【摘要】：研究目的評價DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系的質量控制,分析DC-CTL免疫治療后對原發(fā)性肝癌患者引起的免疫應答、不良反應和臨床指標的變化,探討DC-CTL免疫治療后患者生活質量狀況,為DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系的初步建立及其療效和安全性進行評估。研究方法應用本實驗室自建的DC-CTL治療體系,進行下列研究：1、選取在我院生物治療科2012年2月至2013年4月期間接受DC-CTL細胞治療的原發(fā)性肝癌病人(含肝細胞癌及肝內膽管癌)全血樣品進行研究。2、采用機器采血法采集患者外周血單個核細胞(PBMC),用CD14磁珠分選CD14+細胞,分離后在體外加入細胞因子培養(yǎng)、擴增DC細胞,用重組非增殖型腺病毒攜帶的腫瘤相關抗原(p53、hTERT、Survivin)感染DC細胞,進行多抗原負載,誘導DC成熟,并用流式細胞儀檢測DC細胞表面標記。3、用CD3磁珠分選CD3+細胞,凍存至第8天與成熟的DC細胞共培養(yǎng),誘導抗原特異性CTL,加入細胞因子擴增CTL,第14天采用流式細胞儀檢測CD69、IFN-γ、 TNF-a和IL-4水平。細胞在回輸前,進行細菌、真菌支原體和內毒素檢測。4、采用流式細胞儀檢測DC-CTL治療前后患者的全血樣品各項免疫指標變化,包括：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+和Treg。5、檢測患者DC-CTL治療前后血常規(guī)、肝腎功能、以及血清腫瘤指標變化,包括：白細胞(WBC)計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)、單核細胞計數(shù)、TBIL、DBIL、Alb、ALT、 AST, GGT、AKP、AFP、CEA、CA199和CA125。6、觀察患者接受DC-CTL治療后的不良反應,采用EORTC QLQ-C30評估患者生活質量狀況,采用Kaplan-Meier生存分析比較不同治療療程和腫瘤分期的患者間總生存時間(Overall Survival)的變化。研究結果1、DC細胞在第8天時成熟能力較好,流式細胞儀檢測DC表面標記陽性率均達到85%以上,CD80+細胞百分比為88.55±4.07,CD86+細胞百分比為91.16±7.32,CD11c+細胞百分比為95.24±4.97,CD83+細胞百分比為87.4±5.08。2、DC細胞抗原遞呈和激活T細胞免疫應答的能力較好。第14天時,流式細胞儀檢測CD69+的T細胞比例達到了90%以上。細胞因子檢測結果顯示,與Ad-Blank組相比,實驗組的IFN-y和TNF-a的水平有明顯的上升,達到了17%和19.3%,而IL-4的比例兩者均低于1%。3、細胞回輸前細菌、真菌支原體和內毒素檢測結果顯示,回輸細胞的內毒素和真菌葡聚糖水平均控制在標準范圍以內。4、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系可以顯著降低體內Treg細胞的水平。在進行DC-CTL治療前,患者的各項免疫指標與健康人具有一定差異性,其中Treg細胞比例顯著升高,經(jīng)過治療后,CD3+CD8+細胞比例有一定的上升,而Treg細胞比例顯著下降(p0.05)5、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系產(chǎn)生了一定的臨床響應。WBC、LY、Alb、GGT、 AKP五項指標在統(tǒng)計學上有顯著性差異,HCC組患者的淋巴細胞計數(shù)在治療前低于參考值,治療后有了顯著的上升,且GGT和AKP水平在治療后有了明顯的下降(p=0.011,p=0.037); ICC組患者TBIL水平在治療后有了顯著性的下降(p=0.046)。6、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系對患者的副作用小,具有一定安全性。所有患者均沒有明顯的或特殊的不良反應,多為細胞回輸后的發(fā)熱,所有患者均未出現(xiàn)過敏等情況。7、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系對患者的生活質量有一定的改善。HCC組患者中有5例QoL得分在治療后升高,4名患者生活質量未發(fā)生明顯改變,從總體來看,軀體功能得分上升,并有7名患者在氣促方面有了明顯改善。ICC組患者中有2例患者疼痛減輕,3名患者失眠有了顯著改善。8、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系對連續(xù)接受治療或TNM分期早期的患者具有更好的療效。HCC組患者中位生存期為15個月,ICC組患者中位生存期為11個月。其中有6例生存時間超過12個月,3例HCC患者生存時間超過24個月。Kaplan-Meier生存分析顯示連續(xù)接受3次以上DC-CTL治療患者的生存時間顯著長于只接受了3次以內治療的患者(p0.001),且區(qū)域淋巴結或遠端無轉移患者的生存時間長于轉移的患者(p=0.034,p=0.011)結論DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系有嚴格的質量控制,可以顯著降低體內Treg細胞的水平、改善患者免疫功能狀態(tài),提高生活質量,且對患者的副作用小,具有一定安全性。
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【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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1 ;Increased frequency and clinical significance of myeloidderived suppressor cells in human colorectal carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年25期

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本文編號：2497910