查為陰性的患者避免進(jìn)行中央組淋巴結(jié)清掃術(shù),從而降低手術(shù)相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生率。近年來對甲狀腺乳頭狀癌的研究發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與疾病發(fā)生相關(guān)的突變,但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制和驅(qū)動基因尚未被發(fā)現(xiàn)。全外顯子組測序技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的大量單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)位點(diǎn)以及可能的基因突變。對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本進(jìn)行全外顯子組測序,既可以幫助闡明轉(zhuǎn)移的機(jī)制,又可以指導(dǎo)基于疾病相關(guān)SNP的診斷工具的開發(fā)。因此本研究的目的包括：(1)通過對甲狀腺乳頭狀癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶的全外顯子組測序獲得與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的突變與SNP；(2)解釋甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制。方法本研究納入通過術(shù)前超聲、術(shù)中觸診和術(shù)后病理檢查證實(shí)存在多個(gè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌患者,并通過手術(shù)留取腫瘤原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的標(biāo)本。通過DNA提取、純化、雜交、捕獲等步驟,對樣品進(jìn)行全外顯子組測序。對測序獲得的結(jié)果進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。最終獲得的與甲狀腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的SNP位點(diǎn)經(jīng)過多種生物信息學(xué)方法的篩選以及同已知的與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病相關(guān)的SNP數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對分析,獲得最終可能對轉(zhuǎn)移有重要意義的SNP和突變。結(jié)果共獲得來自3個(gè)患者的淋巴結(jié)及原發(fā)灶樣本共9份。外顯子組測序平均深度為122×,每個(gè)樣品獲得SNP總數(shù)超過40000個(gè)。經(jīng)過篩選以及與已知數(shù)據(jù)庫對比分析后,獲得可能與轉(zhuǎn)移相關(guān)的SNP位點(diǎn)53個(gè)。進(jìn)一步篩選得到出現(xiàn)頻率較高的SNP位點(diǎn)14個(gè)。對測序結(jié)果的分析表明,BRAF突變在淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移中可能不起主要作用。而CHEK2突變可能對該過程有重要的影響。此外,涉及PDE4DIP, SPTB, TBC1D32等多個(gè)基因的SNP改變均可能與甲狀腺乳頭狀癌的轉(zhuǎn)移相關(guān)。結(jié)論甲狀腺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶均含有大量SNP,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的SNP超過50個(gè)。CHEK2可能在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程中起到重要作用。TBC1D32、 PDE4DIP、SPTB等基因的SNP可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
[Abstract]:Background papilla thyroid carcinoma is a very common malignant tumor of thyroid gland. It is characterized by high incidence but good prognosis. Papilla thyroid carcinoma is prone to cervical lymph node metastasis, but because the metastasis is often small, it is difficult to be detected by preoperative ultrasound or intraoperative palpation. Therefore, in order to reduce the possible risk of recurrence, a considerable number of patients with papilla thyroid carcinoma who did not find lymph node metastasis before operation underwent prophylactic central group lymph node dissection. But the operation increases the risk of recurrent laryngeal nerve injury and parathyroid injury. A new examination to determine whether there is lymph node metastasis in patients with papilla thyroid cancer can help patients with negative examination avoid central group lymph node dissection, thus reducing the incidence of operation-related complications. In recent years, a number of mutations related to the occurrence of thyroid papilla carcinoma have been found, but the mechanism of lymph node metastasis and driving genes have not yet been found. A large number of single nucleotides polymorphism (Single Nucleotide Polymorphism, SNP) loci and possible gene mutations related to disease can be found by total exocrine group sequencing. The sequencing of lymph node metastases can not only help to clarify the mechanism of metastasis, but also guide the development of diagnostic tools based on disease-related SNP. Therefore, the purpose of this study is as follows: (1) the mutation related to tumor metastasis and SNP; (2) explain the possible mechanism of lymph node metastasis in papilla thyroid carcinoma by sequencing the total exocrine group of primary and metastases of papilla thyroid carcinoma. Methods thyroid papilla carcinoma with multiple lymph node metastasis was confirmed by preoperative ultrasound, intraoperative palpation and postoperative pathological examination, and the specimens of primary tumor and metastasis were retained by operation. The samples were sequenced by DNA extraction, purification, hybridization and capture. Strict quality control of sequencing results is carried out. Finally, the SNP loci related to metastasis of thyroid carcinoma were screened by various bioinformatics methods and compared with the known SNP database related to the pathogenesis of thyroid papilla cancer, and the SNP and mutation which may be of great significance to metastasis were obtained. Results A total of 9 samples of lymph nodes and primary foci were obtained from 3 patients. The average depth of sequencing was 122 脳, and the total number of SNP obtained from each sample was more than 40000. After screening and comparative analysis with known databases, 53 SNP loci which may be related to metastasis were obtained. 14 SNP loci with high frequency were obtained by further screening. The analysis of sequencing results showed that BRAF mutation might not play a major role in lymph node metastasis. CHEK2 mutation may have an important effect on this process. In addition, SNP changes involving PDE4DIP, SPTB, TBC1D32 and other genes may be related to the metastasis of papilla thyroid carcinoma. Conclusion there are more than 50 SNP associated with SNP, in both primary and lymph node metastases of thyroid carcinoma. CHEK2 may play an important role in the process of lymph node metastasis. SNP of TBC1D32, PDE4DIP,SPTB and other genes may be closely related to lymph node metastasis.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R736.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2505060