【摘要】：第一部分UCA1在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)研究目的:在結(jié)直腸癌組織中檢測(cè)尿路上皮癌相關(guān)基因1(Urothelial carcinoma associated 1,UCA1)的表達(dá)水平,并分析其與臨床病理因素和預(yù)后的關(guān)系。方法:實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)直腸癌組織中UCA1的表達(dá)水平,比較結(jié)直腸癌組織及其配對(duì)正常組織中UCA1的表達(dá)差異。分別收集并整理90例病例的臨床病理信息及預(yù)后資料,首先通過(guò)Logistic回歸分析UCA1表達(dá)水平對(duì)臨床病理因素的影響。接下來(lái)采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線,Log-Rank方法比較UCA1高表達(dá)組和低表達(dá)組之間的生存率,最后采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析,以確定在多因素作用下UCA1對(duì)預(yù)后的影響。結(jié)果:檢測(cè)90例結(jié)直腸癌組織及其配對(duì)正常組織中UCA1的表達(dá),進(jìn)一步證實(shí)UCA1在結(jié)直腸癌中表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01),有約59%左右的結(jié)直腸癌組織中UCA1表達(dá)上調(diào)2倍以上。UCA1高表達(dá)患者表現(xiàn)出更差的預(yù)后(P=0.0026),且結(jié)直腸癌腫瘤組織中UCA1的高表達(dá)與腫瘤大小(P=0.010),腫瘤浸潤(rùn)深度(P=0.041)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.035)呈正相關(guān)。UCA1(HR=2.395,95%CI=1.044-5.495,P=0.039)和腫瘤轉(zhuǎn)移(HR=3.004,95%CI=1.310-6.899,P=0.009)是結(jié)直腸癌患者生存的獨(dú)立預(yù)后因素。結(jié)論:UCA1在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá),并與病床病理因素及預(yù)后相關(guān)。UCA1是結(jié)直腸癌患者生存的獨(dú)立預(yù)后因素。第二部分UCA1在結(jié)直腸癌中的功能研究目的:在體外細(xì)胞水平明確UCA1對(duì)于結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、耐藥等生物學(xué)表型的影響。同時(shí)在體內(nèi)動(dòng)物水平驗(yàn)證UCA1對(duì)于腫瘤形成的影響。方法:通過(guò)CCK-8和克隆形成,探討UCA1過(guò)表達(dá)或表達(dá)抑制后對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力及5-FU耐藥的影響。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UCA1對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。構(gòu)建裸鼠成瘤模型探討UCA1在體內(nèi)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞成瘤能力的影響。結(jié)果:沉默UCA1表達(dá)后細(xì)胞的增殖能力明顯降低;而過(guò)表達(dá)UCA1后細(xì)胞的增殖能力明顯增加�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UCA1能夠增加結(jié)直腸癌細(xì)胞克隆形成能力。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)證明沉默UCA1能夠抑制結(jié)直腸癌體內(nèi)細(xì)胞增殖;過(guò)表達(dá)UCA1能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌體內(nèi)細(xì)胞增殖。在UCA1敲降的和過(guò)表達(dá)的細(xì)胞中,加入不同濃度的5-FU(0.5、1.0、2.0、4.0、10.0和50.0μg/m L)。48小時(shí)后通過(guò)CCK-8測(cè)定細(xì)胞活性,可見(jiàn)敲降UCA1能夠明顯增加HCT116細(xì)胞對(duì)5-FU的藥物敏感性;過(guò)表達(dá)UCA1能夠明顯降低SW480細(xì)胞對(duì)5-FU的藥物敏感性。通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡情況,可見(jiàn)敲降UCA1能夠明顯增加凋亡細(xì)胞比例;而過(guò)表達(dá)UCA1能夠明顯降低凋亡細(xì)胞比例。結(jié)論:UCA1能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞體外和體內(nèi)的細(xì)胞增殖。UCA1能夠通過(guò)減少凋亡降低結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)5-FU的藥物敏感性。第三部分UCA1促癌機(jī)制研究目的:在結(jié)直腸癌組織中探討UCA1通過(guò)何種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及對(duì)5-FU耐藥。方法:雙熒光素酶激活實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證UCA1和mi R-204-5p是否通過(guò)MRE相結(jié)合。RNA免疫沉淀法(RNA immunoprecipitation,RIP)利用Ago2抗體捕獲Ago2蛋白及與其結(jié)合的RNA,然后通過(guò)實(shí)時(shí)RT-PCR的方法檢測(cè)UCA1和mi R-204-5p的含量。雙熒光素酶激活實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CREB1是否是mi R-204-5p的靶基因。雙熒光素酶激活實(shí)驗(yàn)和Western blot驗(yàn)證UCA1對(duì)mi R-204-5p的靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表達(dá)調(diào)控。最后通過(guò)免疫組化檢測(cè)CREB1在CRC組織中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:雙熒光素酶激活實(shí)驗(yàn)和RNA免疫沉淀證實(shí)mi R-204-5p能夠和UCA1通過(guò)mi RNA的核糖核蛋白復(fù)合物中的Ago2蛋白相結(jié)合。UCA1能夠通過(guò)海綿吸附mi R-204-5p上調(diào)其靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表達(dá)。我們還發(fā)現(xiàn)CREB1作為mi R-204-5p的一個(gè)新的靶基因在結(jié)直腸癌中表達(dá)上調(diào)并與患者不良預(yù)后相關(guān)。結(jié)論:UCA1能夠通過(guò)海綿吸附mi R-204-5p上調(diào)其靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表達(dá),從而促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖及對(duì)5-Fu的耐藥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2474187