發(fā)布時(shí)間：2019-06-21 11:56

【摘要】：目的 探討趨化因子CXCR3變體(CXCR3-A和CXCR3-B)的表達(dá)及其在結(jié)直腸癌中的功能。明確其在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的調(diào)節(jié)方式,為尋找新的靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。方法 利用免疫組織化學(xué)法(IHC-P)、蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測(cè)CXCR3-A和CXCR3-B在結(jié)直腸癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)。利用CCK-8(Cell Counting Kit 8)、Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)分析CXCR3-A和CXCR3-B干預(yù)后細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)及遷移能力,利用裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)分析CXCR3-A、CXCR3-B對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞成瘤能力的影響,并利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)成瘤后組織中Ki67的表達(dá)。結(jié)果1.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)50個(gè)CRC樣本(同時(shí)取該標(biāo)本的≥5cm的癌旁組織),結(jié)果顯示,癌組織中CXCR3-A的表達(dá)明顯高于癌旁組織(P0.001),而CXCR3-B的表達(dá)水平在癌旁組織中顯著高于癌組織(P0.001)。臨床病理因素分析發(fā)現(xiàn),CXCR3-A、CXCR3-B均與結(jié)直腸癌分化、分期和轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)系(P0.001),而與患者腫瘤部位等無(wú)關(guān)(P0.05),同時(shí),CXCR3-A隨著TNM分期的變化表達(dá)增強(qiáng),而CXCR3-B降低。2.Western-blot實(shí)驗(yàn)顯示NCM460(正常腸上皮細(xì)胞)、HCT116(原位結(jié)腸癌細(xì)胞)、LS174T(原位結(jié)腸癌細(xì)胞)、SW480(原位結(jié)腸癌細(xì)胞)、SW620(結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞)、LOVO細(xì)胞系中CXCR3-A在結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞SW620(P0.001)、LOVO(P0.001)中的表達(dá)高于原位結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116(P0.01)、LS174T(P0.01)、SW480(P0.01)和正常腸上皮細(xì)胞NCM460。而CXCR3-B在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞中表達(dá)較癌及轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞中高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)顯示過(guò)表達(dá)CXCR3-A促進(jìn)HCT116和LOVO細(xì)胞增殖,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到第二天時(shí)開(kāi)始顯示差異(P0.05),最明顯的差異出現(xiàn)在第三天(P0.001)。過(guò)表達(dá)CXCR3-B顯著抑制了HCT116和LOVO細(xì)胞的生長(zhǎng)。此外,CXCR3-A和CXCR3-B對(duì)NCM460細(xì)胞增殖沒(méi)有顯著影響。CXCR3-A和CXCR3-B對(duì)細(xì)胞增殖顯示出相反的作用。4.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)表明,過(guò)表達(dá)CXCR3-A能顯著促進(jìn)HCT116(P0.01)和LOVO(P0.001)細(xì)胞侵襲。過(guò)表達(dá)CXCR3-B對(duì)HCT116和LOVO細(xì)胞侵襲具有抑制作用,但抑制不明顯。5.劃痕實(shí)驗(yàn)顯示過(guò)表達(dá)CXCR3-A促進(jìn)了HCT116(P0.001)和LOVO(P0.001)細(xì)胞的遷移,CXCR3-A和CXCR3-B之間的比較在NCM460(P0.001),HCT116(P0.001)和LOVO(P0.001)細(xì)胞中具有顯著性差異。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)與劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。6.皮下成瘤實(shí)驗(yàn)顯示,過(guò)表達(dá)CXCR3-A組腫瘤較對(duì)照組增大(P0.01),而過(guò)表達(dá)CXCR3-B組腫瘤較對(duì)照組減小(P0.01)。檢測(cè)過(guò)表達(dá)CXCR3-A腫瘤組發(fā)現(xiàn)Ki67增殖能力高于對(duì)照組(P0.001),而過(guò)表達(dá)CXCR3-B腫瘤組發(fā)現(xiàn)Ki67增殖能力低于對(duì)照組(P0.001),表明CXCR3-A、CXCR3-B對(duì)腫瘤的增殖作用不同。7.過(guò)表達(dá)CXCR3-A競(jìng)爭(zhēng)性的下調(diào)CXCR3-B的表達(dá),過(guò)表達(dá)CXCR3-B競(jìng)爭(zhēng)性的下調(diào)CXCR3-A的表達(dá)。在NCM460細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)CXCR3-A后,我們檢測(cè)到CXCR3-B下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。而在HCT116(P0.001)和LOVO(P0.01)細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)CXCR3-B后,我們檢測(cè)到CXCR3-A下調(diào)。結(jié)論趨化因子受體3(CXCR3)在結(jié)直腸癌(CRC)進(jìn)展的不同分期中發(fā)揮的作用不同。CXCR3-A與CXCR3-B在結(jié)直腸癌中可能以一種競(jìng)爭(zhēng)性的拮抗機(jī)制相互作用,在調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌的進(jìn)程中,CXCR3-A/CXCR3-B的平衡失調(diào)可能引起了CRC的增殖、浸潤(rùn)和遷移。
[Abstract]:Objective To study the expression of CXCR3 (CXCR3-A and CXCR3-B) and its function in colorectal cancer. It is clear that its regulation in the occurrence and development of colorectal cancer will lay the foundation for finding a new target point. Methods The expression of CXCR3-A and CXCR3-B in colorectal cancer tissues and cells was detected by immunocytochemical method (IHC-P) and Western-blot. The proliferation, infiltration and migration of CXCR3-A and CXCR3-B were analyzed by using CCK-8 (Cell Counter Kit 8), Transwell's experiment and scratch test. The effects of CXCR3-A and CXCR3-B on the tumor-forming ability of colon cancer cells were analyzed by subcutaneous tumor-forming in nude mice, and the expression of Ki67 in the post-tumor tissues was detected by immunohistochemical method. Results 1. The results showed that the expression of CXCR3-A in the cancer tissues was significantly higher than that in the adjacent tissues (P 0.001), while the expression level of the CXCR3-B was significantly higher in the adjacent tissues than in the adjacent tissues (P 0.001). The clinical and pathological factors showed that the CXCR3-A and CXCR3-B had a certain relationship with the differentiation, staging and metastasis of colorectal cancer (P0.001), but not related to the tumor site of the patient (P0.05), while the expression of CXCR3-A was enhanced with the change of TNM stage. And the CXCR3-B decreased.2. Western-blot analysis showed that the CXCR3-A in the lymph node metastasis of the colon cancer was SW620 (P.001) in the lymph node of the colon cancer by the NCM460 (normal intestinal epithelial cell), the HCT116 (in situ colon cancer cell), the LS174T (in situ colon cancer cell), the SW480 (in situ colon cancer cell), the SW620 (colon cancer lymph node metastasis cell), and the LOVO cell line. The expression of LOVO (P0.01) was higher than that of in situ colon cancer cell HCT116 (P0.01), LS174T (P0.01), SW480 (P0.01) and normal intestinal epithelial cell NCM460. 3. The expression of CXCR3-A on the proliferation of HCT116 and LOVO cells in the normal colonic epithelial cells was statistically significant.3. The expression of CXCR3-A in the proliferation of HCT116 and LOVO cells was shown by the proliferation of CCK-8, and the difference was observed when the cells were grown to the next day (P0.05), and the most significant difference occurred on the third day (P0.001). Overexpression of CXCR3-B significantly inhibited the growth of the HCT116 and LOVO cells. In addition, CXCR3-A and CXCR3-B have no significant effect on the proliferation of NCM460 cells. The effects of CXCR3-A and CXCR3-B on cell proliferation showed that the overexpression of CXCR3-A significantly promoted the invasion of HCT116 (P0.01) and LOVO (P0.001) cells. Overexpression of CXCR3-B has an inhibitory effect on the invasion of HCT116 and LOVO cells, but the inhibition is not obvious. The results showed that the expression of CXCR3-A promoted the migration of HCT116 (P0.01) and LOVO (P0.001) cells, and the comparison between CXCR3-A and CXCR3-B was significantly different in the cells of NCM460 (P0.001), HCT116 (P0.001) and LOVO (P0.001). The Transwell migration experiment was consistent with the results of the scratch test. The results showed that the expression of CXCR3-A group was higher than that in the control group (P0.01), while the tumor of the overexpressing CXCR3-B group was decreased in the control group (P0.01). The results showed that the proliferation of Ki67 was higher than that in the control group (P 0.001), and the expression of the CXCR3-B tumor group was lower than that of the control group (P 0.001), indicating that the proliferation of the tumor was different from that of the CXCR3-A and the CXCR3-B. The expression of CXCR3-B was down-regulated by overexpressing the CXCR3-A, and the expression of the CXCR3-A was down-regulated by the expression of the CXCR3-B. After the CXCR3-A was overexpressed in the NCM460 cell line, we detected that the CXCR3-B was down-regulated and the difference was statistically significant (P0.001). When the CXCR3-B was overexpressed in the HCT116 (P0.01) and LOVO (P0.01) cell lines, we detected that the CXCR3-A was down-regulated. Conclusion The role of chemokine receptor 3 (CXCR3) in different stages of colorectal cancer (CRC) progression is different. CXCR3-A and CXCR3-B may interact with a competitive antagonism in colorectal cancer, and in the process of regulating colorectal cancer, the balance of the CXCR3-A/ CXCR3-B may cause the proliferation, infiltration, and migration of CRC.
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2504057