發(fā)布時(shí)間：2019-06-12 09:29

【摘要】：研究目的評(píng)價(jià)DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系的質(zhì)量控制,分析DC-CTL免疫治療后對(duì)原發(fā)性肝癌患者引起的免疫應(yīng)答、不良反應(yīng)和臨床指標(biāo)的變化,探討DC-CTL免疫治療后患者生活質(zhì)量狀況,為DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系的初步建立及其療效和安全性進(jìn)行評(píng)估。研究方法應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室自建的DC-CTL治療體系,進(jìn)行下列研究：1、選取在我院生物治療科2012年2月至2013年4月期間接受DC-CTL細(xì)胞治療的原發(fā)性肝癌病人(含肝細(xì)胞癌及肝內(nèi)膽管癌)全血樣品進(jìn)行研究。2、采用機(jī)器采血法采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),用CD14磁珠分選CD14+細(xì)胞,分離后在體外加入細(xì)胞因子培養(yǎng)、擴(kuò)增DC細(xì)胞,用重組非增殖型腺病毒攜帶的腫瘤相關(guān)抗原(p53、hTERT、Survivin)感染DC細(xì)胞,進(jìn)行多抗原負(fù)載,誘導(dǎo)DC成熟,并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC細(xì)胞表面標(biāo)記。3、用CD3磁珠分選CD3+細(xì)胞,凍存至第8天與成熟的DC細(xì)胞共培養(yǎng),誘導(dǎo)抗原特異性CTL,加入細(xì)胞因子擴(kuò)增CTL,第14天采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD69、IFN-γ、 TNF-a和IL-4水平。細(xì)胞在回輸前,進(jìn)行細(xì)菌、真菌支原體和內(nèi)毒素檢測(cè)。4、采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC-CTL治療前后患者的全血樣品各項(xiàng)免疫指標(biāo)變化,包括：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+和Treg。5、檢測(cè)患者DC-CTL治療前后血常規(guī)、肝腎功能、以及血清腫瘤指標(biāo)變化,包括：白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)、TBIL、DBIL、Alb、ALT、 AST, GGT、AKP、AFP、CEA、CA199和CA125。6、觀察患者接受DC-CTL治療后的不良反應(yīng),采用EORTC QLQ-C30評(píng)估患者生活質(zhì)量狀況,采用Kaplan-Meier生存分析比較不同治療療程和腫瘤分期的患者間總生存時(shí)間(Overall Survival)的變化。研究結(jié)果1、DC細(xì)胞在第8天時(shí)成熟能力較好,流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面標(biāo)記陽(yáng)性率均達(dá)到85%以上,CD80+細(xì)胞百分比為88.55±4.07,CD86+細(xì)胞百分比為91.16±7.32,CD11c+細(xì)胞百分比為95.24±4.97,CD83+細(xì)胞百分比為87.4±5.08。2、DC細(xì)胞抗原遞呈和激活T細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力較好。第14天時(shí),流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD69+的T細(xì)胞比例達(dá)到了90%以上。細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示,與Ad-Blank組相比,實(shí)驗(yàn)組的IFN-y和TNF-a的水平有明顯的上升,達(dá)到了17%和19.3%,而IL-4的比例兩者均低于1%。3、細(xì)胞回輸前細(xì)菌、真菌支原體和內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果顯示,回輸細(xì)胞的內(nèi)毒素和真菌葡聚糖水平均控制在標(biāo)準(zhǔn)范圍以內(nèi)。4、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系可以顯著降低體內(nèi)Treg細(xì)胞的水平。在進(jìn)行DC-CTL治療前,患者的各項(xiàng)免疫指標(biāo)與健康人具有一定差異性,其中Treg細(xì)胞比例顯著升高,經(jīng)過(guò)治療后,CD3+CD8+細(xì)胞比例有一定的上升,而Treg細(xì)胞比例顯著下降(p0.05)5、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系產(chǎn)生了一定的臨床響應(yīng)。WBC、LY、Alb、GGT、 AKP五項(xiàng)指標(biāo)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異,HCC組患者的淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在治療前低于參考值,治療后有了顯著的上升,且GGT和AKP水平在治療后有了明顯的下降(p=0.011,p=0.037); ICC組患者TBIL水平在治療后有了顯著性的下降(p=0.046)。6、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系對(duì)患者的副作用小,具有一定安全性。所有患者均沒(méi)有明顯的或特殊的不良反應(yīng),多為細(xì)胞回輸后的發(fā)熱,所有患者均未出現(xiàn)過(guò)敏等情況。7、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系對(duì)患者的生活質(zhì)量有一定的改善。HCC組患者中有5例QoL得分在治療后升高,4名患者生活質(zhì)量未發(fā)生明顯改變,從總體來(lái)看,軀體功能得分上升,并有7名患者在氣促方面有了明顯改善。ICC組患者中有2例患者疼痛減輕,3名患者失眠有了顯著改善。8、DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系對(duì)連續(xù)接受治療或TNM分期早期的患者具有更好的療效。HCC組患者中位生存期為15個(gè)月,ICC組患者中位生存期為11個(gè)月。其中有6例生存時(shí)間超過(guò)12個(gè)月,3例HCC患者生存時(shí)間超過(guò)24個(gè)月。Kaplan-Meier生存分析顯示連續(xù)接受3次以上DC-CTL治療患者的生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于只接受了3次以內(nèi)治療的患者(p0.001),且區(qū)域淋巴結(jié)或遠(yuǎn)端無(wú)轉(zhuǎn)移患者的生存時(shí)間長(zhǎng)于轉(zhuǎn)移的患者(p=0.034,p=0.011)結(jié)論DC-CTL治療原發(fā)性肝癌體系有嚴(yán)格的質(zhì)量控制,可以顯著降低體內(nèi)Treg細(xì)胞的水平、改善患者免疫功能狀態(tài),提高生活質(zhì)量,且對(duì)患者的副作用小,具有一定安全性。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Increased frequency and clinical significance of myeloidderived suppressor cells in human colorectal carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年25期

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本文編號(hào)：2497910