【摘要】：研究背景和目的：肺癌近年來(lái)已躍居成為中國(guó)乃至全世界發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤,尤其是在男性腫瘤患者中所占的比例正逐年增加。肺癌的治療效果一直不理想,主要的原因在于多數(shù)肺癌患者在就診時(shí)已出現(xiàn)了轉(zhuǎn)移,一般狀況差,治療手段少,而即使是能夠手術(shù)的早,中期患者,術(shù)后仍有部分患者需要面臨復(fù)發(fā)和(或)轉(zhuǎn)移的問(wèn)題�；熕幬锏某霈F(xiàn),曾經(jīng)使肺癌患者找到生存的希望,但是越來(lái)越多全球性的大樣本的綜合數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),在沒(méi)有經(jīng)過(guò)篩選的肺癌患者中,化療藥物對(duì)于患者的5年生存率提高不超過(guò)10%。靶向藥物治療是近年來(lái)非常熱門的治療模式,自2003年吉非替尼(針對(duì)EGFR的酪氨酸激酶抑制劑)上市以來(lái),越來(lái)越多的靶向治療藥物應(yīng)用到臨床,包括針對(duì)VEGF的貝伐珠單抗,針對(duì)ALK和ROS-1的克唑替尼等等,肺癌的治療開(kāi)啟了個(gè)體化治療的新模式。靶向藥物的使用,使肺癌患者的PFS(無(wú)疾病進(jìn)展時(shí)間)得到了明顯的改善,提高患者的生活質(zhì)量,而OS(總體生存時(shí)間)的數(shù)據(jù)仍然需要更多的大宗臨床報(bào)道進(jìn)行驗(yàn)證和補(bǔ)充。靶向治療使與肺癌相關(guān)的信號(hào)通路研究越來(lái)越受到重視,而新的信號(hào)通路的發(fā)現(xiàn)也為靶向藥物的研制提供理論基礎(chǔ)。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是近年來(lái)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面最活躍的研究領(lǐng)域之一。研究表明,MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)基因的轉(zhuǎn)錄和調(diào)控,在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、血管發(fā)生及腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用,這些研究的進(jìn)展有可能為腫瘤的治療提供新的靶點(diǎn)。從某種意義上說(shuō),腫瘤的發(fā)生反映了腫瘤細(xì)胞增殖和死亡之間平衡的失調(diào),腫瘤細(xì)胞常表現(xiàn)為抵抗凋亡和促進(jìn)增殖。生長(zhǎng)因子受體介導(dǎo)的MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是諸多信號(hào)途徑中與細(xì)胞增殖、分化密切相關(guān)的重要信號(hào)途徑之一。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是細(xì)胞外各種信號(hào)從細(xì)胞表面轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要傳遞者。在哺乳動(dòng)物中,MAPK家族的14個(gè)成員被分成了8個(gè)亞家族。包括經(jīng)典的p38 MAPK、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)、c-jun N末端激酶(JNK1/2/3)、大絲裂原活化蛋白激酶-1(ERK5/BMK1)和不經(jīng)典的ERK3、ERK4、ERK7/8和NLK等八個(gè)亞家族。這些亞族組成多條信號(hào)通路,其中p38途徑、ERK1/2途徑和JNK/SAPK途徑是研究最為廣泛和深入,也是最為重要的MAPK信號(hào)通路。Mnk (MAPK signal-integrating kinase,簡(jiǎn)稱Mnk)是p38 MAPK和ERK/MAPK信號(hào)途徑的共同的下游激酶,最開(kāi)始被認(rèn)為是ERK的亞型,分別命名為Mnk 1和Mnk2。 Mnk 1/2通過(guò)對(duì)eIF4E的磷酸化(p-eIF4E)使腫瘤細(xì)胞具有抗凋亡、促進(jìn)腫瘤相關(guān)蛋白質(zhì)合成等作用。Mnk2是Mnk1的同源結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn),Mnk2和Mnk1一樣與eIF4G結(jié)合形成復(fù)合物,通過(guò)對(duì)eIF4E第209號(hào)位點(diǎn)絲氨酸的磷酸化,使elF4E更容易與mRNA5’帽子結(jié)構(gòu)結(jié)合進(jìn)而增加mRNA的翻譯能力。與Mnkl不同的是,Mnk2通過(guò)ERK和p38MAPK a/p途徑進(jìn)行eIF4E的磷酸化,而不是p38MAPK和JNK途徑。無(wú)論是在體外還是在體內(nèi)實(shí)驗(yàn),Mnk2均比Mnk1表現(xiàn)出更高的生物活性,而且對(duì)上游p38MAPK或ERK信號(hào)通路的抑制作用相對(duì)不敏感。真核細(xì)胞翻譯起始因子(eukaryotic translation initiation factor 4E, eIF4E),是真核細(xì)胞翻譯起始和調(diào)控的核心成分,通過(guò)與mRNA5'端帽子結(jié)構(gòu)結(jié)合,在蛋白質(zhì)翻譯起始過(guò)程中發(fā)揮重要作用。研究證實(shí),在人類的多種惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)在癌組織以及癌旁組織中存在eiF4E的過(guò)度表達(dá),并且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。非小細(xì)胞肺癌包括細(xì)支氣管肺泡癌(BAC)患者p-eIF4E在癌組織細(xì)胞的表達(dá)遠(yuǎn)高于正常組織細(xì)胞,而且在NSCLC中過(guò)表達(dá)患者的5年生存率更低,p-eIF4E可以作為患者獨(dú)立的預(yù)后因素。Rosenwald等的研究發(fā)現(xiàn),eIF4E表達(dá)的增加很容易促進(jìn)支氣管肺泡癌的贅生細(xì)胞的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)。而Seki等通過(guò)對(duì)143例周圍型肺腺癌和非典型腺瘤樣增生進(jìn)行eIF4E的免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)肺腺癌組織eIF4E的表達(dá)明顯高于正常組織,而且與腫瘤的組織學(xué)和浸潤(rùn)程度相關(guān)。由于Mnk1/2是MAPK的下游激酶,其通過(guò)對(duì)elF4E的磷酸化使腫瘤細(xì)胞具有抗凋亡,促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,所以Mnk1/2的表達(dá)水平能反映出腫瘤細(xì)胞抗凋亡,侵襲,增殖等方面的能力。在乳腺癌的研究中,Mnk1/2的表達(dá)水平與HER2的過(guò)表達(dá)呈正相關(guān),是腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。但是,目前在全球范圍內(nèi)并沒(méi)有關(guān)于Mnk1/2與肺癌方面的相關(guān)詳細(xì)報(bào)道,是否與在乳腺癌的研究中一樣,Mnk1/2高表達(dá)與細(xì)胞的增殖,侵襲,抗凋亡的能力相關(guān)；Mnk1/2蛋白表達(dá)水平與臨床病例特征的關(guān)系如何,能否成為肺癌的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素,這些都需要進(jìn)行更深入的研究。由于Mnk2(主要是Mnk2A)較Mnk1有更高的生物活性,且在我們前期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在腫瘤標(biāo)本及肺癌細(xì)胞株中Mnk2有更高的表達(dá)水平,所以是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)也是我們的研究重點(diǎn)。我們擬通過(guò)對(duì)石蠟切片,非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株以及移植瘤動(dòng)物模型三個(gè)方面對(duì)Mnk2進(jìn)行檢測(cè),了解Mnk2在非小細(xì)胞肺癌中對(duì)預(yù)后的提示意義及其分子基礎(chǔ)。第一章Mnk2蛋白表達(dá)水平與患者術(shù)后生存率及臨床病理特征的關(guān)系研究方法：收集2006年10月至2009年6月經(jīng)廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院診斷的367例非小細(xì)胞肺癌病例的組織標(biāo)本及其中117例癌旁正常肺組織。所有標(biāo)本經(jīng)常規(guī)HE染色,選取合適區(qū)域制作組織芯片蠟塊,經(jīng)免疫組化二步法檢測(cè)MNK2蛋白的表達(dá)水平,按細(xì)胞著色范圍及強(qiáng)度,根據(jù)中位數(shù)將MNK2表達(dá)水平分為低表達(dá)組及高表達(dá)組。研究結(jié)果：1.Mnk2蛋白表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞的胞漿,相對(duì)于癌旁組織,肺癌組織中Mnk2的蛋白表達(dá)水平明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(log-rank test, t=-11.397, P0.001)。2.在367例非小細(xì)胞肺癌組織中,Mnk2蛋白高表達(dá)的有220例,高表達(dá)率為59.5%(220/367)�；颊叩�5年總生存(OS)比率為45.74%,5年無(wú)病生存率(DFS)為43.83%。3.Mnk2低表達(dá)組(n=147)和高表達(dá)組(n=220)的OS比率分別為60.39%和36.01%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2=16.382, P0.001); DFS比率分別為57.26%和35.04%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2= 16.982, P0.001)。4.在早中期病例中(Ⅰ+Ⅱ期),Mnk2表達(dá)水平與病人預(yù)后有顯著相關(guān)性,Mnk2低表達(dá)組(n=102)和高表達(dá)組(n=131)的5年生存率分別為67.43%和51.54%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2=5.123, P=0.024);5年無(wú)病生存率分別為66.30%和50.42%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2=5.058, P=0.025, P=0.025)。5.在晚期病例中(Ⅲ+Ⅳ期),Mnk2低表達(dá)組(n=45)和高表達(dá)組(n=89)的5年生存率分別為44.44%和13.18%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2=9.192, P=0.002);5年無(wú)病生存率分別為36.02%和12.56%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2=11.083, P=0.001)。6.在肺腺癌中,Mnk2低表達(dá)組(n=88)和高表達(dá)組(n=154)的5年生存率分別為61.22%和34.00%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2-12.255, P0.001);5年無(wú)病生存率分別為57.79%和33.09%,兩組有顯著性差異(log-rank test, X2=12.041, P=0.001);而在肺鱗狀細(xì)胞癌及大細(xì)胞癌中,Mnk2表達(dá)水平與患者術(shù)后生存率及無(wú)病生存率均沒(méi)有相關(guān)性(P0.05)。7.對(duì)367例病例行COX單因素回歸分析表明,MNK2 (P0.001, log-rank test)、年齡(P=0.017, log-rank test)、T分期(P=0.003, log-rank test)、N分期(P0.001,log-rank test)及臨床分期(P0.001, log-rank test)均是非小細(xì)胞肺癌預(yù)后不良的指標(biāo)。8.COX多重回歸分析表明,Mnk2高表達(dá)(Hazard ratio= 1.832,95% confidence interval:1.358-2.472, P=0.003)、N分期(Hazard ratio=3.275,95% confidenceinterval:2.437-4.401, P0.001)分別是非小細(xì)胞肺癌預(yù)后不良的獨(dú)立指標(biāo)之一。9.在367例病例中,應(yīng)用X2檢驗(yàn)分析顯示,Mnk2的表達(dá)水平與N分期有顯著相關(guān)性(P=0.008),而與年齡、性別、臨床分期、組織類型、吸煙及T分期沒(méi)有相關(guān)性(P0.05)。10.檢測(cè)174例非小細(xì)胞肺癌組織芯片的MNk2、eIF4E及P-eIF4E的蛋白表達(dá),應(yīng)用相關(guān)性Pearson correlation統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果顯示Mnk2與eIF4E(r=0.216, P=0.006)、P-eIF4E (r=0.241, P=0.002)的蛋白表達(dá)具有正性相關(guān),MNK高表達(dá)伴隨著eIF4E及P-eIF4E的高表達(dá),MNK2低表達(dá)伴隨著eIF4E及P-eIF4E的低表達(dá)。研究結(jié)論：1.Mnk2在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞組織中高表達(dá),Mnk2蛋白定位于腫瘤細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞的胞漿。2.367例非小細(xì)胞肺癌患者M(jìn)nk2高表達(dá)組的生存率明顯低于低表達(dá)組：3.臨床分期Ⅰ-Ⅱ期(早,中期)及Ⅲ-Ⅳ期(中,晚期)非小細(xì)胞肺癌中Mnk2的表達(dá)水平與患者預(yù)后顯著相關(guān)；4.肺腺癌中Mnk2的表達(dá)水平與患者預(yù)后顯著相關(guān)；5.Mnk2高表達(dá)和N分期分別是非小細(xì)胞肺癌預(yù)后不良的獨(dú)立指標(biāo)之一;6.Mnk2的表達(dá)水平與N分期有顯著相關(guān)性,而與年齡、性別、臨床分期、組織類型、吸煙及T分期沒(méi)有相關(guān)性。7.MNK2與eIF4E、P-eIF4E的蛋白表達(dá)具有正性相關(guān)。提示MNK2在MAPK通路中可能通過(guò)eIF4E及磷酸化eIF4E起作用。第二章MNK2在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中的表達(dá)及沉默后體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)研究方法：1.選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549、NCI-H460、NCI-H1975、 NCI-H520、NCI-H1650、SPC-A-1)以及正常支氣管上皮細(xì)胞株16HBE,采用熒光定量PCR方法檢測(cè)各細(xì)胞株中Mnk2的表達(dá)水平；2.Mnk2基因沉默采用化學(xué)合成的siRNA序列,序列為：sense 5'UCGUCAAGAUCAUUGAGAATT--3'及 anti-sense5'-UUCUCAAUGAUCUUGACGGTT-3',轉(zhuǎn)染A549, NCI-H460及NCI-H1975細(xì)胞株;3.使用Mnk2-siRNA和Negative control進(jìn)行細(xì)胞體外功能實(shí)驗(yàn),包括：CCK細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),平板克隆形成實(shí)驗(yàn)以及Transwell小室體外遷移實(shí)驗(yàn)；研究結(jié)果：1.在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549、NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H520、SPC-A-1、 NCI-H1650)及正常支氣管上皮細(xì)胞株(16HBE)中,NCI-H1975的Mnk2表達(dá)水平最高。應(yīng)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)表明與16HBE相比,Mnk2-mRNA在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H520、A549及SPC-A-1中高表達(dá)(P0.05, Independent-Samples t test)。單因素方差分析方差齊性檢(LSD)顯示MNK2在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株及正常支氣管上皮細(xì)胞株中的表達(dá)有顯著差異(P*0.001,F*值=43.494,)。2.免疫熒光檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549、H1975、H460、SPC-A-1、H1650)及正常支氣管上皮細(xì)胞株(16HBE)中Mnk2的蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示Mnk2在H1975、H460、A549三個(gè)細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào)。而相對(duì)于16HBE,在SPC-A-1、H1650細(xì)胞中的表達(dá)降低。3.免疫印跡檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H1975、H460、SPC-A-1、H1299、H1650)及正常支氣管上皮細(xì)胞株(16HBE)中Mnk2的蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示Mnk2在H1975、H460、A549、H1299四個(gè)細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào)。而相對(duì)于16HBE,在SPC-A-1、H1650細(xì)胞中的表達(dá)下調(diào)。4.采用熒光定量RT-PCR檢測(cè)A549細(xì)胞中Mnk2-siRNA組及Negative control組中Mnk2的表達(dá)水平顯示：Mnk2在Mnk2-siRNA組中的表達(dá)水平明顯低于Negative control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-13.742,P0.001,Independent-Samples t test);5.采用熒光定量RT-PCR檢測(cè)NC-H460細(xì)胞中Mnk2-siRNA組及Negative control組中Mnk2的表達(dá)水平顯示：Mnk2在Mnk2-siRNA組中的表達(dá)水平明顯低于Negative control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-15.179,P0.001)；6.采用熒光定量RT-PCR檢測(cè)NCI-H1975細(xì)胞中Mnk2-siRNA組及Negative control組中Mnk2的表達(dá)水平顯示：Mnk2在Mnk2-siRNA組中的表達(dá)水平明顯低于Negative control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=--44.946,P0.001)；7.采用CCK8法檢測(cè)Mnk2在A549細(xì)胞的體外增殖能力。與Negative control組相比,Mnk2-siRNA組在第1、2、3、4天兩組間的細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05, Independent-Samples t test);8.采用CCK8法檢測(cè)Mnk2在NCI-H460細(xì)胞的體外增殖能力。與Negative control組相比,Mnk2-siRNA組在第2、3、4、5天兩組間的細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05, Independent-Samples t test);9.采用CCK8檢測(cè)Mnk2在NCI-H1975細(xì)胞的體外增殖能力。與Negative control組相比,Mnk2-siRNA組在第1、2、3、4、5天兩組間的細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05, Independent-Samples t test);10.利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549/Mnk2-siRNA細(xì)胞組及A549/Negative control細(xì)胞組體外增殖能力的變化,A549/Mnk2-siRNA細(xì)胞組的克隆形成數(shù)為24±4.041, A549/Negative control細(xì)胞組克隆形成數(shù)為164±5.132,兩組細(xì)胞間克隆形成能力的差異有顯著差異(t-=36.946,P0.001,Independent-Samples t test);11.利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NCI-H460/Mnk2-siRNA細(xì)胞組及NCI-H460/Negative control細(xì)胞組體外增殖能力的變化,NCI-H460/Mnk2-siRNA細(xì)胞組的克隆形成數(shù)為55±7.00, NCI-H460/Negative control細(xì)胞組克隆形成數(shù)為147±6.557,兩組細(xì)胞間克隆形成能力的差異有顯著差異(t=-16.613, P0.001, Independent-Samples t test);12.利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NCI-H1975/Mnk2-siRNA細(xì)胞組及NCI-H1975/Negative control細(xì)胞組體外增殖能力的變化NCI-H1975/Mnk2-siRNA細(xì)胞組的克隆形成數(shù)為31±4.583,NCI-H 1975/Negative control細(xì)胞組克隆形成數(shù)為118±6.000,兩組細(xì)胞間克隆形成能力的差異有顯著差異(t=-19.959, P0.001, Independent-Samples t test);13.采用Transwell小室的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染Mnk2-siRNA或negative control后,A549細(xì)胞體外遷移能力的變化。與negative control組相比,Mnk2-siRNA組穿膜細(xì)胞數(shù)少于negative control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-6.360,P=0.003,Independent-Samples t test);14.采用Transwell小室的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染Mnk2-siRNA或negative control后,NCI-H460細(xì)胞體外遷移能力的變化。與negative control組相比,Mnk2-siRNA組穿膜細(xì)胞數(shù)少于negative control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-12.932, P0.001, Independent-Samples t test);15.采用Transwell小室的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染Mnk2-siRNA或negative control后,NCI-H1975細(xì)胞體外遷移能力的變化。與negative control組相比,Mnk2-siRNA組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯少于negative control組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-5.480, P=0.005, Independent-Samples t test).研究結(jié)論：1.在肺癌細(xì)胞株中,Mnk2的表達(dá)水平明顯高于正常支氣管上皮細(xì)胞,提示Mnk2是肺癌信號(hào)通路中被激活的一類蛋白；2.在轉(zhuǎn)染了Mnk2-siRNA的肺癌細(xì)胞株中,細(xì)胞增殖,細(xì)胞克隆能力及體外遷移能力受到抑制,提示Mnk2是惡性腫瘤發(fā)生,發(fā)展,侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因素之一。第三章Mnk2沉默后的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方法：1.通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染A549及NCI-H460細(xì)胞的方法構(gòu)建Mnk2-shRNA-A549及Mnk2-shRNA-H460;2.選用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549和NCI-H460細(xì)胞,轉(zhuǎn)染慢病毒Mnk2-shRNA或negative control后使用DMEM培養(yǎng)基稀釋到濃度為2×106/ml及3×106/ml;3.將細(xì)胞分別注射于裸鼠脅腹側(cè),4天后開(kāi)始觀察腫瘤大小,每3天記錄一次,在適當(dāng)時(shí)候處死裸鼠,剔出瘤體并稱重,行石蠟包埋切片并行HE染色,顯微鏡下觀察。4.將細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入裸鼠體內(nèi),接種3天后觀察裸鼠狀態(tài),30天時(shí)處死裸鼠,取肝臟組織觀察其表面成瘤數(shù)目。研究結(jié)果：1.在注射的A549細(xì)胞株的各7只裸鼠中,NC組的所有裸鼠均成瘤,Mnk2-shRNA組只有6只(85.7%)裸鼠成瘤,成瘤時(shí)間在第10天后。兩組成瘤速度統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異P0.05,Independent-Samples t test)。處死裸鼠后,A549細(xì)胞株Mnk2-shRNA組瘤重0.05±0.049g,小于NC組瘤重(0.149±0.722g)(t=-2.976, P=0.012, two-independent t test);2.在注射的NCI-H460細(xì)胞株的各7只裸鼠中,NC組的所有裸鼠均成瘤,Mnk2-shRNA組只有6只(85.7%)裸鼠成瘤,成瘤時(shí)間在第7天后。Mnk2-shRNA組的成瘤速度比NC組成瘤速度慢,但兩組的成瘤速度之間除了第7天統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P=0.031, Independent-Samples t test)之外,之后的腫瘤體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05, Independent-Samples t test)。處死裸鼠后,NCI-H460細(xì)胞株Mnk2-shRNA組瘤重0.217±0.152g,小于NC組瘤重(0.343±0.078g),但統(tǒng)計(jì)學(xué)沒(méi)意義(t=-1.947, P=0.075, Independent-Samples t test);3.在注射A549細(xì)胞株的各5只裸鼠中,Mnk2-shRNA組的所有裸鼠肝臟轉(zhuǎn)移瘤數(shù)(3±1個(gè))比NC組的肝臟轉(zhuǎn)移瘤數(shù)(10±3個(gè))明顯減少,兩組成瘤速度統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(t=-5.259, P=0.001, Independent-Samples t test);4.在注射的NCI-H460細(xì)胞株的各6只裸鼠中,Mnk2-shRNA組的所有裸鼠肝臟轉(zhuǎn)移瘤數(shù)(4±1個(gè))比NC組的肝臟轉(zhuǎn)移瘤數(shù)(19±11個(gè))明顯減少。兩組成瘤速度統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(t=-3.415, P=0.018, Independent-Samples t test)。研究結(jié)論：1.在皮下注射轉(zhuǎn)染了Mnk2-shRNA的A549細(xì)胞株后能顯著抑制裸鼠皮下成瘤的速度,提示針對(duì)Mnk2的基因沉默能抑制腫瘤的生長(zhǎng),但是在NCI-H460細(xì)胞中沒(méi)有得到預(yù)期的結(jié)果,需要更多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)去進(jìn)一步說(shuō)明；2.在尾靜脈注射轉(zhuǎn)染Mnk2-shRNA的A549和NCI-H460細(xì)胞株能夠抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移能力,提示針對(duì)Mnk2的基因沉默能抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移；
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2497665